Sabouraud Agar Was ist, Foundation, Vorbereitung, verwendet

Er Sabouraud Agar, Auch als Sabouraud Dextrose Agar bekannt, ist es ein solides Kulturmedium, das insbesondere für die Isolation und Entwicklung von Pilzen wie Hefen, Formen und Dermatophyten angereichert ist.

Daher kann dieses Medium in einem mikrobiologischen Labor nicht fehlen, um das Vorhandensein von pathogenen oder opportunistischen Pilzen zu untersuchen, sei. Es ist auch ideal für das Wachstum filamentöser Bakterien wie Streptomices und Nokardien. Seine Verwendung ist sehr breit, da es in menschlichen, tierischen, pflanzlichen und industriellen Mykologie verwendet werden kann.

ZU. Sabouraud -Agar ohne Sau. B. Sabouraud -Agar mit Hefe gepflanzt. Quelle: Fotos vom Autor MSC aufgenommen. Marielsa Gil

Dieses Medium wurde 1896 vom herausragenden Dermatologen Raimond Sabouraud gegründet, der weltweit bei Kopfhautstörungen anerkannt wurde, hauptsächlich durch Dermatophyten verursacht.

Seine Schöpfung war so wichtig, dass sie seitdem verwendet wurde und heute beibehalten wird, obwohl sie mit einigen Änderungen.

Obwohl es für Pilze etwas Besonderes ist, können in diesen mittleren Bakterien wachsen. Daher ist für Proben mit gemischter Flora die Einbeziehung von Antibiotika in sein Präparat erforderlich und hemmen somit das Wachstum der Bakterienflora, die möglicherweise vorhanden sein kann.

Die Wahl des Antibiotikums muss sorgfältig durchgeführt und unter Berücksichtigung der Art von Pilz berücksichtigt werden, die wiederhergestellt werden sollen, da einige in Gegenwart bestimmter Substanzen gehemmt werden.

Basis

Sabouraud Dextrose Agar ist ein Mittel, das in ihrer ursprünglichen Formulierung aufgrund seines 5 -sauren pH -Werts schwach selektiv ist.6 ± 0.2 Es können jedoch Bakterien entwickelt werden, hauptsächlich bei längeren Inkubationen.

Das Medium enthält Pankreas -Pankreas -Pestik -Pepton von tierischen Gewebe, die die Kohlenstoff- und Stickstoffquelle für die Entwicklung von Mikroorganismen liefern.

Es enthält auch eine hohe Glukosekonzentration, die als Energiequelle für das Wachstum von Pilzen über Bakterien fungiert. All dies gemischt mit Agar -Agar, Komponente, die Ihnen die entsprechende Konsistenz verleiht.

Auf der anderen Seite kann Sabouraud Dextrose Agar selektiv sein, wenn Antibiotika hinzugefügt werden.

Bei Antibiotika ist es besonders nützlich in Wundproben, offenen Geschwüren oder einer Probe, bei der eine große bakterielle Kontamination vermutet wird.

Die meisten verwendeten Kombinationen von Sabouraud -Dextrose mit Antibiotika

-Sabouraud -Agar mit Chloramphenicol: ideal für die Wiederherstellung von Hefen und filamentösen Pilzen.

-Sabouraud -Agar mit Gentamycin und Chloramphenicol: Fast alle filamentösen Pilze und Hefen wachsen in diesem Medium und hemmen eine große Anzahl von Bakterien, einschließlich Enterobakterien, Pseudomonas und Staphylococcus.

-Sabouraud -Agar mit Cycloheximid: Es ist besonders nützlich für Proben aus Haut- oder Atemwegstrakt, solange der Verdacht dimorpher Pilze ist.

Cycloheximid sollte mit Vorsicht verwendet werden; Obwohl es verwendet wird, um das Wachstum von nicht -pathogenen oder Umweltpilzen und Hefen zu hemmen, die als Schadstoffe in einer Probe vorhanden sein können, hemmt es auch das Wachstum einiger Pilze wie z Cryptococcus Neoformans,  Aspergillus fumigatus, boydii Allesscheria, Penicillium sp und Andere opportunistische Pilze.

