Agar m.R.Was ist, Foundation, Vorbereitung, verwendet

Er Agar m.R.S. Es handelt. Dieser Agar wurde 1960 von Man, Rogosa und Sharpe geschaffen, wobei das Medium den gleichen Namen trug, aber aufgrund seiner Komplexität wird die Abkürzung m häufig verwendet.R.S.

Es besteht aus Peptonprotein, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Glucose, Sorbitan -Monoleato, Dipbotium -Phosphat, Natriumacetat, Ammoniumcitrat, Magnesiumsulfat, Manganulfat und Agar.

Han und Sharpe Man Agar (m.R.S.) mit Lactobacillus späs. Quelle: Spenden Foto für diesen Artikel der Autoren: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto während der Untersuchung mit dem Titel: Bewertung von Milchsäurebakterien und Bifidobakterien mit probiotischem Potential bei Muttermilch und Säuglingskot.

Diese Zusammensetzung ermöglicht die gute Entwicklung von Milchsäurebakterien aus klinischen Proben wie Kot, Vaginalsekretion, Mundproben und Muttermilch sowie Milchprodukte und Fleischfutter.

Es wird in klinischen Labors nicht routinemäßig verwendet, da Milchsäurebakterien selten an pathologischen Prozessen beteiligt sind. Im Bereich der Lebensmittelmikrobiologie ist die Verwendung von Agar M jedoch häufiger.R.S.

Andererseits wird dieses Medium von einigen Forschungszentren verwendet, deren Ziel die Untersuchung von Milchsäurebakterien ist.

Basis

Der Mann, Rogosa und Sharpe haben eine ziemlich komplexe Zusammensetzung. Indem Sie die Funktion zerreißen, die jede seiner Komponenten erfüllt, können Sie ihre Grundlage erklären.

Peptonprotein, Fleischextrakt, Hefeextrakt und Glukose sind Nährstoffe, die die Kohlenstoffquelle, Stickstoff, Vitamine und Mineralien zur Verfügung stellen, die für das Bakterienwachstum erforderlich sind. Zusätzlich ist Glucose die universelle Energiequelle, die in den meisten Kultivierungsmedien verwendet wird.

Andererseits ist das Vorhandensein unverzichtbarer Cofaktoren (Kationen) im Stoffwechsel von Lactobacillus und verwandten Bakterien erforderlich, um das Wachstum von Milchsäurebakterien zu bevorzugen. Diese Verbindungen sind Natrium-, Magnesium- und Mangansalze.

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Ebenso sind der Sorbitan oder Polysorbat monoleoat 80 eine wichtige Quelle für Fettsäuren, wenn sie als Nährstoffe absorbiert werden.

Darüber hinaus hemmt das Sorbitan Monoleoat und Ammoniumcitrat Act, das die Entwicklung der dazugehörigen Flora, insbesondere Gram -negative Bakterien.

Schließlich ist der Agar -Agar derjenige, der die solide Konsistenz für die Umwelt verleiht.

Es gibt andere Varianten des Rogosa Sharpe Agar; Einer von ihnen ist das ergänzt mit Cystein (m).R.S.c), sehr nützlich für die Isolierung von Bifidobakterien unter anderem Mikroorganismen. Andererseits gibt es die MRS, die mit Neomycin, Paromomycin, Buttical Säure und Lithiumchlorid ergänzt ist, die für die selektive Anzahl von Bifidobakterien in Milchprodukten speziell ist.

Vorbereitung

Wiegen Sie 68,25 Gramm des dehydrierten Mediums und löst sich in einem Liter destilliertem Wasser auf. 5 Minuten stehen lassen. In seiner Gesamtheit aufzulösen, führt häufig eine Wärmequelle und kochen Sie 1 bis 2 Minuten. 15 Minuten bei 121 ° C in Autoklave sterilisieren.

Wenn Sie den Autoklav verlassen, lassen Sie sich einige Minuten lang stehen und verteilen Sie sie immer noch heiß auf Petrisch -Sterilplatten.

Lassen Sie die Platten festigen und investieren, in Blutplättchen bestellen und im Kühlschrank bis zur Verwendung sparen. Lassen Sie die Teller Raumtemperatur nehmen, bevor Sie sie verwenden.

Der mittlere pH -Wert muss 6,4 ± 0,2 betragen. Einige Handelshäuser empfehlen den pH -Wert zwischen 5,5 und 5,9.

Das dehydrierte Medium ist beige und vorbereitet, dunkler Bernstein.

Sowohl dehydratisierte und vorbereitete Platten müssen von 2 bis 8 ° C gelagert werden.

Anwendungen

Die Agar -M -Platten.R.S. Sie können auf der Oberfläche gesät werden (Erschöpfung oder mit Drigalski Spatel). Es kann auch durch Tiefe gesät werden. Die Platten müssen bei Mikroaerophilie bei 37 ° C inkubiert werden (4% von oder₂ und 5-10% co₂) Für 24 bis 72 Stunden.

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Die gesätte Methode wird nach dem verfolgten Zweck ausgewählt (Isolation oder Anzahl).

