EC -Brandung, Vorbereitung und Verwendung

Er EC -Brühe oder Brühe Escherichia coli Es ist ein selektives flüssiges Kulturmedium. Dieses Medium wird von den Standardmethoden für die Anzahl der Gesamt- und Fäkal -Coliformen empfohlen, durch die wahrscheinlichste Zahlen -Technik (NMP) in Wasser- und Lebensmittelproben, bei der das beteiligte Hauptmittel die beteiligen Hauptmittel ist Escherichia coli.

Die EC -Brühe besteht aus Triptein, Lactose, Gallensalzen, Pipotasischphosphat, monopotasischem Phosphat, Natriumchlorid und Wasser. Seine Formel wurde strategisch entwickelt, um das Wachstum von Total- und Fäkalien -Coliformen zu bevorzugen und die Entwicklung anderer begleitender Mikroorganismen zu verhindern.

Figurative Darstellung der Herstellung der EC -Brühe. Quelle: Pixabay.com

Die Bakterien Escherichia coli Es ist die wichtigste fäkale Coliform als Schadstoff in Wasser- und Nahrungsquellen, die die Ursache für wichtige Magen -Darm -Effekte ist.

Es sollte beachtet werden, dass es viele Serotypen gibt Escherchia coli; Unter ihnen können die Enterohämorrágica (EHEC), Enteroinvasive (EIEC), Enteopathogene (EPEC), Enterotoxigene (ETEC) und Enteroagregative (EAEC) erwähnt werden.

Dieses Medium hat die Fähigkeit, die Entwicklung aller von ihnen zu ermöglichen, sie aber nicht voneinander unterscheiden. Dafür müssen zusätzliche Tests durchgeführt werden.

Die mikrobiologische Untersuchung von Wasser und Nahrung für die wahrscheinlichste Zahl (NMP) nach der Suche nach Gesamt- und Fäkal -Coliformen ist ein Protokoll, das aus mehreren Phasen besteht. Vermutliche Phase, Bestätigungsphase und Abschlussphase. EC -Brühe wird in der Bestätigungsphase verwendet.

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Basis

EC -Brühe

Das EC -Medium basiert auf der Bereitstellung der notwendigen Ernährungselemente für die optimale Entwicklung von Gesamt- und Fäkalien -Coliformen, bei denen die Bakterien enthalten sind Escherichia coli.

Diese Ernährungselemente werden von Triptein bereitgestellt, die eine hervorragende Quelle für Peptide und Aminosäuren sind. Darüber hinaus enthält es auch Laktose, ein fermentierbares Kohlenhydrat, das Energie liefert und Sie zeigen, ob das Bakterium Gas erzeugt.

Andererseits enthält das Medium Gallensalze, die die selektive Natur liefern, da es das Wachstum von gram positiven Mikroorganismen hemmt.

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Ebenso Dipotasy -Phosphat. Dieses System ist notwendig, da die in der Brühe enthaltene Laktose das Medium tendenziell bei fermentierter Mikroorganismen ansgesäuert wird. Dies wird jedoch durch Phosphatsalze kompensiert.

Daher sind diese Elemente unerlässlich, da Säure ohne Kontrolle die gute Entwicklung von gesuchten Mikroorganismen beeinflussen kann.

Natriumchlorid stabilisiert die Umwelt, während Wasser das Lösungsmittel der vorhandenen gelösten gelösten gelösten ist und der Umwelt flüssige Konsistenz bietet.

EC -Brühe mit Novobiocin modifiziert

Oklend und Rose haben eine Vielzahl der EC -Brühe genannt, die als EC -modifizierte EC -Brühe bezeichnet wird. Die Modifikation bestand aus der Abnahme der Konzentration von Gallensalzen und dem Aggregat von 20 mg/dl Novobiocina.

Diese Modifikation begünstigt die Wiederherstellung von Stämmen von Escherichia coli Enterohämorrágica (O157: H7).

Dieser bakterielle Serotyp verursacht eine schwere hämorrhagische Kolitis, die ein hämolytisches urämisches Syndrom (Suh) verursachen kann; Dies kann wiederum akuter Nierenversagen erzeugen, mit einer hohen Sterblichkeitsrate, die bei älteren Menschen bis zu 50% erreichen kann.

