Czapek -Kopf, Vorbereitung, Verwendungen und Einschränkungen

Er Czapek Agar (CZA) ist ein selektives festes Kulturmedium. Es wurde von Botanikern Friedrich Johann Franz Czapek aus polnischer Herkunft und dem amerikanischen Chemiker Arthur Wayland Dox erstellt. Deshalb ist dieser Agar auch als Czapek-Dox-Hälfte bekannt.

Das ursprüngliche Medium war flüssig, aber später wurde Agar hinzugefügt, um ein festes Medium zu machen. Das Czapek -Medium besteht aus Natriumnitrat, bipotasisch.

Czapek a. Aspergillus parasiticus b. Aspergillus fumigatus Quelle: a. Medmyco [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lizenzen/by-sa/4.0)]/ b. Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

Der Czapek Agar ist 7.3, aber es gibt eine Variante, zu der 10% Milchsäure zugesetzt wird, deren pH -Wert 3,5 beträgt. Dieses saure Medium wird zur Kultivierung saurer Mikroorganismen verwendet.

Andererseits modifizierten einige kommerzielle Häuser die Zusammensetzung des Czapek -Agars, indem sie Magnesiumsulfat und bipotasisches Phosphat durch Glyceophosphat veränderten. Diese Modifikation verhindert den Niederschlag von Magnesiumphosphat, das mit der herkömmlichen Formel beobachtet wird. Ebenso gibt es eine andere Variante, zu der Hefeextrakt hinzugefügt wird.

Schließlich wird Czapek Agar von der APHA der American Public Health Association für die Studie von empfohlen Actinomyceten SP, Aspergillus sp, Paecilomyces sp Und Penicillium sp. Diese Arten zeichnen sich durch Mikroorganismen und opportunistische Krankheitserreger aus.

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Basis

Dieses Medium enthält Saccharose; Dieses Kohlenhydrat dient als Kohlenstoffquelle, während Natriumnitrat die Quelle des Stickstoffs ist, aber im Gegensatz zu anderen Mitteln ist das bereitgestellte Stickstoff anorganisch.

Aus diesem Grund wird das Czapek -Medium als selektiv angesehen, da es nur Mikroorganismen entwickeln kann, die anorganische Verbindungen als einzige Stickstoffquelle verwenden können.

Als regulatorische Substanz der mittleren Osmolarität ist das bipotasische Phosphat. Andererseits liefern Magnesiumsulfat, Kaliumchlorid und Eisensulfat wesentliche Mineralien für das Wachstum von Saprophyten -Mikroorganismen (freies Leben). Mit dieser Formel wird ein Niederschlag von Magnesiumphosphat gebildet.

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Schließlich ist die Agar-Einstellung die Verbindung, die die solide Konsistenz der Umwelt und das Wasser das Lösungsmittel aller Komponenten darstellt.

Mit der modifizierten Czapek -Agar -Formel gibt es keine Niederschlagsbildung und verbessert das Wachstum des Wachstums einiger Pilze.

Die extreme Säure des Czapek -sauren Agars macht dies zu einem selektiveren Mittel, das nur das Wachstum von acidophilen Mikroorganismen ermöglicht, was in der Lage ist, anorganische Stickstoff zu verwenden. Während Czapek-Levadura Agar die Leistung bestimmter Pilze verbessert.

Vorbereitung

Halb Czapek-dox

49 g dehydrierter Kultur wiegen und in destilliertem Wasser auflösen. Wärme zum Kochen auftragen. Schütteln Sie die Mischung häufig, bis sie vollständig aufgelöst werden.

-Czapek Agar

Verteilen Sie die in Röhrchen gelöste Mischung und autoklavieren Sie 15 Minuten bei 121 ° C. Wenn Sie aus dem Autoklav entfernen, vor dem Schlafengehen homogenisieren und festigen lassen.

-Czapek -Agar -Platten

Autoklavieren Sie das gemäß 15 Minuten bei 121 ° C gelöste Gemisch und lassen Sie bei 50 ° C abkühlen, homogenisieren und 20 ml in sterile Petrisch. Bis zum Gebrauch festigen, investieren und im Kühlschrank sparen lassen.

Der pH -Wert muss 7,3 ± 0,2 betragen. Die Farbe des dehydrierten Mediums ist weiß und hergestellt.

Halb Czapek A PH -Säure

Bereiten Sie sich wie beschrieben vor, fügen Sie jedoch 10 ml steriler steriler Säure zu 10% für jeden Liter vorbereiteten Medium hinzu. Das modifizierte Czapek -Medium muss bei pH 3,5 ± 0,2 liegen.

