Thayer Martin Agar Was ist, Foundation, Vorbereitung, verwendet

Er Thayer Martin Agar Es ist ein sehr nahrhaftes und selektives festes Medium für die Isolierung von Neisseria meningitidis und Neisseria gonorrhoeae; beide als pathogene oder klinische Bedeutung bekannt.

Eine der wichtigsten besonderen Merkmale des Thayer Martin Agar ist der hohe Gehalt in nahrhaften Ergänzungen. Diese Eigenschaft ist unverzichtbar, da Neisserien sehr anspruchsvolle Mikroorganismen aus Nährstoffstand sind und daher nicht in gemeinsamen Medien wachsen.

Andererseits ist die Zugabe von Inhibitoren, die das Wachstum der da.

Dieser Agar besteht aus GC -Basenagar, Hämoglobin, zusätzlichen Nahrungsergänzungsmitteln und einem Komplex hemmender Substanzen (Antibiotika und Antimykotika). Gewerbehäuser verkaufen jedes der Nahrungsergänzungsmittel getrennt.

Die Stichprobe in diesem Medium hängt von dem gesuchten Mikroorganismus ab, der gesucht wird. Für Neisseria Gonorrhoeae Ideale Proben sind Vaginal- und Harnröhrensekrete. Während für Meningokokken Die am häufigsten verwendeten Proben sind CSF, Exsudates Pharyngeal und Nasopharyngeal.

Basis

Neisserien sind Mikroorganismen als ärgerlich und daher ist ihre Isolation schwierig.  Daher ist Thayer Martín ein komplexes Medium und jede seiner Komponenten erfüllt eine Funktion, die unten erklärt wird:

GC -Basislagar

Der GC -Agar enthält Peptonprotein, Maisstärke, Natriumchlorid und Dipotium -Phosphat. Seine Komponenten liefern grundlegende Nährstoffe für die mikrobielle Entwicklung, neutralisieren toxische Fettsäuren, tragen zur Aufrechterhaltung des osmotischen Gleichgewichts bei, definieren den pH -Wert und bieten solide Konsistenz für die Umwelt.

Hämoglobin

Hämoglobin liefert Faktoren V und X (Nikotinamid Adenin Dinukleotid NAD bzw. Hemina). Daher wachsen in diesem Medium auch Arten aus Haemophilus. Hämoglobin kann kommerziell dehydriert erhalten werden oder kann der Umwelt frisch definiertes Rinder hinzufügen.

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Anreicherungsergänzung

Andererseits sollte das Thayer-Martin-Medium auch eine Anreicherungsergänzung hinzugefügt werden, da die Nährstoffe, die der Grundagar enthält, für die Anforderungen der Gattung Neisseria nicht ausreichen.

Das am häufigsten verwendete Anreicherungspräparat heißt Isavalex. Dies enthält Glutamin, Adenin, NAD, Cocarboxylase, Guanin, Eisen Nitrat, Benzoikum-P-Aminosäure, Vitamin B12, Thiamin und Glukose. Alle diese Verbindungen sind für die gute Entwicklung pathogener Neisserien notwendig.

Inhibitoren

Weil es sich um hoch nahrhafte Medium -Inhibitoren handelt, die das Wachstum von Mikroorganismen aus der üblichen Flora der Region verhindern und somit die Isolierung der Gattung Neisseria bevorzugen.

Der Inhibitorkomplex besteht aus Vancomycin, Colistin und Nistatin. Vancomycin hemmt das Wachstum von gram positiven Bakterien, Colistin verhindert die Entwicklung von Gram -negativen Bakterien wie Pseudomonas und einigen saprophytischen Neisers, und Nistatin wirkt auf Hefen wie Hefen wie Hefen Candida albicans.

Dann wurde der Thayer Martin Agar geändert; Die Veränderungen bestanden aus der Zugabe von Trimetoprim, der Zunahme der Agarmenge und des Aggregats der zusätzlichen Glukose. Diese Veränderungen verbesserten die Wiederherstellung der Arten von signifikant Neisseria gonorrhoeae.

Es ist zu beachten. In diesem Sinne sind Antibiotika diejenigen, die dem mittleren Thayer Martin den selektiven Charakter vermitteln.

Vorbereitung

Thayer Martin Original Agar

-GC Agar

Wiegen Sie 8,2 g des dehydrierten GC -Mediums und suspendieren bei 100 ml. 1 Minute lang mischen und kochen, um sich häufiger aufzulösen, um mich in seiner Gesamtheit aufzulösen. Sterilisieren Sie die Mischung in Autoklaven bei 121 ° C 15 Minuten lang.

