Agar Tsi Was ist, Foundation, Vorbereitung, verwendet

Er TSI Agar o Triple Sugar Iron Agar ist ein festes Kulturmedium, das als biochemischer Test dient. Es basiert auf Beweisen.

Seine Komposition und Fundament sind dem Kigler -Hierro -Test sehr ähnlich, mit dem Unterschied, dass letztere nur Glukose und Laktose enthält. Andererseits - wie der Name angibt - enthält der Dreifachzucker -Eisenagar drei fermentierbare Kohlenhydrate: Glukose, Laktose und Saccharose.

Darüber hinaus hat das TSI -Medium vier Protein -Derivate, die es zu einem sehr nahrhaften Agar machen: Hefeextrakt, Fleischextrakt, Pepton und Peptonprotein. Es enthält auch Eisen Ammoniumsulfat, Natriumthiosulfat, Natriumchlorid, Phenolrot und Agar.

Die Unfähigkeit eines Mikroorganismus bei der Fermentation der in der Umwelt vorhandenen Glukose schließt es sofort von der Zugehörigkeit zur Familie Enterobacteriaceae aus. Daher ist dieser Test von entscheidender Bedeutung, um zu entscheiden, welche Identifikationsroute zur Bestimmung des Geschlechts und der Spezies ermittelt werden soll.

Jedes Labor entscheidet, ob es mit TSI AGAR oder mit Kligler Hierro funktioniert.

Basis

Jede der Verbindungen erfüllt eine Funktion innerhalb des Mediums.

Natrium- und Agarchlorid

Natriumchlorid ist notwendig, um das osmotische Gleichgewicht des Mediums aufrechtzuerhalten. Während der Agar eine solide Konsistenz gibt.

PH -Indikator (Phenolrot)

Der vorbereitete mittlere pH -Wert wird bei 7,3 ausgeglichen und der pH -Indikator (Phenolrot) wird unter 6,8 gelb gelb. Dies bedeutet, dass kleine Mengen von Säuren, die durch die Fermentation von Zucker erzeugt werden.

Wenn nicht die Fermentation auftritt.

Proteinderivate (Hefeextrakt, Fleischextrakt, Pepton und Peptonprotein)

Wenn Bakterien die im TSI -Agar vorhandenen Proteine ​​metabolisieren, werden Amine erzeugt, die das Medium (hauptsächlich auf der Ebene der Lünette) alkalisieren, da die Reaktion Sauerstoff benötigt. Die Amine verwandeln die Lünette zu starkem Rot.

Dies hängt jedoch von der Fähigkeit ab, Bakterien zu fermentieren oder nicht Kohlenhydrate.

Kohlenhydratfermentation (Glukose, Laktose und Saccharose)

Die Untersuchung der Zuckerfermentation kann mehrere Bilder ergeben und jeder wird unterschiedlich interpretiert. Die Interpretation des Tests unterteilt Mikroorganismen in 3 Kategorien: Nicht -Glucose -Fermenter, nicht -Laktose -Fermenter und Lactose/Saccharose -Fermenter.

Es ist zu beachten, dass die Menge an Glukose in der Mitte begrenzt ist, während die Konzentration von Laktose und Saccharose 10 -mal höher ist.

Bakterien der Enterobacteriaceae -Familie und anderer Glukose -Fermenting -Mikroorganismen beginnen diesen Zucker zu fermentieren, da das einfachste Kohlenhydrat darin besteht, Energie zu erhalten, um Energie zu erhalten.

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Andererseits sind Laktose und Saccharose komplexe Kohlenhydrate, die zersetzt werden müssen und Glukose werden, damit sie in den Embden-Meyerhof-Zyklus gelangen können.

-Nicht -fermentarische Mikroorganismen

Wenn der inokulierte Mikroorganismus nicht in der Lage ist, Glucose zu fermentieren, kann viel weniger andere Kohlenhydrate fermentieren. Daher werden hier keine Säuren gebildet, aber es gibt eine Aminbildung im Lünette aufgrund der Verwendung von Peptonen.

In diesem Fall wird die Abschrägung stark.

