Phosphatpufferfundament (PBS) Fundament, Vorbereitung und Verwendung

Er Phosphatpuffer, BPS oder Salzphosphatpuffer Es handelt. Das Akronym PBS Mean Phosphat gepufferte Kochsalzlösung.

PH- und Osmolarität sind zwei sehr wichtige Aspekte, die in bestimmten Laborprotokollen kontrolliert werden müssen. Im Fall von pH ist es wichtig, dass es kontrolliert wird, insbesondere bei biochemischen Reaktionen, da diese variieren oder nicht ausgeführt werden können, wenn sich die Reaktanten in einem unangemessenen pH -Wert befinden.

Puffer Salino PBS -Phosphat in zwei verschiedenen pH -Wert. Quelle: Pixinio.com

Während die Kontrolle der Osmolarität, insbesondere bei der Arbeit mit lebenden Zellen, wesentlich ist.

Wenn die Zellen in ein hypertones Medium übertragen werden, dehydrieren sie, da der Wassergradient auf die Seite transportiert wird. Wenn im Gegenteil die Zellen in ein hypotones Medium platziert werden, absorbieren die Zellen Flüssigkeit, bis sie liegen.

Aus diesem Grund wird der PBS -Puffer für Laborprotokolle verwendet, für die Zellwartung erforderlich ist In vitro, Auf diese Weise werden die Zellen nicht beschädigt.

PBS besteht aus einer Kombination von Salzen wie Natriumchlorid, Natriumphosphat, Kaliumchlorid und Kaliumphosphat. Die PBS -Zusammensetzung kann je nach Protokoll variieren.

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Basis

Grundsätzlich besteht die Funktion des Kochsalzlösungsphosphatpuffer darin, einen konstanten physiologischen pH -Wert neben einer Elektrolytkonzentration aufrechtzuerhalten, die dem im Organismus ähnlich ist.

In dieser Umgebung können die Zellen stabil bleiben, da die physiologischen Bedingungen so weit wie möglich simulieren.

Zu der ursprünglichen PBS -Formulierung können andere Verbindungen von Bedarf hinzugefügt werden, z.

Das EDTA verhindert den Anteil des im Serum vorhandenen Komplements C1, sich auf die roten Blutkörperchen zu teilen und zu kleben, dh falsche Ergebnisse der Inkompatibilität zu vermeiden. Darüber hinaus hilft EDTA dabei, Zellen zu dissoziieren.

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Vorbereitung

Die Menge an Salzen, die für die Ausarbeitung des Kochsalzlösungsphosphat PBS abgewogen werden muss, hängt von der für die Erstellung erforderlichen Menge ab:

-Lösungslösungspuffer Salino Phosphat (PBS 10x)

Für einen Liter der Lösung:

Wiegen:

80,6 g NaCl,

2,2 g KCL,

11,5 g Na₂HPO₄,

2,0 g kh₂HPO₄

Vorbereitungstechnik

Legen Sie in einem Bechern die schweren Salze, fügen Sie genügend Wasser (80%) hinzu und mischen Sie die Rührplatte mit Magnetstab, bis sich die Salze auflösen.

PBS -Zubereitung unter Verwendung von Bügeleisen mit Magnetstange . Quelle: Benutzer: Ruhrfisch, Wikipedia. com

Filter, um abgewickelte Partikel zu entfernen. Verwenden Sie Filter mit 0,45 µm Poren. Autoklavensterilik.

Die 10 -fache Lösung (konzentriert) passt den pH nicht ein. Die Einstellung erfolgt nach dem Verdünnen der PBS -PBS 1x -Konzentration (Verdünnung 1:10).

-Salzphosphatpuffer (PBS 1x)

PBS 1x kann direkt hergestellt werden, wobei die entsprechenden Mengen jedes Salzes gewogen oder die Mutterlösung (1:10) mit sterilem destilliertem Wasser verdünnt werden können.

-Um einen Liter Kochsalzlösung Phosphat PBS 1x Bedauern zu erstellen:

8,06 g NaCl,

0,22 g KCL,

1,15 g Na₂HPO₄,

0,20 g kh₂HPO₄

Vorbereitungstechnik

Fahren Sie wie in der konzentrierten Lösung erläutert. Anschließend muss der pH -Wert eingestellt werden. Messen Sie dazu den pH -Wert und verwenden Sie je nach Ergebnis Säure (HCl) oder Base (NaOH), um den pH -Wert nach Bedarf zu senken oder hochzuladen, bis er 7,4 ist.

Die Säure oder die Base wird durch Tropfen abfallen, während der pH-Wert der Lösung mit einem pH-Meter überwacht wird. Filter, Autoklavensterilizion und verteilt nach Bedarf aseptisch in konischen Röhren oder Flaschen.

-Um die PBS 1x aus der 10 -fachen Mutterlösung vorzubereiten:

Machen Sie eine Verdünnung 1:10. Zum Beispiel 1 Liter PBS 1x vorbereiten, 100 ml der Mutterlösung messen und 700 ml steriles destilliertes Wasser hinzufügen. Stellen Sie den pH -Wert ein und vervollständigen Sie die Wassermenge, bis es 1000 ml erreicht.

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Der vorbereitete PBS -Puffer ist farblos und transparent.

Täglicher Gebrauch PBS kann bei Raumtemperatur und dem Rest im Kühlschrank gelagert werden.

.Lösungen für die pH -Einstellung

HCl

Für 100 ml HCl (Salzsäure) bis 1 Molar.

Messen Sie 91 ml destilliertes Wasser und legen Sie es in ein Niederschlagsgefäß von 250 ml Kapazität.