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-2% Hämoglobin

2 g dehydratisiertes Hämoglobin in 2 oder 3 ml heißes destilliertem Wasser aussetzen, um eine gleichmäßige Mischung zu bilden. Fügen Sie nach und nach Wasser hinzu, um ein Volumen von 100 ml zu vervollständigen. Die Suspendierung muss vor der Sterilisierung homogen sein.

15 Minuten in Autoklave sterilisieren.

-Anreicherungsergänzung

Rekonstituieren Sie die kommerzielle Fläschchen mit dem von demselben Handelshaus bereitgestellten Verdünnungsmittel. Gut mischen. Die zu verwendende Menge an Verwendungszwecke wird in der Kit -Anweisung angegeben.

-Hemmungsergänzung v.C.N (Vancomycin, Colistin, Nistatin)

Rekonstituieren Sie die Fläschchen mit dem vom Handelshaus bereitgestellten Verdünnung. Gut mischen. Die zu verwendende Menge an Verwendungszwecke wird in der Kit -Anweisung angegeben.

-Vorbereitet

Für alle 100 ml GC -Agar gehen wie folgt vor:

Wenn der GC -Agar den Autoklav verlässt, lassen. Petrisch -Sterilplatten mischen und servieren.

Verfestigen und im Kühlschrank bis zur Verwendung sparen lassen.

Die Farbe des vorbereiteten Mediums ist kirschrot. Der endgültige pH -Wert des Mediums beträgt 7,2 ± 0,2

Thayer Martin Agar modifiziert

Wiegen Sie 8,2 g des dehydrierten GC -Mediums und suspendieren bei 100 ml. Fügen Sie 1 gr Agarwasser hinzu und fügen Sie 0,3 g Glukose hinzu. 1 Minute lang mischen und kochen, um sich häufiger aufzulösen, um mich in seiner Gesamtheit aufzulösen. Sterilisieren Sie die Mischung in Autoklaven bei 121 ° C 15 Minuten lang.

Bereiten Sie Hämoglobin- und Anreicherungspräparate wie oben beschrieben vor.

Die verwendete Hemmungsergänzung ist V.C.N.T (Vancomycin, Colistin, Nistatin, Trimetoprim).

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-Vorbereitet

Fahren Sie in der für den Thayer Martin Original Agar beschriebenen Weise fort.

Verwenden

Thayer Martin Agar sollte vor dem Aussaat der Proben sein. Am häufig verwendeten Proben sind Pharyngeal -Exsudate, nasale Exsudate, Vaginal, Harnröme und/oder Rektal und CSF.

Verwenden Sie frisch genommene Proben und machen Sie starke Inokulums über den Agar. Die Proben werden direkt aufgrund der Materialentladung gesät und dann aufgrund der Erschöpfung auf der Oberfläche aufgefallen.

Die Platten werden 24 bis 48 Stunden bei 35-37 ° C im Mikroaerophilie-Krug inkubiert (5% CO₂). Nach der Inkubationszeit werden die Platten auf der Suche nach kleinen Kolonien, grauem und manchmal mukoiden Aussehen untersucht.

Führen Sie Gram- und bestätigende biochemische Tests für verdächtige Kolonien durch.

QA

Um die Qualitätskontrolle durchzuführen, kann Martin die folgenden mikrobiellen Stämme verwenden.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 und Meningokokken ATCC 13090; In beiden Stämmen wird eine zufriedenstellende Entwicklung erwartet.

Die folgenden Stämme müssen ebenfalls enthalten sein: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 und Candida albicans ATCC 10231. In allen von ihnen wird in diesem Medium eine totale oder teilweise Hemmung erwartet.

Einschränkungen

-Denken Sie daran, dass in den Mittelbakterien, die gegen die verwendeten Inhibitoren resistent sind.

-Es gibt Stämme von Neisseria Gonorrhoeae Dies kann empfindlich gegenüber der verwendeten Vancomycin -Konzentration sein. Aus diesem Grund wird empfohlen, parallelen Schokoladenagar zu verwenden, das mit Isovalex ergänzt ist, jedoch ohne Inhibitoren.

-Es gibt nistatinresistente Hefestämme, die in diesem Medium wachsen können und die Isolierung pathogener Neisserien, insbesondere Gonokokken, beeinträchtigen können.

Verweise

1. Britania Laboratories. Thayer Martin Media modifiziert. Erhältlich bei: Britanialab.com