Simmons Citrat Agar

Pseudomonas -Fluorescens in Simmons Citrat -Agar. Quelle: Ein Zweifel, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Was ist Simmons Citrat Apar?

Er Simmons Citrat Agar Es ist ein festes Medium, das als biochemischer Test zur Identifizierung von Mikroorganismen, insbesondere gram -negativen Bacilli. Das ursprüngliche Medium wurde von Koser 1923 erstellt.

Kosers Citrat -Medium bestand aus einer Brühe, die Natriumphosphat, Ammoniumphosphat, monopotones Phosphat, Magnesiumsulfat und Natriumcitrat enthielt.

Wie zu sehen ist, ist die einzige Kohlenstoffquelle im Medium Citrat, und Stickstoff ist Ammoniumphosphat, wobei Proteine ​​und Kohlenhydrate als Quelle dieser Elemente weggelassen werden, die häufig in anderen Medien vorhanden sind.

Daher kann sich die inokulierten Bakterien in diesem Medium nur vermehren, wenn es den Kohlenstoff des Citrats einnehmen kann. Der Test war positiv, wenn es in der Mitte Trübung gab. Ich hatte jedoch die Unannehmlichkeiten, dass eine nicht spezifische Trübung auftreten könnte.

Dieses Problem wurde von Simmons gelöst, indem Kosers ursprüngliche Formel Bromotimol -Agar hinzugefügt wurde. Obwohl das Prinzip das gleiche ist, wird es anders interpretiert.

Basis

Einige Bakterien haben die Fähigkeit, ohne Fermentation oder Produktion von Milchsäure zu überleben und durch die Verwendung anderer Substrate Energie zu erreichen. In diesem Test ist die einzige angebotene Kohlenstoffquelle Citrat.

Bakterien, die unter diesen Bedingungen überleben können.

Der Katabolismus von Citrat durch Bakterien umfasst einen enzymatischen Mechanismus ohne die Intervention von Coenzym an. Dieses Enzym ist unter dem Namen Citrica (Citrat Oxalacetat-liasa) oder dem Abbruch Citrat bekannt. Die Reaktion erfordert das Vorhandensein eines bivalenten Kation, das in diesem Fall von Magnesium geliefert wird.

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Die Reaktion erzeugt Oxaloacetat und Pyruvat, die dann in der Mitte eines alkalischen pH -Werts organischer Säuren führen, der durch die Verwendung der Stickstoffquelle gebildet wird. Diese organischen Säuren werden als Kohlenstoffquelle verwendet, die Carbonate und Bicarbonate erzeugt, wodurch das Medium weiter alkalisiert wird.

Soward -Modus

Das Simmons Citrat-Medium muss mit gerader oder nadel leicht im Fischschwanz geimpft werden und 24 Stunden bis 35-37 ° C inkubiert werden. Gipfelte die Zeit, in der die Ergebnisse beobachtet werden.

Das Sänen erfolgt nur auf der Oberfläche des Agars ohne Stich.

Deutung

Wenn das Medium die ursprüngliche Farbe (grün) ist und es kein sichtbares Wachstum gibt, ist der Test negativ, aber wenn das Medium blau ändert. In diesem Fall ist der Test positiv.

Dies geschieht, denn wenn die Bakterien den Kohlenstoff des Citrats verwenden, kann es auch den Stickstoff aus dem Ammoniumphosphat nehmen, mit dem es Ammoniak freisetzt, wodurch das Medium alkalisiert wird.

Andererseits muss der Test auch als positiv angesehen werden Kohlenstoffquelle, obwohl es zu diesem Zeitpunkt keine pH -Wertänderung gibt (manchmal kann es dauern).

Wenn Zweifel an der Interpretation der endgültigen Farbe sind, kann sie mit einem ungebundenen Citratrohr verglichen werden.

Vorbereitung

Wiegen Sie 24,2 g des dehydrierten Mediums für einen Liter Wasser. Mischen und bei ca. 5 Minuten lassen. Beenden Sie das Lösen des mittleren Erhitzens für 1 oder zwei Minuten und winken häufig.

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Servieren Sie 4 ml in Test- und Autoklavarrohre bei 121 ° C 15 Minuten. Beim Verlassen des Autoklaven mit Hilfe einer Unterstützung, so dass der Agar in Form eines Flötenpeaks mit wenig Taco oder Hintergrund und mehr Lünette verfestigt wird.

Der letzte pH -Wert des mittleren Citrats beträgt 6,9 (grüne Farbe). Dieses Medium ist sehr empfindlich gegenüber pH -Veränderungen.

Ein pH 6 oder unten, das Medium wird zu einer gelben Farbe. Diese Farbe wird im Bakterientest nicht beobachtet.

Und bei pH 7,6 oder höher ändert sich das Medium in Blau intensiver Preußen.

Verwenden

Simmons Citrat -Agar wird verwendet, um bestimmte Mikroorganismen zu identifizieren, insbesondere Bazillen zur Familie Enterobacteriaceae und anderen nicht fertigen Glukosespaziergängen.

Schlussbetrachtungen

Das Simmons Citrat -Medium ist ein sehr empfindlicher Test, da falsch positive Ergebnisse erhalten werden können, wenn einige Fehler gemacht werden.

Die Sorgfalt, die angenommen werden muss, sind die folgenden:

Inokulo

Ein sehr dickes oder beladenes Bakterieninokulum sollte nicht durchgeführt werden, da es dazu führen kann. Es bedeutet nicht, dass eine Beweispositivität ist. 

Ebenso kann ein dickes Inokulum ein falsches Positiv erzeugen, da vorgeformte organische Verbindungen innerhalb der Zellwände von morboundarischen Bakterien genügend Kohlenstoff und Stickstoff freisetzen können, um den pH -Indikator zu drehen.

Daher besteht das Ideal darin, die Nadel anstelle des Platingriffs zu säen, um überschüssiges Material zu vermeiden.

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Gesät

Wenn sich die Batterie der biochemischen Tests zur Identifizierung des fraglichen Mikroorganismus säen, ist es wichtig, dass der Citrat -Test der erste ist, der impft, um den Luftwiderstand von Protein oder Kohlenhydraten aus einem anderen Medium zu vermeiden.

Unter diesen Umständen ist es möglich, ein falsch positiv.

Eine andere Möglichkeit, das Ziehen des Substanzes zu vermeiden, besteht darin, den Griff zu verbrennen und ein neues Inokulum zwischen einem Test und einem anderen zu führen.

Es muss auch darauf geachtet werden, dass die Kolonie berührt wird, um das Inokulum durchzuführen.

In diesem Sinne empfehlen Matssen, Sherris und Branson, das Inokulum in physiologischer Lösung zu verdünnen, bevor der Citrat -Test inokuliert, um die Übertragung anderer Kohlenstoffquellen zu vermeiden.

Farbintensität

Es sollte berücksichtigt werden.

Darüber hinaus gibt es Mikroorganismen, die nach 24 Stunden positiv sind, aber es gibt andere Stämme, die 48 Stunden oder mehr benötigen, um eine pH -Änderung zu erzeugen.

Verweise

1. Bbl Simmons Citrat Agar Slants. BD erholte sich.com.
2. Simmons Citrat Agar. Von Britanialab geborgen.com.