-Sabouraud -Agar mit Chloramphenicol plus Cycloheximid: Es wird hauptsächlich zur Isolierung von Dermatophyten und dimorphen Pilzen verwendet. Hat die Unannehmlichkeiten, die einige Arten opportunistischer Pilze hemmen, wie z Candida keine albicans, Aspergillus, Zigomicetos oder c. Neoformans.

-Sabouraud -Agar mit Chloramphenicol, Streptomycin, Penicillin G und Cycloheximid: Es ist ideal für extrem kontaminierte Proben mit Bakterien und Saprophytenpilzen, aber es hat die Unannehmlichkeit, das Wachstum von zu hemmen Actinomyces und Nocardias, Zusätzlich zu den oben genannten opportunistischen Pilzen.

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Vorbereitung

Wenn sie getrennte Zutaten haben, kann es wie folgt vorbereitet werden:

Sabouraud Dextrose 

Wiegen:

- 40 g Dextrose

- 10 g Pepton

- 15 g Agar -Agar

- Messen Sie 1000 ml destilliertes Wasser

Alle Zutaten sind gemischt, der pH wird auf 5,6 eingestellt. Die gelösten Stoffe werden durch Kochen gelöst, 20 ml des Medium.

Röhrchen mit Baumwolldeckel. Quelle: Foto des MSC -Autors aufgenommen. Marielsa Gil

Andere Rohrmaßnahmen können ebenfalls gemäß der Verfügbarkeit verwendet werden.

Sie bringen den Autoklav 10 Minuten in eine Druckatmosphäre (121 ° C). Es sollte in der autoklavierten Zeit nicht überschritten werden. Beim Verlassen des Autoklaven sind die Röhrchen mit Hilfe einer Stütze geneigt, bis sie sich in einem Flötenspitze verfestigen.

Eine andere Möglichkeit besteht darin, die Zutaten durch Erhitzen aufzulösen, bis sie kocht. In derselben autoklavischen Felola 10 Minuten und dann 20 ml in Petri -Platten verteilen.

Wenn ein Sabouraud -Dextrose -Medium verfügbar ist, das bereits alle Zutaten enthält, wird die vom Handelshaus für einen Liter Wasser angegebene Menge angegeben. Der Rest der Schritte entspricht der oben beschriebenen.

Sabouraud Dextrose Agar (Emmons Modification)

Wiegen:

-  20 g Dextrose

- 10 g Pepton

-  17 g Agar -Agar

-  Messen Sie 1000 ml destilliertes Wasser

Alle Zutaten sind gemischt, der pH wird auf 6,9 eingestellt. Fahren Sie in gleicher Weise wie im vorherigen Fall fort.

Es gibt Handelshäuser, die das Medium mit allen Zutaten anbieten. In diesem Fall wiegen und bereiten Sie die Art und Weise vor.

Sabouraud Dextrose -Agar (Emmons Modification) mit Chloramphenicol

Chloranfenicol Mutterlösung

- 500 mg Chloramphenicol -Basis wiegen

- Messen Sie 100 ml 95% Ethanol

- Mischen

Das Sabouraud -Dextrose -Medium (Emmons) wird wie bereits beschrieben und zusätzlich für jeden Liter von 10 ml Chloranphenicol -Mutterlösung vor dem Autoklaven hergestellt.

Sabouraud Emmons mit Cycloheximid -Dextrose

Cycloheximid -Mutterlösung

- Wiegen 5 gr Cycloheximid

- 100 ml Aceton messen

- Mischen

Der Sabouraud Dextrose Apoure.

Sabouraud Dextrose Agar (Emmons) mit Chloramphenicol und Cycloheximid

Das Sabouraud -Dextrose -Medium (Emmons) wird wie bereits beschrieben und zusätzlich für jeden Liter von 10 ml Chloranphenicol -Mutterlösung und 10 ml Cycloheximid -Mutterlösung vor dem Autoklaven hergestellt.

