TCBS Agar Was ist, Grundlage, Vorbereitung, Verwendung

Er TCBS Agar Es ist eine hochselektive und differentielle feste Kultur, die insbesondere für die Isolierung und Kultivierung von Bakterien der Gattung Vibrio verwendet wird Vibrio cholerae, v. Vulnificus Und V. parahaemolyticus als Hauptpathogene dieses Genres.

Das Akronym TCBS bedeutet Thiosulfat Gallen Gallen Citrat. Dieser Agar ist auch als selektives Medium für Vibrationen bekannt. Die ursprüngliche Formel wurde von Nakanishi erstellt und anschließend von Kobayashi modifiziert.

Es besteht aus Hefeextrakt, Pepton aus Fleisch, Triptein, Natriumcitrat, Natriumthiosulfat, Ochsen Galle, Saccharose, Natriumchlorid, Eisencitrat, Bromoolblau, Thymolblau und Agar.

Diese Zusammensetzung ermöglicht eine angemessene Entwicklung von Vibriumarten aus Wasser, Nahrung und Kot; außer Vibrio Hollisae, Das wächst in diesem Medium nicht. Darüber hinaus kann das TCBS -Medium das Wachstum anderer begleitender Bakterien, insbesondere Coliformen, hemmen.

Aufgrund der schwerwiegenden Magen-Darm- und Extra-Intestinalprobleme, die einige Arten der Gattung Vibrio produzieren, ist ihre Diagnose sehr wichtig. Der Mensch ist hauptsächlich mit dem Verzehr von rohen oder wenig gekochten Nahrung des Meeres oder kontaminierter Gewässer infiziert, aber auch durch Wundinfektion.

Aus diesem Grund müssen klinische Laboratorien TCBS -Agar in die Untersuchung von Kopoults von Flüssighockerproben einbeziehen, insbesondere mit Reiswasserauftritten. Vor allem, wenn der Patient sich darauf bezieht.

Basis

Der Extrakt von Hefen, die Peptone von Fleisch und die Tripteína sind die nahrhafte Quelle dieses Mediums. TCBS -Agar ist jedoch ein unwirtliches Medium für die meisten Bakterien.

Seine hohe Selektivität wird durch das Aggregat von Natriumcitrat und Ochsengallen angegeben; Beide sind inhibitorische Wirkstoffe, die dem Medium auch einen alkalischen pH -Wert liefern, das Wachstum der dazugehörigen Flora einschränken und das Wachstum von begünstigen V. Cholera, unter anderen Arten. Vor allem Vibrio Cholerae ist sehr empfindlich gegenüber Säure.

Natriumchlorid ist für seinen Teil osmotisch ausbalanciert. Darüber hinaus wirkt es in der Konzentration hoch.

Tams sind der fermentierbare Zucker, der zusammen mit den Blue -Bromotimol -Blau- und blauen pH -Indikatoren den mittleren Differentialcharakter ergeben. Aus diesem Grund ist es mit diesem Medium möglich, die Fermentationsstämme von Nicht -Fermentieren zu unterscheiden.

Die Kolonien der fermentären Saccharosestämme entwickeln sich in Farbe und werden das Medium durch die Herstellung von Säuren von grün bis gelb werden. Nicht -fermentierende durchscheinende wächst und die Mediumreste der ursprünglichen Farbe (grün).

Ebenso enthält dieses Medium Natriumthiosulfat als Quelle für Schwefel und Eisen Citrat als aufschlussreiches Mittel. Beide zeigen Bakterien, die in der Lage sind, Wasserstoffsulfid (farbloses Gas) zu produzieren,. Die h₂S entsteht aus Thiosulfat und reagiert dann mit Eisen Citrat, ein sichtbarer schwarzer Niederschlag wird gebildet.

Schließlich ist der Agar derjenige, der die Umwelt feste Konsistenz verleiht.

Vorbereitung

Wiegen Sie 89 g des dehydrierten Mediums und löst sich in einem Liter destilliertem Wasser auf. Helfen Sie der Auflösung für häufige Erhitzen und Aufregung. Die Mischung kann bis zu 2 Minuten gekocht werden.