Eigenschaften der Kolonien

Die mutmaßlichen Kolonien des Lactobacillus -Wachstums der weißlichen Farbe und haben in diesem Agar einen Schleimhaut oder cremig. Anschließend müssen sie sich identifizieren.

Isolierung von Milchsäurebakterien

Dafür wird die säene Oberfläche verwendet. Zu verklagte Proben erfordern ein früheres Verfahren. 

Bei Muttermilchproben wird empfohlen, 1 ml der Probe bei 14 zu zentrifizieren.000 RMP für 10 Minuten, um die Fettschicht zu entfernen. 900 µl werden verworfen, und in den verbleibenden 100 µl wird das Sediment aufgehängt und die Oberfläche des Agars m.R.S. Dann müssen Sie sich gleichmäßig mit einem Drigalski -Spatel verteilen.

Im Fall von Stuhlproben wird ein (1) Gramm Kot gewogen und 9 ml steriles peptones Wasser 0,1%homogenisiert, was einer Verdünnung 1/10 entspricht. Dann werden serielle Verdünnungen durchgeführt, bis eine endgültige Verdünnung von 10^-4.

Schließlich werden 100 & mgr; l Verdünnungen 10 entnommen^-2, 10^-3 und 10^-4 Und jede Verdünnung wird auf MRS Agar gesät und gleichmäßig mit einem Drigalski -Spatel verteilt.

Milchsäurebakterien zählen

In diesem Fall erfolgt das Sagen durch Tiefe.

Für Muttermilchproben wird 1 ml in eine sterile konische Plastikrohre genommen und gelegt. Agar MRS wird bei einer ungefähren Temperatur von 40 ° C zu einem endgültigen Volumen von 25 ml zugegeben, wodurch eine homogene Mischung erhalten wird. Anschließend wird es in sterile Petri gegossen.

Für Stuhlproben werden Verdünnungen durchgeführt, wie oben beschrieben. 1 ml jeder Verdünnung wird genommen und Plastikrohre steril. Masted Agar MRS wird zu einem Volumen von 25 ml hinzugefügt.

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Die Mischung jeder Verdünnung wird gleichmäßig in Petrisch -Sterilplatten gegossen. Lassen Sie schließlich bis zu Ihrer Polymerisation stehen.

Kolonien zählen auf den Menschen und Sharpe Agar (m).R.S.). Quelle: Spenden Foto für diesen Artikel. Autoren: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto während der Untersuchung mit dem Titel: Bewertung von Milchsäurebakterien und Bifidobakterien mit probiotischem Potential bei Muttermilch und Säuglingskot.

Auf Forschungsebene

Jeden Tag wird die Untersuchung von Milchsäurebakterien mehr Interesse; Insbesondere Forscher versuchen, neue Stämme und ihr Potenzial als Initiative für die Standardisierung bei der Herstellung von Milchprodukten zu kennen, unter anderem.

In diesem Sinne haben Alvarado et al. (2007) verwendeten Agar m.R.S. Eine Studie durchführen, in der sie in einem Ahumado Andenkäse isolierte, identifizierte und charakterisierte Milchsäurebakterien.

In dem Käse fanden sie das Vorhandensein von Bakterien der Genres Lactococcus und Lactobacillus und gelangten zu dem Schluss, dass die Gemische von isolierten Stämmen als initiierende Stämme bei der Herstellung von Käsen aus pasteurisierten Milch angemessen sind.

Andererseits Sánchez y cols. (2017) verwendeten Agar m.R.S. Um das Vorhandensein von Milchsäurebakterien im Ferkelverdauungstrakt zu untersuchen, um sie als native Probiotika zu verwenden, die die Produktivität von gesunden Schweinen erhöhen.

Mit diesem Medium gelang es ihnen, vier Arten zu isolieren: Lactobacillus Johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae Und Pediococcus pentosaceus.

Ebenso haben Báez et al. (2019) verwendeten das Altern m.R.S. Bei der Bewertung von Milchsäurebakterien (BAL) und Bifidobakterien mit probiotischem Potential bei Muttermilch und Säuglingskot.

Sie haben es geschafft, 11 Bal und 3 zu isolieren Bifidobakterien sp In der Muttermilch und 8 BAL und 2 Bifidobakterien sp. In Kot. Alle erfüllten bestimmte Parameter, die sie als Bakterien mit probiotischer Aktivität akkreditieren.

Die Autoren kamen zu dem Schluss, dass sowohl die Muttermilch als auch die Kot von Stilldaten ausschließlich als natürliche Quellen probiotischer Bakterien dienen.

QA

Bewertung der Qualität des Agar m.R.S. Kontrollen wie:

Lactobacillus Fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus verdammt MKTA 29358, Escherichia coli und Bacillus cereus.

Die erwarteten Ergebnisse sind ein zufriedenstellendes Wachstum für die ersten 6 Bakterien UND. coli Und Bacillus cereus muss in seiner Gesamtheit gehemmt werden.

Verweise

1. Britania Laboratory. M.R.S Agar. Erhältlich bei: Britanialab.com