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Andere Antibiotika, die hinzugefügt werden können

zwanzig.000 bis 60.000 Penicillin -Einheiten pro Liter Medium.

30 mg Streptomycin pro Liter Medium.

Beide müssen nach dem Medium eingebaut werden, leicht gekühlt (50-55 ° C).

0,04 g Neomycin pro Liter Medium.

0.04 g Gentamicin pro Liter Medium.

Besondere Überlegungen

Sicherheit wird vorgezogen, Sabouraud -Dextrose -Agar in keilförmigen Röhrchen (in einem Flötenpeak geneigt) und nicht in Petri -Platten zu säen, um die Dispersion und Einatmen von Sporen zu vermeiden.

Es ist wichtig, dass die Röhrchen mit Sabouraud -Alter mit Baumwolle und nicht mit einem Fadendeckel bedeckt sind, da gezeigt wurde Kokzidioides immitis. Darüber hinaus sind die meisten Pilze Aerobes.

Bei der Verwendung eines Fadendeckels nicht fest geschlossen.

QA

Die vorbereiteten Medien sollten zur Qualitätskontrolle gestellt werden, um ihre ordnungsgemäße Funktion zu überprüfen. Dafür werden bestimmte Stämme gesät.

Für Sabouraud Dextrose Candida albicans, das muss ein ausgezeichnetes Wachstum haben. Eine andere Platte wird mit Stämmen geimpft von Escherichia coli, muss vollständig gehemmt werden.

Eine Plaque ohne Impfung wird ebenfalls inkubiert, bei der kein Mikroorganismus wachsen sollte.

Für Sabouraud Dextrose -Agar mit Chloramphenicol und Cycloheximid  Trichophyton Mentagrophyten, muss sich gut entwickeln. Eine andere Platte wird mit einem Stamm von inokuliert Aspergillus flavus, in dem es knappes Wachstum oder Nichtwachstum geben muss. Zusätzlich ist eine nicht oziulierende Plaque inkubiert, um ihre Sterilität zu demonstrieren.

Für Sabouraud Dextrose mit Cycloheximid, Stämmen von Candida albicans, Trichophyton rubrum  entweder Canis microsporum, das muss ein gutes Wachstum zeigen.

Ebenso eine Belastung von Aspergillus flavus, knappes Wachstum oder Nichtwachstum nachweisen. Schließlich inkubieren Sie eine Platte, ohne für die Sterilitätskontrolle zu impft.

Anwendungen

Primäranbau

Der klassische Sabouraud -Dextrose -Agar enthält 4 g Dextrose und ist hervorragend als primäres Isolationsmittel, da es die charakteristische Morphologie jedes Pilzes zeigt.

Es eignet sich auch hervorragend zum Demonstration der Pigmenteproduktion. Es ist jedoch nicht das am besten geeignete Mittel, um Sporulation zu beobachten.

Es wird auch nicht empfohlen, sich zu kultivieren Blastomyces Dermatitidis, die durch die hohe Konzentration der gegenwärtigen Glukose gehemmt wird.

Andererseits müssen bestimmte Überlegungen im Auge behalten werden.

Einige Pilze entwickeln sich bei Raumtemperatur besser, wie z.

Daher ist es manchmal notwendig.

Zum Beispiel, Sporothrix Schenckii Es ist auf zwei Tellern gesät; Einer ist Incuba bei Raumtemperatur, um die Formphase zu erhalten, und der andere wird bei 37 ° C inkubiert, um die upaduriforme Phase zu erhalten, aber im letzteren ist es erforderlich, 5% Blut zur Umwelt hinzuzufügen.

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In anderen Fällen, wie in Mythomproben, werden zwei Sabouraud -Agarplatten gesät, eine mit Chloramphenicol und eine mit Cycloheximid. Das erste wird das Wachstum von Kausalmitteln des Mythoms mythischer Herkunft (Eumicetom) und die zweiten Kausalmittel von Miketomen bakterieller Herkunft wie Actinomicetome ermöglichen.

