Agar Lia (Iron Lysina) Was ist, Foundation, Vorbereitung, verwendet

Er Agar Lia (Iron Lysina) Es ist ein biochemischer Test, der zur Identifizierung von Bakterien der Enterobacteriaceae -Familie verwendet wird. Dieses Medium wurde von Edwards und Fife erstellt, basierend auf der Falkow -Formel.

Ursprünglich war dieser Test eine Brühe, die Peptones, Hefeextrakt, Glukose, L-Lisin, Bromocresh und destilliertes Wasser lila enthielt. Edwards und Fife haben Agar-Adagar, Eisen Citratus von Ammonium und Natriumtiosulfat hinzugefügt.

Positiver und negativer Test der Lysin -Decarboxylierung. Quelle: Foto und Schema des MSC -Autors. Marielsa Gil

Der Test besteht im Grund. Eine Desaminierung der Aminosäure kann auch aufgrund des Vorhandenseins des Enzym -Lysin -Herzschmerzes auftreten.

Zusätzlich ermöglicht die Zusammensetzung des Mediums die Fähigkeit einiger bakterieller Gattungen, Wasserstoffsulfid zu produzieren. Schließlich ist es auch möglich, die Erzeugung oder nicht von Gas in der Mitte zu beobachten.

Basis

Peptonas und Hefeextrakt

Als die meisten Pflanzenmedien enthält der Eisenagar der Flüssigkeit Komponenten, die die notwendige Nährstoffquelle für das Bakterienwachstum liefern. Diese Komponenten werden durch Peptones und Hefeextrakt dargestellt.

Glucose

Ebenso enthält dieser Agar als fermentierbare Kohlenhydratglukose. Es ist bekannt, dass alle Bakterien der Enterobacteriaceae -Familie die Glukose fermentieren.

Dieser Schritt ist entscheid.

In einigen bakteriellen Genres kann die Gasproduktion aufgrund der Glukosefermentation beobachtet werden.

Das Gas wird nachgewiesen, wenn eine Verschiebung des Agar occ.

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L-Lisina

Sobald das Lysin dekarboxyliert ist, entsteht ein Diamin (Leichen) und Kohlenanhydrid.

Abbrennung tritt in Gegenwart des pyridoxalen Phosphat -Coenzyms auf. Diese Reaktion ist irreversibel.

PH -Indikator (Bromocresol lila)

Alle pH -Veränderungen traten in der Mitte durch die verschiedenen Reaktionen auf und werden durch den pH -Wert -Indikator für Bromokresol nachgewiesen.

In diesem Sinne wird das Medium, wenn es angemerkt ist.

Wenn Lysines Herzschmerz aufgrund des Vorhandenseins des Enzyms Lysin auftritt.

Dies liegt an der Tatsache, dass während des Entfernungsprozesses Alpha-Zo-Kohlenstoffsäure gebildet wird, das in Gegenwart von Sauerstoff mit Ammoniumcitrat reagiert, was die oben genannte Farbe verursacht.

Eisen Citrat von Ammonium und Natriumtiosulfat

Andererseits werden Bakterien, die Wasserstoffsulfid produzieren₂S.

Die Bakterien, die das reduzierte Thiosulfatenzym aufweisen₂S).

Letzteres ist ein farbloses Gas, aber bei der Reaktion mit Eisensalz bilden Sie Metallsulfid, was eine unlösliche Verbindung ist (sichtbarer schwarzer Niederschlag).

Die Trainingskapazität von H₂S mit diesem Medium ist nicht sehr zuverlässig, da einige negative Decarboxylase -Bakterien, die H produzieren können₂S bilden nicht den schwarzen Niederschlag, da die Säure des Mediums stört. Daher wird empfohlen, sich mit anderen Mitteln mit Eisen zu bestätigen.

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Interpretation des Tests

Reboxylierung von Lysin

Die Röhren sollten nach abgeschlossenen 24 Stunden Inkubation gelesen werden.

