Biuret Foundation, Reagenzien, Verfahren, verwendet

Er Biurett Es ist ein Reagenz, das zur Bestimmung von langketten- und kurzkettigen Proteinen verwendet wird. Es wird insbesondere im Bereich der analytischen Chemie und Uroanalyse verwendet, um die Konzentration von Gesamtserum-, Plasma- und Urinproteinen zu untersuchen.

Proteinwerte können bei bestimmten Pathologien erhöht oder verringert werden. Hipoproteinämien -Bilder werden normalerweise bei Patienten mit Nierenerkrankungen, bei unterernährten und bei Patienten mit chronischen Infektionen dargestellt.

Chemische Struktur des im Biurett reaktionspositiven Biurettentest gebildeten Komplexes. Quelle: Yikrazuul [Public Domain]/Flickr

Während Hyperproproteinämie bei Pathologien wie multiplen Myelomen, systemischem Lupus erythematosus, bakterielle Endokarditis, bakterielle Meningitis, Waldenstrom -Makroglobulinämie unter anderem beobachtet wird.

Andererseits ist das Vorhandensein von Proteinen im Urin auf die Albuminfiltration durch die Niere zurückzuführen. Dies ist ein pathologisches Verhalten, das untersucht werden muss.

In diesem Sinne ist das Biurett sehr nützlich, da es das Vorhandensein von Serumproteinen, Plasma und Urin unter vielen anderen Proben ermöglicht.

Sogar das Biurett kann verwendet werden, um das Vorhandensein und die Konzentration von Proteinen in unbekannten oder unbekannten Zusammensetzungsproben zu untersuchen. Daher wird es im Forschungsgebiet häufig verwendet.

Der Biurettentest basiert auf dem Nachweis von Peptidverbindungen. Der Test ist in alkalischem Medium angegeben. Die Probe muss mindestens zwei Peptidverbindungen enthalten, so dass ein violettem Farbkomplex gebildet werden kann. Der Komplex wird durch die Vereinigung der Verbindungen und die Ion von Kupfer gebildet.

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Basis

Das Biurett -Reagenz besteht aus Kaliumhydroxid, Cupric -Sulfat sowie Natrium- und Kaliumtartrato. Natriumhydroxid wird verwendet, um die Umwelt zu alkalisieren, da dieser Zustand für die Reaktion unverzichtbar ist.

Substanzen, die mit Proteinen reagieren.

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Wenn es in der Probe Substanzen mit Peptidbindungen (Polypeptide oder Proteinen) gibt, ergibt der Test positiv.

Eine Reaktion wird als positiv interpretiert, wenn die Lösung violett wird. Die Farbe wird durch die Bildung eines Komplexes zwischen mindestens zwei Peptidbindungen erzeugt, die die Co-NH-Gruppe und die aktuellen kuprischen Kationen haben.

Der Violettkomplex kann auf zwei Arten gebildet werden: einer ist auf den Verlust von Protonen der Amidgruppen zurückzuführen, die an Metall bin.

Diese Reaktion kann in der Intensität und Farbe abhängig von der Art des Proteins variieren.

Der Test kann qualitativ oder quantitativ durchgeführt werden. In der qualitativen Form wird es als positiv oder negativ angegeben. Während in der quantitativen Form die Konzentration durch die spektrophotometrische Methode gemessen werden kann.

Die Reaktion wird zwischen 540 und 560 nm gelesen. Die Farbintensität ist direkt proportional zur Konzentration von Peptidverbindungen in der Probe.

Reagenzien

-Natriumhydroxid (NaOH) bei 20%

-1% Pentahydrat -Cupric -Sulfat (CUO₄. 5H₂ENTWEDER)

-Gemischtes Natrium- und Tetrahydrat -Kaliumtartrato (KNAC₄H₄ENTWEDER₆· 4h₂ENTWEDER)

Biurett -Reagenz -Stabilität

-Es muss in Kühlung gehalten werden.

Verfahren

Technik

-Platzieren Sie 100 µl der Probe oder das Muster, das in einem Reagenzglas analysiert werden soll.

-2 ml Natriumhydroxid hinzufügen.

-Sehr gut mischen.

-Fügen Sie 5 ml Biurett -Reagenz hinzu.

-Mischen und 25 Minuten bei Raumtemperatur, abdecken und vor Licht schützen.

-Beobachten Sie die Bildung oder nicht von Farbe und messen Sie spectofotometrisch.

Kalibrierungskurve

Um die Kalibrierungskurve durchzuführen, können Sie Serum -Rinderalbumin als Muster verwenden. Daraus werden mehrere Konzentrationen vorbereitet. Zum Beispiel 25, 50, 75, 100, 125 und 150%.

