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Er Endo -Agar oder mittleres Endo ist eine solide, differentielle Kultur und mit einem gewissen Grad an Selektivität. Die ursprüngliche Formel wurde 1904 von Endo erstellt, um die fermentären Bakterien des nicht fermentierenden Laktoses zu unterscheiden. Initial Salmonella typhi, Aber später wandte sich das Ziel des Mediums der Suche nach Coliformen zu.

Der Beginn des Endo -Agars ist geblieben, aber seine Formulierung hat im Laufe der Jahre unzählige Veränderungen erlitten. Derzeit besteht das Medium aus tierischen Gewebepeptikern, Lactose, Wasserstoffpuff, Natriumsulfit, Basisfuchsin sowie Agar und Agar.

Die Hauptverwendung des Mediums wurde mit der Isolierung und Differenzierung von Gramm negativ.

Lange Zeit wurde es zum Nachweis von Coliformen in Wasserproben, Milchprodukten und Nahrung verwendet, aber heute wurde die Verwendung dieses Mediums von anderen ähnlichen Funktionen verschoben. Einige mikrobiologische Laboratorien verwenden diesen Agar jedoch zur Isolierung aus klinischen Proben.

Basis

Endo -Agar enthält Peptones, die als Quelle für Aminosäuren, Stickstoff, Kohlenstoff und Energie dienen, die für das Wachstum wenig anspruchsvoller Mikroorganismen erforderlich sind.

Andererseits wird der leicht selektive Charakter des Agars durch das Aggregat von Natriumsulfit und Basisfuchsin bereitgestellt. Beide Komponenten hemmen die Entwicklung der meisten positiven Grammbakterien teilweise oder vollständig oder vollständig.

Der differentielle Charakter wird durch das Vorhandensein von fermentierbarem Kohlenhydrat angegeben, das in diesem Fall Laktose und Basisfuchsin ist, das auch als pH -Indikator dient.

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Gram -negative Bakterien, die in diesem Agar wachsen und Laktose fermentieren können, bilden starke rosa Kolonien. Pathognomonik von Escherichia coli Die Bildung dunkelroter Kolonien mit einem grünlichen Metallic Glanz. Dies ist auf eine hohe Säureproduktion durch Kohlenhydratfermentation zurückzuführen.

Es ist zu beachten, dass das in den Kolonien gefundene Medium auch eine starke rosa Farbe macht. Während gram negative Bazilli -nicht -fermentierende Laktose blassrosa Kolonien bilden, ähnlich wie das mittel oder farblos.

Das Wasserstoff -Dopotium -Phosphat gleicht den pH -Wert des Mediums aus und der Agar ist die Komponente, die die feste Konsistenz liefert.

Vorbereitung

Endo -Agar

Wiegen Sie 41,5 g des dehydrierten Mediums und löst sich in 1 Liter destilliertem Wasser auf. Erwärmen Sie die Mischung häufig umrühren, bis die gesamte mittlere Auflösung vorliegt. Sterilisieren Sie im Autoklav bei 121 ° C, 15 lb Druck für 15 Minuten.

Wenn Sie aus dem Autoklaven entfernt werden, lassen Sie die Mischung auf eine ungefähre Temperatur von 45-50 ° C abkühlen lassen, um die Mischung vor dem Servieren zu homogenisieren. Gießen Sie 20 ml in Petrisch -Sterilplatten.

Verfestigen Sie die Platten, investieren Sie und sparen Sie Plaque oder wickeln Sie sie mit dunklem Papier ein, bevor Sie im Kühlschrank sparen. Es ist sehr wichtig, die vorbereitete Umgebung vor direktem Licht zu schützen. Eine empfohlene Praxis besteht darin, den genauen Betrag vorzubereiten, der benötigt wird.

Wenn sie in einem Kühlschrank aufbewahrt werden.

Der mittlere pH -Wert muss zwischen 7,2 und 7,6 liegen und die Farbe des vorbereiteten Mediums ist blassrosa Farbe.

M-Endo Agent

Es gibt eine andere Version des Endo-Agar (M-Endo), die der Formel McCarthy, Delaney und Grasso folgt, die mehr Verbindungen enthält und in Form der Zubereitung variiert.