Interpretation: K / K bedeutet alkalisch -schräg / alkalisch oder neutraler Hintergrund

In dem Bild zu Beginn des Artikels siehe das Bild der Röhre D.

Dieses Ergebnis zeigt an, dass der Mikroorganismus nicht zur Familie Enterobacteriaceae gehört.

-Nicht -fermentäre Mikroorganismen von Laktose/Saccharose

Wenn die Bakterien in der Lage sind, Glukose zu fermentieren, aber nicht Laktose oder Saccharose, wird Folgendes auftreten:

Die Bakterien konsumieren alle nach ungefähr 6 bis 8 Stunden vorhandenen Glukose, wodurch sowohl die Lünette als auch die Taco gesät werden kann. Das heißt, der Agar wird vollständig gelb geworden sein. Wenn Glukose jedoch erschöpft ist und die Unmöglichkeit, Laktose und Saccharose zu verwenden, unmöglich ist, beginnt die Bakterien mit dem Stoffwechsel von Proteinen.

Diese Reaktion braucht Sauerstoff, so dass der Peptonas -Abbau auf der Oberfläche (Lünette) auftritt. Die Amine produzierten Alkleinern die Kräuselung, die gelb nach rot ist. Diese Reaktion wird nach 18 bis 24 Stunden Inkubation belegt.

Interpretation: k/a Mittel alkalische Lünette und Säure Taco.

In dem Bild zu Beginn des Artikels siehe das Bild von Tube B.

-Fermentäre/saccharose fermentierende Mikroorganismen

Mikroorganismen, die Lactose und Saccharose fermentieren können, können offensichtlich Glukose fermentieren. Nachdem die im Medium vorhandene minimale Menge an Glukose erschöpft ist, beginnt das gebildete Pyruvat zu metabolisieren, um Säuren durch den aeroben Krebszyklus zu bilden, und im Zeitraum von 8 bis 12 Stunden ist das gesamte Medium gelb sein.

Wenn die Bakterien Lactose oder Saccharose entfalten können, werden weiterhin Säuren erzeugt, und nach 18 bis 24 Stunden werden die gesamten Röhrchen -Bisel und Taco-.

Es ist zu beachten, dass die Verwendung von Glukose verwendet.

Interpretation: A/ A bedeutet säurehaltiger Kegel/ Säuregintergrund. Kann Gas vorlegen oder nicht.

In dem Bild zu Beginn des Artikels siehe das Bild der Röhre a.

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Gasproduktion

Einige Mikroorganismen sind in der Lage, während der Fermentation der Zucker Gas zu produzieren. Das Gas wird im Rohr aufgrund des Drucks, den es im Agar ausübt. Der Druck verursacht die Bildung von Blasen oder die Verschiebung des Agars. Manchmal kann die Gasbildung in die Umwelt brechen.

Es ist wichtig, dass bei der Aussaat des TSI -Medium. Wenn die Punktion an den Wänden des Röhrchens abweicht, kann sie bei der Gasproduktion falsch positive Ergebnisse verursachen, da sie dem fälschlichen Kanal entkommen wird.

Die Gasproduktion sowie Reaktionen, die in der Agar -Schrägung auftreten.

Die Gasproduktion wird als positiv (+) oder negativ (-) angegeben.

Natriumtiosulfat und Eisen -Ammoniumsulfat (Wasserstoffsulfidproduktion)

Bakterien, die in der Lage sind, Wasserstoffsulfid (farbloses Gas) zu produzieren, nimmt Schwefel des im Medium vorhandenen Natriumthiosulfat. Sobald der H gebildet ist₂S reagiert mit Eisen -Ammoniumsulfat und erzeugt Eisensulfid (deutlich sichtbarer schwarzer Niederschlag).

H₂S wird als positiv (+) oder negativ (-) angegeben.

In dem Bild zu Beginn des Artikels siehe das Bild von Röhrchen C.

Vorbereitung

Wiegen Sie 62,5 g der halben Sugar -Eisenagar (TSI) dehydriert und löst sich in einem Liter destilliertem Wasser auf.

Heiß, um den Agar aufzulösen. Kochen. 4 ml des Mediums in 13/100 Reagenzglas mit Baumwolldeckel verteilen.