Sporulation

Das von Emmons modifizierte Sabouraud -Dextrose -Agar enthält 2 g Dextrose und dient nicht nur für die Isolation, sondern auch für die Sporulation und Erhaltung von Pilzen.

In diesem Medium, wenn Sie Stämme von wiederherstellen können Blastomyces Dermatitidis.

Erhaltung

Um Pilzpflanzen zu erhalten, können sie im Kühlschrank (2-8 ° C) gelagert werden. Die Erhaltungszeit kann zwischen 2 und 8 Wochen variieren. Nach dieser Zeit müssen sie subjektiv sein, um den Vorgang zu wiederholen.

Einige Pilze bleiben bei Raumtemperatur besser, wie z Epidermophophyton -Foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. Violaceum Und Microsporum audounii.

Die Aufrechterhaltung der Dehnung kann verlängert werden, um den Pleomorphismus zu vermeiden, wenn die Dextrose des Agar vollständig beseitigt ist und wenn die Agarmenge zur Umwelt reduziert wird, um Trockenheit zu vermeiden.

Mikrokulturen

Für die Identifizierung einiger filamentöser Pilze müssen Mikrokulturen mithilfe von Sabouraud -Agar oder anderen besonderen Mitteln durchgeführt werden, um sexuelle und asexuelle Fortpflanzungsstrukturen zu beobachten.

In der menschlichen Mykologie

Es wird hauptsächlich für die Diagnose von Pilzkrankheiten verwendet, insbesondere für solche, die die Haut und ihre Annexes (Haare und Nägel) betreffen, die sich betreffen.

Proben können Sekrete, Exsudate, Haut, Haare, Nägel, Sputum, LC oder Urin sein. Häufig isolierte Krankheitserreger sind Dermatophyten, Pilze, die subkutane und systemische Mykose verursachen.

Tier Mykologie

Tiere werden oft von Pilzinfektionen betroffen, daher ist Sabouraud -Agar in der tierischen Mykologie genauso nützlich wie beim Menschen.

Zum Beispiel können Dermatophyten Tiere beeinflussen. Dies ist der Fall von Canis var distortum microsporum, Das infiziert häufig Hunde, Katzen, Pferde, Schweine und Affen. Zusätzlich, Mikrosporum -Gipseum infiziert Hunde, Katzen und Vieh.

Vögel wie Hühner, Hähne und Hühner sind von betroffen von Microsporum Gallinae.

Andere Pilze, wie z Zymonema farciminosum, Sie sind auch Krankheitsursache bei Tieren, hauptsächlich bei Pferden, Maultieren und Eseln, die eine wichtige Entzündung in Lymphgefäßen erzeugen.

Sporothrix Schenkii und Histoplasma capsulatum Sie betreffen häusliche und menschliche Tiere.

Umweltmykologie

Viele pathogene oder opportunistische Pilze können sich zu einem bestimmten Zeitpunkt in einer bestimmten Umgebung konzentrieren, insbesondere in Operationssälen und Intensivstationen (Intensivstationen) von Kliniken und Krankenhäusern. Daher ist es notwendig, dasselbe zu kontrollieren.

Andere verletzliche Räume sind alte Bibliotheken und Gebäude, die durch die Konzentration von Umweltpilzen beeinflusst werden können.

In Umweltstudien wird Sabouraud Dextrose Agar für Pilzisolation verwendet.

Industrielle Mykologie

Sabouraud Dextrose Agar kann für die Untersuchung von Verschmutzung von Pilzen bei der Herstellung von Kosmetika, Essen, Getränken, Leder, Textilien unter anderem nicht fehlen.

Pflanzenmykologie

Pflanzen leiden auch unter Pilzkrankheiten, die verschiedene Teile der Pflanze beeinflussen, was sogar die Ernte beenden kann, was zu großen Verlusten der Landwirtschaft führt.

Verweise

1. Valtek Laboratory. (2009). Sabouraud Dextrose Agar mit Cycloheximida. Erhältlich bei: Andinamedica.com.
2. Navarro oder. (2013). Tierärztliche Mykologie. Nationale Agrar Universität. Nicaragua.