Agar Count Standard Foundation, Vorbereitung und Verwendung

Er Agarstandard Es ist ein solides, nicht -selektives Kulturmedium, das für die Quantifizierung der aeroben mikrobiellen Last in Verbrauchergewässern, Abwasser und Milchgetränken unter anderem ausgelegt ist. Dieses Medium ist auch als PCA -Agar bekannt) für sein Akronym in englischer Platte -Agar -Agar. Es wurde 1953 von Buchbinder, Baris und Goldstein erstellt.

Das Standardkonto -Medium besteht aus Hefeextrakt, Triptein, Glukose, Agar und destilliertem Wasser. Diese Formulierung enthält Ernährungsgrundelemente, die die Entwicklung der vorliegenden, von UN anspruchsvollen aeroben mikrobiellen Last ermöglichen.

Dezimalverdünnungen für die UFC -Zählstandardzahl. Quelle: Quentin Geissmann [CC BY-SA 3.0 (https: // creativecommons.Org/lizenzen/by-sa/3.0)]]

Da das Medium keine Inhibitoren enthält, können sich Bakterien ohne Beschränkungen entwickeln, daher ist es ideal für die allgemeine Anzahl der Kolonien. Die Plaque -Quantifizierungstechnik erfasst jedoch nicht alle vorhandenen Bakterien, sondern nur diejenigen, die unter den Umweltbedingungen wachsen können, denen der Agar ausgesetzt ist.

In diesem Sinne wird die Plaque -Quantifizierungstechnik normalerweise durch die Menge an bakterien vom Aeroben mesophilen Typen bestimmt, dh solche, die bei Temperaturen zwischen 25 und 40 ° C entwickelt werden, mit einer optimalen Wachstumstemperatur bei 37 ° C.

Diese bakterielle Gruppe ist sehr wichtig, da es für den Menschen die meisten pathogenen Bakterien gibt.

Es ist zu beachten, dass das Interesse manchmal die Menge an psychrophilen Bakterien quantifiziert, die in Lebensmitteln vorhanden sind. Diese Bakterien sind solche, die sich bei niedrigen Temperaturen entwickeln (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Ebenso kann thermophile Bakterien, die sich in einem Bereich zwischen 50 ° C bei 80 ° C oder mehr entwickeln, bei bestimmten Arten von Lebensmitteln wie Dosen wichtig sein.

Die mikrobielle Quantifizierung wird in Dickdarmbildungseinheiten (UFC) pro Gramm oder Proben Milliliter ausgedrückt.

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Basis

Das Standardkonto ist so konzipiert, dass die zufriedenstellende Entwicklung von nicht absorbierenden aeroben Bakterien ermöglicht, da Hefeextrakt, Triptein und Glucose die notwendigen Nährstoffe für eine gute mikrobielle Entwicklung liefern.

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Andererseits hat das Medium eine helle Farbe und ein transparentes Erscheinungsbild, daher ist es ideal für die Visualisierung der Kolonien, die durch die in -Depth -Sädermethode entwickelt wurden (Plattenverschüttung).

Es ist auch möglich.

Wenn die mikrobielle Belastung hoch ist, muss Dezimalverdünnungen der untersuchten Stichprobe hergestellt werden, um die UFC -Zählung auszuführen.

Es ist zu beachten, dass dieses Medium von der American Public Health Association (APHA) für die Aerobic Messophils Count empfohlen wird.

Vorbereitung

Wiegen Sie 23,5 g des dehydrierten Medium. Um die Mischung vollständig aufzulösen, sollte durch häufiges Winken erhitzt werden, bis sie kocht. Die folgenden Schritte hängen von der gepflanzten Technik ab, die verwendet wird.

Für die Plattentechnik

Verteilen Sie 12 bis 15 ml in Reagenzgläser. Anschließend sterilisieren Sie im Autoklav bei 121 ° C 15 Minuten. Lassen Sie sich vertikal in Form eines Taco festigen. Sparen bis zur Verwendung.

Schmelzen Sie den Taco, wenn es verwendet wird. Sobald Sie es in Maria auf 44-47 ° C behalten können, während die Proben hergestellt werden.

Für Oberflächen gesät

Sterilisieren Sie das Medium in Autoklav bei 121 ° C und verteilen Sie dann 20 ml in Petrisch -Sterilplatten. Bis zum Gebrauch festigen, investieren und im Kühlschrank sparen lassen.

Temperieren Sie die Teller, bevor Sie es verwenden. Der mittlere pH -Wert muss 7,0 ± 0,2 betragen.

Verwenden

Der Standardkonto wird in der aeroben mesophilen Zählungstechnik während der mikrobiologischen Analyse von Wasser und Nahrung verwendet. Die Darstellung der aeroben Mesophilos ist erforderlich, da sie die gesundheitliche Qualität der untersuchten Stichprobe bestimmt.

Die Anwendung dieser Technik (mit diesem Medium) ermöglicht die makroskopische Visualisierung isolierter Kolonien zur Quantifizierung.

Plattenentladungstechnik (mit Tiefe gesät)

-Verfahren

Die Technik besteht aus folgenden:

1) Homogenisiere die Probe, um die vorhandenen Bakterien umzuverteilen.

2) Eine anfängliche Suspension wird in einer sterilen Flasche oder einem Sterbeutel durchgeführt, was das 10 -m- oder 10 ml -Verhältnis in 90 ml Verdünnungsmittel bewertet (10^-1).

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3) Aus der anfänglichen Suspension werden die relevanten Dezimalverdünnungen je nach Art der Stichprobe hergestellt. Beispiel: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Verdünnungen werden mit Peptonada -Wasser- oder Phosphatpufferlösung durchgeführt.