15 Minuten bei 121 ° C in Autoklave sterilisieren. Aus dem Autoklav nehmen und den Stehen neigen lassen. Es sollte darauf geachtet werden, dass sowohl die Basis als auch die Abschrägung den gleichen Abstand haben.

In einem 2-8 ° C-Kühlschrank aufbewahren. Lassen Sie ein Temperament, bevor Sie den Bakterienstamm säen.

Die Farbe des dehydrierten Mediums ist leicht und das vorbereitete Medium ist rot orange

Der endgültige pH des vorbereiteten Mediums beträgt 7,3 ± 0,2.

Anwendungen

Der TSI -Test wird in der Microbiology Laboratory -Ebene häufig verwendet. Dieser Test ist unverzichtbar, um den Testtyp zu leiten, der angewendet werden muss, um die Identifizierung der Gattung und Spezies zu erreichen. Ihre gute Ausführung und Interpretation können Material sparen und arbeiten.

Wenn das Ergebnis ein TSI k/k k ist und der Cytochromoxidase -Test positiv darstellt. Wenn es sich um eine negative Oxidase handelt, ist es auf das Acinetobacter, Stenotrophomonas usw. ausgerichtet, usw.

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Wenn andererseits ein TSI A/A oder K/A erhalten wird und der Cytochrom -Oxidase -Test negativ ist, reduzieren sie Nitrate auf Nitriten, wir werden sicher sein, dass es sich um einen Mikroorganismus der Enterobacteriace -Familie handelt. In diesem Fall wird die Identifikationsroute auf bestimmte Tests für diese Gruppe von Bakterien ausgerichtet.

Wenn andererseits ein Bild k/a oder a/a erhalten und der Cytochrom -Oxidase -Test positiv ist, werden die zusätzlichen Tests auf die Identifizierung von Fermentationsstämmen gerichtet, die nicht zur Familie Enterobacteriaceae gehören, wie z. , Plesiomonas, Vibrio und Pasteurella.

Ein TSI mit Wasserstoffsulfid, negative Oxidase, leitet die folgenden Genres der Enterobacteriaceae -Familie: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella oder Salmonellen.

Ein TSI mit knappem oder mäßigem Schwefelwasserstoff im alkalischen Lünette mit alkalischem Hintergrund und einer positiven Oxidase leitet Tests zur Identifizierung von nicht -fermentierenden Gram -negativen Bazillen, die Produzenten von H produzieren₂S, as Shewanella Putrefaciens.

Schließlich kann der TSI zur Untersuchung der Produktion von Schwefelwasserstoff in Gram -positiven Bazillen verwendet werden, insbesondere wenn es vermutet wird Erysipelothrix rhusiopathien.

Gesät

Das TSI -Medium muss mit reinen Kolonien geimpft werden, die in primären oder selektiven Pflanzen isoliert sind. Wenn die Kolonie aus selektiven Mitteln entnommen wird, die mit Proben mit gemischter Flora gesät werden, muss nur von der Oberfläche vorsichtig gemacht werden.

Daher sollte der Griff niemals in einem selektiven Medium abkühlen und dann die Kolonie nehmen und ein TSI -Medium impft.

Das gesät wird mit einer geraden oder Nadel erfolgen. Die Punktion wird durchgeführt und sorgt dafür. Machen Sie nicht zwei Punktionen.

Inkubieren Sie bei 37 ° C in der Aerobiose 18-24 Stunden. Zu diesem Zeitpunkt interpretieren, weder vor noch danach.

Einschränkungen

Der TSI -Test sollte zwischen 18 und 24 Stunden Inkubation gelesen werden. Eine Lesung vor dieser Zeit kann eine falsche Fermentation A/A geben. Während eine Lesung nach dieser Zeit zu einem falsch negativen Bild von Nicht -Fermenter führen.

Verweise

1. Britania Laboratories. TSI Agar (dreifacher Zucker -Eisenagar). 2015. Erhältlich bei: Britanialab.com
2. BD Laboratories. Triple Sugar Iron Agar (TSI Agar). 2003. Verfügbar bei: BD.com