Denken Sie daran, dass die erste Reaktion, die auftreten wird.

Wenn am Ende der Inkubationszeit (24 Stunden) einen gelben Hintergrund mit einer lila oder lila Oberfläche gibt, ist die Reaktion negativ. Die lila Farbe der Oberfläche entspricht der Alkalisierung des Mediums durch die Verwendung von Peptons.

Eine positive Reaktion besteht darin.

Wer bestimmt die Positivität des Tests. Wenn Sie Zweifel an der Farbe haben, kann sie mit einem nicht -inokulierten LIA -Röhrchen verglichen werden.

Lysin -Desaminierung

Eine Röhre, die den Herzschmerz von Lysin zeigt.

Diese Reaktion wird als negativ für die Decarboxylierung des Lysins interpretiert, aber positiv für die Lysina -Desaminierung.

Diese Reaktion wird definiert und in der Abschrägung interpretiert.

Wasserstoffsulfidproduktion (H₂S)

Eine positive Reaktion wird durch das Auftreten eines schwarzen Niederschlags in der Mitte oder einem Teil davon beobachtet. Im Allgemeinen zwischen der Limel der Lünette und der Basis.

Wenn der Niederschlag im gesamten Rohr auftritt, ist nicht die anderen Reaktionen in der Mitte zu sehen.

Registrierung von Ergebnissen

Bei der Interpretation des Tests werden die Ergebnisse wie folgt aufgezeichnet:

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Zuerst wird die Lünette gelesen, dann der Hintergrund oder Taco, dann die Produktion von H₂S und schließlich Gasproduktion.

Beispiel: k/a + (-). Das heisst:

• K: Alkalische Lünette (lila Farbe)
• A: Säuriger Hintergrund (gelb), dh negative Decarboxylierungsreaktion und negativer Herzschmerz.
• +: Wasserstoffsulfidproduktion
• (-): ohne Gas.

Vorbereitung

Wiegen Sie 35 g der liegenden mittelgeißen Eisen und löst sich in einem Liter destilliertem Wasser auf.

Heiß, bis der Agar vollständig aufgelöst wird, um häufig für eine Minute zu kochen. 4 ml des Mediums in 13/100 Reagenzglas mit Baumwolldeckel verteilen.

15 Minuten bei 121 ° C in Autoklave sterilisieren. Aus dem Autoklaven nehmen und den Stand neigen lassen, damit es eine tiefe Basis und eine kurze Kräfte gibt.

In einem 2-8 ° C-Kühlschrank aufbewahren. Lassen Sie ein Temperament, bevor Sie den Bakterienstamm säen.

Die Farbe des dehydrierten Mediums ist beige und das vorbereitete rötliche lila Medium.

Der endgültige pH des vorbereiteten Mediums beträgt 6,7 ± 0.2

Das Medium wird gelb mit pH -Wert gleich oder weniger als 5,2 und ist mit 6,5 lila lila.

Anwendungen

Dieser Test wird zusammen mit anderen biochemischen Tests zur Identifizierung von Bazillen der Enterobacteriaceae -Familie verwendet.

Das Medium wird mit einer geraden oder Nadel gesät, ein oder zwei Punktionen am Boden des Rohrs, und dann stand die Oberfläche des Mediums im Zickzack.

Es ist 24 Stunden lang bei 35-37 ° C bei Aerobiose inkuba. Bei Bedarf bleibt es 24 Stunden mehr inkubieren.

Es ist hauptsächlich nützlich, um negative Citrobacter -Arten von zu unterscheiden Salmonellas sp.

Verweise

1. Mac Faddin J. (2003). Biochemische Tests zur Identifizierung klinischer Bedeutung Bakterien. 3. Aufl. Pan -American Editorial. Buenos Aires. Argentinien.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologische Diagnose von Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial s.ZU. Argentinien.