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Diese Variante enthält: Lactose, Triptose, verdauter Kaseinenzymatik, tierisches Gewebezym, Natriumchlorid, dibásic -Kaliumphosphat, Natriumsulfit, Hefeextrakt, monobasisches Kaliumphosphat, Basisfuchsin, Natriumablayout, Laurilsulfat -Natrium und Agar.

In diesem Fall wiegt 51 g des dehydrierten Mediums und in 1 Liter destilliertem Wasser, das 20 ml Ethanol enthält.

Beim Rühren leicht erhitzen, um das Medium vollständig aufzulösen. Es sollte nicht überhitzen und entweder in Autoklaven sterilisieren. Sobald die Mischung homogen ist, in Petrisch -Sterilplatten servieren und sich verfestigen lassen.

Verwenden

In einigen Ländern wird es immer noch verwendet, um totale und fäkale Coliformen in Wasser- und Lebensmittelproben, insbesondere das Vorhandensein von Escherichia coli als Hauptindikator für die Fäkalverschmutzung.

Der M-Endo-Agar wird von der American Public Health Association (APHA) für die Überwachung und Kontrolle der Abwasserdesinfektions- und Behandlungsprogramme sowie bei der Bewertung der Qualität des Trinkwassers empfohlen.

Die am häufigsten verwendete Methode ist die Membranfiltration, vorherige Anreicherung der Probe mit Laurylsulfatbrühe für 2 bis 4 Stunden.

Es kann auch als Ersatz für den AMB -Agar in der mikrobiologischen Analyse von Nahrung und Wasser durch die wahrscheinlichste Zahlentechnik (NMP) verwendet werden, insbesondere in der vollständigen Bestätigungsphase, um das Vorhandensein von zu bestätigen UND. coli aus trüben EC -Brühen.

QA

Um die Qualität des los vorbereiteten Ende zu bewerten, werden bekannte oder zertifizierte Kontrollen gesät.

Unter den Stämmen, die für diesen Zweck verwendet werden können, sind: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter -Abwasserkanal ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella Flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 und Enterococcus faecalis ATCC 11700.

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Die Stämme werden durch Erschöpfung gesät und 24 Stunden lang bei 37 ° C in der Aerobiose inkubiert.

Die erwarteten Ergebnisse sind:

• Für Escherichia coli: Starke rote Kolonien mit metallischem Glanz.
• Für UND. Cloacae Und K. Lungenentzündung Die Kolonien müssen rosa Schleimhaut sein.
• Im Fall von s. Typhimurium, s. Flexneri und p. Mirabilis Die Kolonien sind normalerweise hellrosa oder farblos.
• Endlich, UND. Faecalis Es wird erwartet, dass es teilweise gehemmt wird, daher muss sein Wachstum mit sehr kleinen rosa Kolonien schlecht sein.

Einschränkungen

-Das Endo -Medium hat selektive Leistung, daher kann es einige gram positive Mikroorganismen wie Staphylococcus, Enterococcus und sogar Hefen wachsen lassen.

-Andere Bacilli, die nicht zur Familie Enterobacteriaceae gehört, können sich in diesem Medium entwickeln, wie z Pseudomonas sp Und Aeromonas sp. Die Eigenschaften dieser Stämme sind farblose unregelmäßige Kolonien.

-Dieses vorbereitete Medium ist sehr empfindlich gegenüber Licht, daher eine längere Exposition gegenüber dieser Verschlechterung des Indikatorsystems, die die Umwelt irreversibel beschädigt.

-Die mittleren Komponenten gelten als krebserregend, sodass direkter Kontakt vermieden werden muss.

-Das dehydrierte Medium ist sehr hygroskopisch und muss in seinem ursprünglichen Behälter bei Raumtemperatur, gut geschlossen und in einer trockenen Umgebung gehalten werden.

Verweise

1. BD Laboratories. Endo -Agar. Verfügbar bei: BD.com
2. Neogen Laboratorien. Ich bin Agar. Erhältlich bei: Foodsafety.Neogen.com