Halb modifizierter Czapek

45,4 g des dehydrierten Mediums wiegen und in 1 Liter Wasser auflösen. Der Rest der Vorbereitung entspricht dem oben beschriebenen. Die Farbe des dehydrierten Mediums ist weiß und vorbereitet. Der endgültige pH -Wert des Mediums beträgt 6,8 ± 0,2.

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Halb Czapek-Levadura

Auch Czapek-Extract of Hefe (CYA) bezeichnet. Enthält die Elemente des klassischen Czapek Agar Plus Hefeextrakt.

Verwenden

Das Czapek -Medium wird verwendet, um nach Saprophyten -Mikroorganismen in Bodenproben, Gemüse, Körnern, Luft, Insekten, unter anderem zu suchen.

Czapek Ein saurer Agar wird für das Wachstum von acidophilen Mikroorganismen verwendet, während modifizierter Czapek -Agar besonders für die Bildung von Clamidosporen in komplexen Spezies nützlich ist Candida albicans.

Schließlich ist der Czapek -Levadura -Agar sehr nützlich für die Isolierung von Aspergillus und Penicillium.

Gesät

-Czapek Agar

Gehen Sie vor Ort wie folgt auf Actinomyceten ein: Die Probe mit einem durch 30 Minuten phenolisierten Wasser wird behandelt und dann 1 ml der Suspension im Czapek -Agar gepflanzt. Inkubiert für 5 bis 7 Tage bei 28 ° C.

Für Gemüse-, Getreide- und Insektenproben werden sie direkt auf dem Agar platziert. Verdünnungen können auch durchgeführt werden und säen Sie 0,1 ml auf der Oberfläche des Agars.

-Modifizierter Czapek -Agar

Denn das gesät wird eine gerade Hand oder eine Nadel verwendet, sie ist mit dem Tupfer durchdrungen und impft die Schaufel, die eine Punktionen macht, bis die Basis der Platte berührt wird. 24 Stunden bei 28 ° C inkubieren und mit einem Mikroskop über und unter der Platte untersuchen, um zu beobachten, ob sich die Clamidosporen gebildet haben.

Inkubationstemperatur und Zeit

Die Temperatur- und Inkubationszeit variieren je nach Art des Mikroorganismus, der zu isolieren ist. Normalerweise werden die Platten um ein bis zwei Wochen in einem Temperaturbereich von 20 bis 25 ° C inkubiert.

Es gibt jedoch bestimmte Bedingungen für einige Stämme. Zum Beispiel haben die meisten Arten der Gattung Aspergillus ein optimales Wachstum bei 30 ° C; Jedoch ZU. fumigatus bei 50 ° C wachsen.

In der Inkubationszeit ist eine oder zwei Wochen jedoch normal Candida albicans Es kann sich in 24 bis 48 Stunden bei 25 ° C entwickeln.

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Eigenschaften einiger Kolonien in diesem Medium

-Penicillium atravenetum

Es findet in 12 Tagen der Inkubation bei 27 ° C statt. Seine Kolonien sind klein (25 mm).

Die Kolonien sehen velistierend aus, mit einer weißen Kante und in der Mitte präsentiert sie einen grünlich -blauen Ton, der sich überlegt, wird grau. Die Rückseite der Kolonie ist orange und platziert sich in der Mitte der gleichen Farbe durch Pigmentproduktion.

-Aspergillus niger

Es entwickelt sich mit einem weißen bis gelben Myzel und schwarzen Sporen.

-Candida albicans

Cremige beige leichte Kolonien entwickeln sich klar. In der modifizierten Czapek -Agarformform.

-Aspergillus parasiticus

Ein dunkelgrünes Myzel entwickelt sich in 7 Tagen bei 25 ° C.

QA

Um die Qualität des Kulturmediums zu bewerten, können zertifizierte Kontrollstämme gesät werden, wie z Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger entwickelt in ungefähr 5 Tagen ein weißes bis gelbes Myzel und schwarze Sporen Candida albicans Es wird ein zufriedenstellendes Wachstum in 24 Stunden der Inkubation bei 25 ° C haben. Die Kolonien sind cremefarbene Farbe.

Einschränkungen

Einige Studien haben gezeigt, dass der Agar mit der bestmöglichen Leistung der Agar -Agar für die Wiederherstellung von Actinomyceten der Agar ist, der den Czapek -Agar an zweiter Stelle lässt, aber zur Wiederherstellung von Aspergillus und Penicillium ist der Czapek -Agar die größte Genesung, die die größte Genesung bietet Rate.

Verweise

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4. Conda Pronadisa Laboratorien. Modifizierter Czapek-Dox-Agar. Erhältlich bei: Condalab.com
5. Mikrokit -Kultivierungsmedien. Czapek-Dox-Agar. Podponible in: Medienkultutive.com