Müeller Hinton Agar Was ist, Foundation, Vorbereitung, verwendet

Er Müeller Hinton Agar Es handelt. Dieses Medium ermöglicht eine hervorragende mikrobielle Entwicklung der meisten schnellen Wachstumsbakterien.

Es wurde ursprünglich von John Howard Müeller und Jane Hinton geschaffen, um anspruchsvolle Bakterien aus dem Nährwert zu isolieren, wie z Neisseria gonorrhoeae Und Meningokokken. Aufgrund seiner Merkmale stellte sich jedoch heraus, dass es sich für die Untersuchung der Anfälligkeit für Antibiotika ideal handelte und zuverlässige und reproduzierbare Ergebnisse lieferte.

Daher ist der Müeller Hinton -Agar das Kulturmedium, das vom klinischen und Laborstandards Institute (CLSI) und dem Europäischen Ausschuss für antimikrobielle Suszeptibilitätstests zur Ausführung des antimikrobiellen Suszeptibilitätstests durch die Kirby -Verbreitungsmethode und Bauer akzeptiert wird.

Basis

Da es sich um ein nicht -selektives Ernährungsmedium handelt, ist es hervorragend für das Wachstum der meisten pathogenen Bakterien.

Auf der anderen Seite veranlasst seine einfache Zusammensetzung, dass Substanzen sich leicht darüber ausbreiten, was ein wesentliches Merkmal für den Anfälligkeitstest nach der Verbreitungsmethode für die Festplatte ist.

Ein weiteres Merkmal ist, dass es eine geringe Anzahl von Inhibitoren enthält, die es Sulfonamid, Trimetoprim und Tetracycline ermöglichen, effektiv zu bewerten.

Es sollte jedoch berücksichtigt werden, dass das Medium bestimmte Bedingungen erfüllen muss, um seine ordnungsgemäße Funktion zu garantieren, einschließlich:

Die Anpassung des pH -Werts, die Tiefe des Agars und die richtige Konzentration von Timina, Timidina, CA⁺⁺, Mg⁺⁺ und Zn⁺⁺.

Sie müssen auch wissen, dass die Methodik standardisiert ist und daher alle Parameter wie:

Die Konzentration des Inokulums, die Konzentration und Erhaltung von Antibiotika -Scheiben, die Platzierung der richtigen Anzahl von Scheiben auf dem Agar, den Abstand zwischen einer Scheibe und der anderen, der strategischen Platzierung bestimmter Antibiotika, der Atmosphäre, der Temperatur und der Zeit der Inkubation.

Vorbereitung

Wiegen Sie 37 g des mittleren Müeller Hinton dehydriert und löst sich in 1 Liter destilliertem Wasser auf. Erhitzen Sie die Umgebung beim Rühren, um Ihre Auflösung zu unterstützen. 1 Minute kochen.

Zum Autoklaven bringen, um 15 Minuten bei 121 ° C zu sterilisieren. Wenn Sie aus dem Autoklaven entfernt werden, muss das Fixola von María bis 50 ° C in ein Badezimmer gelegt werden, um abzukühlen. Gießen Sie 25 bis 30 ml in Sterri Sterile 10 cm Durchmesserplatten.

Die Platten sollten mit einer durchschnittlichen Dicke von 4 mm (ideal) bleiben, wobei ein Bereich von 3 bis 5 mm zulässig ist.

Wenn Sie mit Müeller Hinton Blut vorbereiten möchten, wird 5% steriles Lammblut als Basis gegossen.

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Der endgültige pH -Wert des Mediums muss zwischen 7,2 und 7,4 liegen.

Investieren und sparen Sie im Kühlschrank bis zur Verwendung. Lassen Sie die Platte die Umgebungstemperatur nehmen, bevor Sie sie verwenden.

Die Farbe des vorbereiteten Mediums ist leicht beige.

Anwendungen

Es wird verwendet, um das Antibiogramm oder den Suszeptibilitätstest gegenüber Antibiotika zu den schnellsten Wachstumspathogenen auszuführen.

Wenn der Agar mit Blut ergänzt wird, dient das Antibiogramm von anspruchsvollen Mikroorganismen wie: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus SP, Neisseria Meningitidis, unter anderen. Es wurde auch verwendet, um zu isolieren Legionel Pneumophila.