Dafür^-2 usw.

4) 1 ml jeder Verdünnung wird auf leere sterile Petrie -Platten genommen und gelegt.

5) Zu jeder Tafel 12 bis 15 ml Agar - zuvor geschmolzen und bei 44 - 47 ° C ruht.

6) Geben Sie den Platten weiche Drehbewegungen an, um die Probe neben dem Agar gleichmäßig zu verteilen und zu verfestigen.

7) Investieren Sie die Platten und inkubieren Sie für 24 bis 48 Stunden bei 37 ° C in Aerobiose.

8) Die Zeit gipfelte, um die Platten zu untersuchen und die Kolonien in der Verdünnung zu zählen, die es zulässt. Für das Konto werden die Platten mit zwischen 30 und 300 UFC ausgewählt.

Die Anzahl kann manuell gemacht werden oder das Colony Accountant Team verwenden.

Die von ML der Stichprobe zulässigen Werte können von einem Land zu einem anderen nach den Regeln variieren, nach denen sie regiert werden.

-UFC -Berechnung

Die allgemeine Berechnung erfolgt unter Verwendung der folgenden Formel:

Formel für die allgemeine Berechnung der UFC -Quantifizierung. Quelle: National Drug Administration und Medical Technology (ANMAT). Mikrobiologische Analyse von Lebensmitteln, offizielle Analysemethode, Indikator -Mikroorganismen. 2014 Band 3. Verfügbar bei: Anmat.Regierung.ar

Drücken Sie die Ergebnisse in 1 oder 2 Ziffern aus und multiplizieren Sie sie mit der entsprechenden Basis 10. Beispiel: Wenn das Ergebnis 16 ist.545 wird basierend auf der dritten Ziffer bei 17 abgerundet.000 und wird wie folgt ausgedrückt: 1,7 x 10⁴. Wenn das Ergebnis nun 16 war.436 ist auf 16 gerundet.000 und drückt 1 aus.6 x 10⁴.

Oberflächensänen -Technik

-Verfahren

-Mit 0,1 ml der direkten Probe inokulieren, wenn sie flüssig ist, anfängliche Suspension 10^-1 oder von aufeinanderfolgenden Verdünnungen 10^-2, 10^-3 usw. im Zentrum einer Standardkontoplatte.

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-Verteilen Sie die Probe mit Drigalski -Spatel oder Glasstab in Form von l. 10 Minuten stehen lassen.

-Investieren Sie die Platten und inkubieren Sie die Aerobiose bei 37 ° C für 24 bis 48 Stunden.

-Fahren Sie mit der Zählung der Kolonien fort und wählen Sie die Platten, die sich in einem Bereich zwischen 20 und 250 UFC befinden.

-UFC -Berechnung

Für die Berechnung wird der Verdünnungsfaktor angewendet, was die Umkehrung ist. Die Zahl zu 2 signifikanten Ziffern ist abgerundet (rundlich nach der dritten Ziffer) und in der Basisleistung 10 ausgedrückt. Wenn beispielsweise 224 UFC in der Probe ohne Verdünnung gezählt werden (10^-1), 22 x 10 wird gemeldet¹  UFC, aber wenn die Zahl 225 war, wird sie 23 x 10 gemeldet¹ UFC.

Wenn jetzt 199 UFC in Verdünnung 10 gezählt wird 10^-3, 20 x 10 werden gemeldet⁴ UFC, aber wenn 153 UFC in derselben Verdünnung gezählt werden, wird 15 x 10 gemeldet⁴ UFC.

QA

Das Standardkonto -Medium kann mit zertifizierten bekannten Stämmen bewertet werden, wie z. B.: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus Fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella Flexneri ATCC 12022.

Wenn sich das Kulturmedium in optimalen Bedingungen befindet, wird in allen Fällen ein zufriedenstellendes Wachstum erwartet, mit Ausnahme von L. Fermentum Das kann regelmäßig Leistung haben.

Um die Sterilität des Kulturmediums zu bewerten, müssen eine oder zwei Platten jedes vorbereiteten Grundstücks (ohne Inokulation) bei 37 ° C in Aerobiose 24 Stunden lang inkubiert werden. Nach dieser Zeit sollten kein Wachstum oder eine Farbänderung des Mediums beobachtet werden.

Einschränkungen

-Schmelzen Sie den Agar nicht mehr als einmal.

-Das vorbereitete Medium kann bis zu 3 Monate dauern, solange es in einem Kühlschrank bleibt und vor Licht geschützt ist.

-Dieses Medium ist nicht geeignet, um Mikroorganismen oder Anaerobes zu fordern.

Verweise

1. Nationale Verwaltung von Medikamenten Lebensmittel und Medizintechnik (ANMAT). Mikrobiologische Analyse von Lebensmitteln, offizielle Analysemethode, Indikator -Mikroorganismen. 2014 Band 3. Verfügbar bei: Anmat.Regierung.ar
2. Diffco Laboratories Francisco Soria Melguizo, S.ZU. Plattenzählung Agar. 2009. Verfügbar unter: http: // f-soria.Ist
3. Conda Pronadisa Laboratorien. Agar für Standardmethoden (PCA) nach APHA und ISO 4833. Erhältlich bei: Condalab.com
4. Britania Laboratories. Agarplatte. 2015. Erhältlich bei: Britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B und Velázquez oder. 2009. Techniken zur mikrobiologischen Analyse von Lebensmitteln. 2. Aufl. Chemiefakultät, Unam. Mexiko. Verfügbar bei: DEPA.Fquim.Unam