Die Reaktion ist mit all diesen bekannten Konzentrationen montiert und die Absorption wird zu einer Wellenlänge von 540 nm gelesen. Mit den Daten der bekannten Konzentrationen und der absorbierenden Messwerte wird die Kalibrierungskurve durchgeführt.

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In jeder Bestimmung oder vielen verarbeiteten Proben ist es ratsam. Als Kalibrierungsmuster können Sie Serumrinderalbumin 0,1-2 mg/ml verwenden.

Messungen werden in einem 540 -nm -Spektrophotometer durchgeführt.

Die Linearität wird bis zu einer Konzentration von 12 g/dl erfüllt.

Interferenz

Substanzen, die sich in den Biuretttest einmischen

Obwohl es nicht sehr häufig ist, sollte beachtet werden, dass während der Ausführung dieses Tests einige Substanzen eingreifen können. Zum Beispiel kann das Vorhandensein von Ammonium die Farbbildung hemmen.

Ebenso könnten andere Substanzen die gleiche Wellenlänge aufnehmen, wie z. B. bestimmte Pigmente.

Andererseits kann eine Interferenz erzeugt werden, wenn eine andere Substanz als das Peptidverbindungsbetrieb einen Komplex mit Metallsalz bildet. Beispiel: Einige Kohlenhydrate und bestimmte Lipide.

Für den Fall, dass es gezeigt wird, dass es eine Art von Niederschlagsart analysiert, muss es vor dem Erstellen des Tests gefiltert oder zentrifugiert werden.

Substanzen, die sich nicht in den Biuretttest stören

Der Test wird nicht durch das Vorhandensein von:

-Bilirubin bis zu einer Konzentration von 20 mg/dl.

-Hämoglobin zu einer Konzentration von 750 mg/dl.

-Dextran zu einer Konzentration von 30 g/l.

-Triglyceride bis zu einer Konzentration von 4000 mg/dl.

Vorteile

-Es ist eine einfache Methode zur Ausführung.

-Es ist ein wirtschaftlicher Test.

-Es hat eine hohe Proteinspezifität.

-Wenige Einmischungen.

Nachteile

Es hat wenig Empfindlichkeit, niedrige Proteine ​​zu erkennen. Die von Fuentes und Mitarbeitern durchgeführten Arbeiten bestätigen, dass die Biurett -Testmethode eine Proteingrenze von 1 mg/ml und eine Quantifizierungsgrenze von 3 mg/ml aufweist.

Eine andere an der University of Amazon durchgeführte Untersuchung berichtet jedoch viel niedrigere Werte. Die Erkennungsgrenze, die die Studienberichte berichtet, beträgt 0,020 mg/ml und die Quantifizierungsgrenze von 1.33 mg/ml.

Anwendungen

Biurett -Reagenz oder -Test wird zur Proteinbestimmung in klinischen und nichtklinischen Proben in Routine- und Forschungslabors verwendet.

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Pathologien, die untersuchen oder abnahmen Proteine

Bei vielen Pathologien ist es wichtig, die Konzentration von Gesamtproteinen in klinischen Proben zu bestimmen und hoch oder verringert zu sein.

Sie sind erhöht in:

-Multiples Myelom,

-Systemischer Lupus erythematodes,

-Bakterienendokarditis,

-Bakterielle Meningitis,

Unter anderem Waldestrom -Makroglobulinämie.

Es ist verringert in:

-Niereninsuffizienz,

-Menschen mit schwerer Unterernährung,

-Patienten mit chronischen Infektionen unter anderem.

Klinische Proben

Die häufigsten klinischen Proben sind Serum, Plasma und Urin. Der Normalwert von Serum- oder Plasmaproteinen beträgt 6.0-8.8 gr/dl.

Die Proteinkonzentration bei Erwachsenen bei Erwachsenen überschreitet die Figur von 150 mg/24 Stunden nicht.

Normalwert des Urin/Kreatinin -Proteinindex im Urin

Säuglinge: < a 0,50 mg

Kinder 2 Jahre und älter: Index: 0,20 mg

Erwachsene: < 0,2 mg

Nicht -klinische Proben

Die Biurett -Reaktion kann für viele Arten von nicht klinischen Proben wie Milchprodukten, Antiophid -Seren oder eine unbekannte Substanz verwendet werden, auf die das Vorhandensein von Proteinen untersuchen soll.

Verweise

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4.  Fuentes F, Quispe I, García J. Standardisierung der Biurettmethode zur Quantifizierung des Gesamtproteins im Mehrzweck -Antibotropen -Serum, das im National Biological Products Center hergestellt wurde. Bol - Installation NAC Health 2012; 18 (11-12).  Verfügbar unter: Repository.Ins.Gob.Sport
5. Winer Laboratories. Gesamtproteine. Kolorimetrische Methode zur Bestimmung der gesamten Serum- und Plasmaproteine. Erhältlich bei: Wiener-Lab.com.ar