Dieses Medium ist nicht autoklava. Nach seiner Lösung wird es direkt auf sterilen Platten serviert. Durch Verfestigung werden sie in umgekehrter Weise in Blutplättchen bestellt und in Kühlschrank (2-8 ° C) bis zur Verwendung gelagert.

Das Medium nach der Vorbereitung muss bei pH 8,6 ± 0,2 liegen.

Die Farbe des dehydrierten Mediums ist leicht beige oder beigegrün, und die Farbe des Medium.

Es ist wichtig, die Platten vor dem Aussaat der Proben temperieren zu lassen.

Verwenden

Die häufigste Probe für die vibros Isolierung ist Durchfallkot.

Die Stuhlproben können nicht sofort in der selektiven Umgebung gesät werden, sie müssen mitten in Cary Blair transportiert werden.

Um die Empfindlichkeit der Ernte zu erhöhen, können die Kot mit Peptonada Wasser auf pH 8,4 als Anreicherung maximal 8 Stunden lang übergeben werden. Von dort aus ist es subjektiv für das TCBS -Medium.

Es sollte auch berücksichtigt werden, dass einige vibrious Stämme bei immunsupprimierten Patienten Septikämie verursachen können, daher können sie von Blutkulturen isoliert werden. Ebenso können Proben von Nahrung und Nahrung aus dem Meer analysiert werden, wenn es epidemische Ausbrüche der Cholera -Krankheit gibt.

Gesät

Das Inokulum der untersuchten Stichprobe muss herausragend sein, das gesät wird durch die Erschöpfungsstrahlemethode durchgeführt. Die Platten werden 24 Stunden bei 37 ° C bei Aerobiose inkubiert.

Die mutmaßlichen Kolonien von Vibrio Cholerae Sie sind mittelgroß, glatt, undurchsichtig, dünn und gelb gefärbt, weil sie die Saccharose fermentieren.

In ähnlicher Weise wachsen Arten aus V. Alginolyticus, V. Fluss, V. Hareyi, v. Cincinnatiensis, v. Furissii, v. Metschnikovii und einige V. Vulnificus. Andere klinisch wichtige Arten wie z V. parahaemolyticus Sie fermentieren Saccharose nicht und entwickeln sich als olivgrüne Kolonien.

Auf der anderen Seite muss berücksichtigt werden, dass einige Stämme von Aeromonen und Plesiomonen, die Oxidase (+) sind. Während einige Pseudomonas -Stämme auch Oxidase (+) als grüne Kolonien wachsen V. parahaemolyticus.

Einschränkung

Der Oxidase -Test, der für die Vibrio -Gattung positiv ist. Die Verbindungen des Mediums stören in diesem Test stark. Daher muss es von Probanden im Blutagar erfolgen.

QA

Um zu beweisen, dass das Medium in gutem Zustand ist, ist es ratsam.

Dafür können Sie Stämme verwenden:

-Vibrio Cholerae - zufriedenstellendes Wachstum (gelbe Kolonien, durchscheinende Kante).

-Vibrio parahaemolyticus - zufriedenstellendes Wachstum (Kolonie mit grünem Zentrum und durchscheinender Kante).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - Befriedigendes Wachstum (gelbe Kolonien mit Halos der gleichen Farbe um die Kolonie).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - Gesamt- oder teilweise Hemmung (kleine gelbe oder durchscheinende Kolonien).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- Partielle oder totale Hemmung (Blue Colonies).

-Escherichia coli ATCC 25922 - vollständig gehemmt.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Gesamt- oder teilweise Hemmung. (Kleine Kolonien grüne Kante durchscheinende Kante).

Inkubation eines Mediums ohne Impfung sollte keine Änderung haben.

Verweise

1. BD Laboratory. Bd. TCBS Agar. Verfügbar bei: BD.com
2. Britania Laboratories. Mittel TCBs. Erhältlich bei: Britanialab.com