Antibiogramm -Technik

Vor der Durchführung des Antibiogramms muss eine bakterielle Lösung von 1,5 x 10 hergestellt werden⁸ Zellen.

Dazu werden 3 bis 4 Kolonien reiner Ernte in einer Triptychon -Soja -Brühe oder in Müeller Hinton -Brühe aufgenommen und 2 bis 6 Stunden lang inkubiert, und die Konzentration mit einer sterilen Kochsalzlösung wird angepasst und es mit einem MAC -Farlandmuster vergleicht 0,5%.

Wenn sie Mikroorganismen fordern, können Kolonien direkt bis zur Konzentration von 0,5% Mac Farland ausgesetzt werden. Anschließend wird die Müeller Hinton -Platte mit einem mit der bakteriellen Lösung hergestellten Tupfer gesät.

Dazu ist der Tupfer in die Lösung eingetaucht und dann wird die überschüssige Flüssigkeit durch Druck gegen die Rohrwände entfernt. Unmittelbar nachdem der Tupfer durch die gesamte Oberfläche gelangt, ohne zu gehen, ohne Berührung. Die Operation wird 2 -mal mehr wiederholt.

10 Minuten stehen lassen und dann die Antibiotika -Scheiben mit einer sterilen Klemme platzieren und einen Raum von 24 mm zwischen dem und dem anderen hinterlassen. Nachdem Sie jedes Album auf dem Agar platziert haben, drücken Sie jede mit der Klemme, um sicherzustellen, dass sie gut angebracht sind.

Nach dem Prozess wird die Platte investiert und 35-37 ° C in der Aerobiose 16 bis 18 Stunden inkubiert. Wenn es sich um einen anspruchsvollen Mikroorganismus handelt, kann es Mikroaerophilie verdienen und wenn das Antibiogramm Oxacillin -Scheiben enthält, sollte es nach 24 Stunden gelesen werden.

Um den Durchmesser jedes Halo zu messen, wird eine Regel verwendet. Die Ergebnisse müssen in MM aufgezeichnet werden. Anschließend sind die mit den vom aktuellen CLSI -Handbuch veröffentlichten Tabellen erhaltenen Werte korreliert.

Melden.

Antibiotika werden nach dem isolierten Mikroorganismen und der Art der Infektion ausgewählt, die produziert wird.

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Manchmal muss die strategische Platzierung von Antibiotika im Auge behalten werden, um phänotypische Resistenzmuster zu zeigen.

Strategische Platzierung von Discs auf Müeller Hinton Agars

Für Enterobakterien muss die Clavulansäure -Scheibe vor den Cephalosporinen der 3. und 4. Generation platziert werden. Eine Ei -fischte Erweiterung zeigt an, dass der Stamm ein Hersteller von erweiterten Spektrum beta -Lactamasen (Blee) ist. Dies bedeutet, dass der Patient mit keinem Cephalosporin behandelt werden sollte.

In Staphylococcus ist es wichtig.

Ein in erythromycin resistenter Halo und eine Flachheit im Clindamycin -Halo weist darauf hin, dass der Stamm einen induzierbaren Widerstand gegen Clindamycin, Stamm (RIC) aufweist. Dies bedeutet, dass eine Clindamycin -Behandlung nicht wirksam ist.

Für die Suche nach AMP -C -Stämmen, die in Enterobakterien und einigen nicht fermentierenden Gram -negativen Bacilli, Ceftazidime, Cefoxitin oder Piperacilin -Scheibe induzierbar sind.

Ein auf einer der Discs mit dem IMIPenem gebräunter Halo zeigt das Vorhandensein von induzierbarem AMP C an.

Für die Suche nach konstitutivem AMP C, einem 500 µg Abwasserkanal mit Cloxacillin -Scheibe. Eine Heilbreite in einem der Cephalosporine zeigt eine positive.

Sie können die Cloxacillin -Scheibe auch durch eine 9 mm des Whatman -Filterpapiers Nr. 6 ersetzen, die mit Borsäure (400 µg) mit einem Abstand von 18 mm imprägniert ist. Es wird gleich dem vorherigen interpretiert.