Aufgrund der durch diese Bakterien für den Verbrauch kontaminierter Lebensmittel verursachten krankhaft verursachten Landwirtschaftsministerium (USDA) empfiehlt die Verwendung dieses Mediums sehr.

Vorbereitung

EC -Brühe

Wiegen Sie 37,4 g des dehydrierten Mediums und lösen Sie in 1 Liter destilliertem Wasser. Die Mischung muss 5 Minuten lang erlaubt sein. Anschließend löst es sich in einer Wärmequelle häufig auf.

Einmal gelöst, ist es in Reagenzgläser verteilt, die zuvor mit einem Durham -Röhrchen im Inneren konditioniert sind. 15 Minuten bei 121 ° C in Autoklave sterilisieren.

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Der mittlere pH muss 6,9 ± 0,2 betragen.  Die Farbe des dehydrierten Mediums ist beige und vorbereitet.

Die Brühen werden bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahrt. Zum Zeitpunkt der Verwendung müssen die Brühen bei Raumtemperatur sein.

Andererseits kann die EC -Brühe auch in doppelter Konzentration hergestellt werden.

EC -Brühe mit Novobiocin modifiziert

Wiegen Sie 36,7 g des dehydrierten Mediums und löst sich in 1 Liter Wasser auf. Der Rest der Vorbereitung entspricht dem oben beschriebenen.

Verwenden

Gesamt- und fäkale coliforme Analyse

Die EC -Brühe ist ideal für die Bestätigungsphase der coliformen Studie nach der NMP.

In hellgrüne Brühen mit 2% und in EC -Brühe sollten engere und in der mutmaßliche Phase erhaltene Gasproduktionsbrühe in hellgrünen Brühen wiederhergestellt werden.

Für die gesamten Coliformen -EC -Brühen werden in Aerobiose 24 bis 48 Stunden bei 37 ° C inkubiert und für Fäkalkoliformen in Aerobiose 24 bis 48 Stunden bei 44 ° C inkubiert.

In beiden Fällen wird es wie folgt interpretiert: Die trüben Röhrchen mit der Gasproduktion werden als positiv angesehen. Wenn es in 24 Stunden keine Gasproduktion gibt, setzt die Inkubation bis zu 48 Stunden fort.

Positive EC -Brühen gehen in die vollständige Bestätigungsphase, die aus der Belohnung in selektiven Medien wie Mac Conkey, EMB oder Endo Endo Agar besteht.

Wenn die verwendete Brühe mit Novobiocin modifiziert wird, wird empfohlen, die positiven Röhrchen in Mac Conkey Agar mit Sorbit zu ähneln.

QA

Qualitätskontrolle muss von jeder vorbereiteten mittelgroßen Stapel durchgeführt werden. Erstens muss die Sterilität der Umwelt muss. In diesem Sinne werden ein oder zwei Brühen ohne Inokulation in Aerobiose 24 Stunden bei 37 ° C inkubiert. Das erwartete Ergebnis ist eine transparente Brühe, ohne Trübung oder Farbänderung.

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Zweitens muss das Wachstum bekannter Stämme bewertet werden, da Sie die folgenden Bakterien verwenden können: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

In allen Fällen wird eine zufriedenstellende mikrobielle Entwicklung erwartet, wobei eine bewölkte Brühe mit Gasproduktion für beobachtet wird UND. coli Und ohne Gas für Salmonellen.

Andere Stämme, die in die Kontrolle enthalten sein können, sind: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Diese Stämme müssen völlig gehemmt werden.

Empfehlungen

-Die Platzierung der Durham -Röhren ist für die Untersuchung von Coliformen unverzichtbar.

-Verteilen Sie das Medium in den Reagenzgläser vor der Sterilisierung, nie danach.

-Verwenden Sie nicht, wenn das Medium mehr als 3 Monate vorbereitet hat.

-Verwenden Sie keine Änderung der üblichen Eigenschaften des Mediums.

Verweise

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