Messen Sie 8,62 ml konzentrierter HCl und fügen Sie es langsam zum Becher, das das Wasser enthalten (niemals auf den Kopf). Treffen Sie relevante Biosicherheitsmaßnahmen beim Umgang mit starken Säuren (hochkarrosive Substanz).

5 Minuten lang mit einer Rührplatte mit einem Magnetstangen im Glas mischen. Gehen Sie zu einer 100 -ml -Kugel und spülen Sie bei 100 ml mit h₂Oder destilliert.

Naoh

Für 100 ml NaOH (Natriumhydroxid) 10 Molar.

Messen Sie 40 ml destilliertes Wasser und legen Sie es in 250 ml Kapazitätsbecher. Messen Sie 40 g NaOH und ergänzen Sie das Wasser. Mischen Sie mit einer Rührplatte mit einem Magnetstangen im Glas.

Gehen Sie zu einer 100 -ml -Aggridkugel und spülen Sie sie mit destilliertem Wasser. Entsprechen Sie den Standards der Biossicherheit, da diese Reaktion exotherm ist (Energie in Form von Wärme freigibt).

Wenn Sie andere Mengen an Kochsalzlösungsphosphatlösung vorbereiten möchten, können Sie die folgende Tabelle konsultieren:

Quelle: "Labor für Viral and Human Genomics, UASLP School of Medicine"

Anwendungen

Hauptsächlich wird es in Zellbiologie -Labors, Immunologie, Immunhistochemie, Bakteriologie, Virologie und Forschung verwendet.

Es ist ideal, das Zellwaschen durch Zentrifugat (rote Blutkörperchen), Zellmonocapas, in spektroskopischen Ellipsometrie -Techniken bei der Quantifizierung von bakteriellen Biofilmen bei der Aufrechterhaltung von Zellpflanzen für Viren als Lösung des Waschens in der Indirektentechnik zu machen Immunfluoreszenz und in Techniken zur Charakterisierung monoklonaler Antikörper.

Es dient auch dazu, Zellen oder Gewebe als Verdünnungsmittel für die Zählung von Zellen zu transportieren, die Herstellung von Zellenzymen (Tripsin) als Verdünnung der Biomoleküle -Austrocknungsmethode und zur Herstellung anderer Reagenzien.

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Andererseits haben Martin und Mitarbeiter im Jahr 2006 gezeigt, dass PBS in forensischen Wissenschaftslabors, insbesondere bei der Wiederherstellung von Spermien aus dem Vaginalstrich oder bei der Wiederherstellung von Penisabstrich -Vaginalzellen nützlich ist. Auf diese Weise kann es festgestellt werden, wenn es eine sexuelle Beziehung gab.

Einschränkungen

-Einige PBS -Puffer bringen eine Substanz namens Natrium Azid als konservativ. Diese Verbindung kann explosive Substanzen erzeugen, wenn sie mit Blei oder Kupfer in Kontakt kommt. Aus diesem Grund muss besondere Sorgfalt beim Abwerfen dieses Reagens für die Entwässerung angesichts. Wenn auf dieser Route verworfen werden, muss reichlich Wasser hinzugefügt werden, um bis zum Maximum verdünnt zu werden.

-Der Phosphatpuffer sollte nicht Zink hinzugefügt werden, da er einige Salze ausfällt.

-Wangen und Mitarbeiter im Jahr 2018 stellten fest, dass die Verwendung von PBS nicht für das Waschen primärer akuter myeloischer Leukämie (AML) aus peripherem Blut geeignet war, da viele Zellen durch Lyse verloren gehen, mit einer großen Abnahme des Proteinmaterials.

Daher stellten sie fest, dass AML -Primärzellen nach der Lagerung in flüssigem Stickstoff nicht mit PBS gewaschen werden sollten.

Verweise

1. Coll j. (1993). Diagnosetechniken in der Virologie. Ed Díaz de Santos. 360 pg
2. Rodríguez M, Ortiz T. Zellkultur. Änderung des Mediums. Abteilung für normale und pathologische Histologie Universität von Sevilla. Im Personal erhältlich.uns.Ist
3. Phosphat -gepufferte Salzvorbereitung (PBS). (2008). Standard -Operating Procedures (SOPS) Virale und Human Genomics Laboratory Fakultät für Medizin UASLP. Verfügbar bei: Genomics.Uaslp.mx
4. "Salzphosphat -Buff." Wikipedia, freie Enzyklopädie. Apr 2019, 19:36 UTC. Apr 2019, 02:57 ist.Wikipedia.Org.
5. Pietrasanta L, von-Bilderling C.Themen in der molekularen Biophysik. Verfügbar bei: Benutzer.Df.Uba.ar
6. Rediar. Handbuch. PBS+EDTA. Erhältlich bei: Felsan.com.ar
7. Martin NC, Pirie AA, Ford LV, Callaghan CL, McTurbate K, Lucy D, Scrimger DG. Die Verwendung von Phosphat -gepufferter Kochsalzlösung zur Wiederherstellung von Zellen und Spermatozoen aus Tupfer. SCI -Gerechtigkeit. 2006; 46 (3): 179-84. Verfügbar in: NCBI.NLM.NIH.Regierung
8. Wangen R, Aasebø E, Treeni A, et al. Bewahrungsmethode und phosphatgepufferte Salzwäsche Apfekte das akute myeloische Leukämie -Proteom. Int J Mol Sci. 2018; 19 (1): 296. Verfügbar in: NCBI.NLM.NIH.Regierung
9. Martínez R, Gragera R.  (2008). Theoretische und praktische Grundlagen der Histochemie. Superior Council of Scientific Investigations. Madrid. Erhältlich bei: Bücher.Google.CO.gehen