Schließlich untersuchen Sie die Produktion von Metalobethalactamasen, insbesondere in Pseudomonas aeruginosa, Eine mit 10 µl Ethylendiaminteraessigsäure (EDTA 750 µg) und Thioglykolsäure (SMA 300 µg) verwendete Festplatte wird verwendet.

Der Test ist positive. Dieses Ergebnis muss durch den modifizierten Hodge -Test bestätigt werden.

Diese Methode besteht darin, einen Stamm von zu inokulieren Escherichia coli ATCC 25922 auf der Müeller Hinton -Platte. Eine Imipenem -Scheibe in der Mitte der Platte wird platziert, und dann wird ein Stro der Scheibe an der Peripherie mit der Stamm P. aeruginosa verdächtig. Sie können bis zu 4 Stämme pro Platte ausprobieren.

Der Test ist positiv, wenn es eine Verzerrungszone des Imipenem -Halos um den Stro gibt.

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Ursachen für fehlerhafte Ergebnisse

-Schlecht erhaltene Antibiotika -Scheiben können falsche Resistenz erzeugen. Zum Beispiel ist die Oxacillinscheibe sehr anfällig für Temperaturänderungen.

-Ein pH -Wert des Mediums unterhalb der angegebenen (Säure) erzeugt kleinere Halos in Aminoglykosiden und Makroliden (Risiko einer falschen Resistenz) und größere Halos in Penicillin, Tetracyclin und Novobiocin (Risiko einer falschen Sensitivität).

-Wenn der pH über den angegebenen (alkalischen) der oben beschriebenen Effekte sind.

-Die Medien mit hohem Thymin- und Thymidinkonzentrationen beeinflussen die hemmischen Hemmung von Sulfonamid und Trimetoprim -Hemmung signifikant.

-Hohe Konzentrationen an Calcium und Magnesium erzeugen falsche Resistenz von Aminoglykosiden, Polymixin B und Tetracycline vor Stämmen von Pseudomonas aeruginosa.

-Niedrige Konzentrationen von Calcium und Magnesium erzeugen falsche Sensibilität von Aminoglykosiden, Polyxin B und Tetracycline vor Stämmen von Pseudomonas aeruginosa.

-Das Vorhandensein von Zink beeinflusst die Ergebnisse von Carbapenems -Scheiben (Imipenem, Meropenem und Ertapenem).

-Die Dicke des Mediums unter 3 mm führt zu Ergebnissen falscher Empfindlichkeit, während eine Dicke über 5 falsche Widerstand erzeugt.

-Die Mobilisierung von Scheiben im Antibiogramm ergibt deformierte Halos, da die Entladung von Antibiotika unmittelbar ist.

- Sehr schwache Impfungen beeinflussen die Ergebnisse, da es kein einheitliches oder konvergiertes Wachstum des Agars gibt. Eine notwendige Erkrankung zur Messung von Hemmhalos kann zusätzlich zu den Halos größer als normal ergeben.

-Inokulos zu beladen können kleinere als normale hals ergeben.

-Respektieren Sie den Abstand zwischen Discs nicht, indem eine Halo -Überlappung mit einem anderen überlappt und kann nicht richtig gelesen werden.

-Inkubieren mit co₂ Erhöht die Halos von Tetracyclin- und Meticillin -Scheiben.

-Inkubieren bei Temperaturen unter 35 ° C erzeugen größere Halos.

-Das Blutaggregat verringert die Größe des Sulfamid -Halos.

Einschränkung

Die Empfindlichkeit eines Antibiotikums im Antibiogramm gegen einen Mikroorganismus (In vitro) Es ist keine Garantie dafür, dass es funktionieren wird In vivo.

QA

Um zu wissen, ob das Medium die richtige Menge Timina enthält, muss eine Belastung gesät werden von Enterococcus faecalis ATCC 29212 und beweisen die Anfälligkeit für Trimetoprim Sulfametoxazol (SXT), es muss einen gleichen Halo oder> 20 mm ergeben, um zufriedenstellend zu sein.

Verweise

1. Cona e. Bedingungen für eine gute Anfälligkeitsstudie durch Verbreitungstest. Rev Chil Infect, 2002; 19 (2): 77-81
2. Britania Laboratories. Müeller Hinton Agar. Erhältlich bei: Britanialab.com