Lactosado -Brühe

Laktierte Brühen turbisch. Quelle: Foto des MSC -Autors aufgenommen. Marielsa Gil

Was ist Lactosado -Brühe?

Er Lactosado -Brühe Es ist eine flüssige Kultur, nicht selektiv, hauptsächlich als Mittel zur Anreiz bei der Isolierung von Stämmen von Salmonellen, Aus der mikrobiologischen Analyse bis hin zu verarbeiteten Lebensmitteln, Milchprodukten oder Wasser. Dies wird von der Internationalen Kommission für mikrobiologische Spezifikationen für Lebensmittel (ICMPF) empfohlen.

Das Medium enthält enzymatische Gelatine, Fleisch- und Laktose -Extrakt, Substanzen, die für das Bakterienwachstum erforderlich sind. Darüber hinaus ist Lactose ein fermentierbares Kohlenhydrat, daher können einige Coliformen sie mit der Gasproduktion entfalten.

Daher wird die Lactosado -Brühe von der American Public Health Association (APHA) für die mutmaßliche Studie zu Total- und Fäkalien coliformen Bakterien empfohlen. Es wird als hervorragende Alternative beschrieben, um die Lauril -Sulfat -Tripte -Brühe in der Standardtechnik der wahrscheinlichsten Zahl (NMP) zu ersetzen, die für die mikrobiologische Analyse von Lebensmittelproben, Milch- und Oberflächengewässern, unterirdischer, Freizeit-, Inlands- und Industriereste verwendet wird.

Basis

Für die mikrobiologische Analyse einiger Proben ist der Durchgang der Voranrichung unerlässlich, um einen spezifischen Mikroorganismus wiederherzustellen, der sich in sehr geringer Menge oder unter nicht verdützten Bedingungen befindet, die ihre Lebensfähigkeit verletzen oder minimieren. 

Dies ist der Fall von trockenen und verarbeiteten Lebensmitteln, möglicherweise kontaminiert mit Salmonellas sp. In diesen Fällen haben sie während des Produktproduktionsprozesses, wenn Bakterien vorhanden sind, physischen und chemischen Missbrauch erlitten.

In einer Weise, dass Mikroorganismen nachteiligen Faktoren wie Dehydratisierung, Exposition gegenüber hemmenden oder toxischen Produkten und der Überlappung ausgesetzt sind, die durch das Vorhandensein anderer Bakterien in größerer Menge erzeugt wird.

In diesem Sinne hat die Lactosado -Brühe einen Reparatureffekt der beschädigten Strukturen des Mikroorganismus, wodurch sie sich so erholt und reproduziert, dass sie erkannt werden kann.

Ebenso hat Lactosado -Brühe die Fähigkeit, inhibitorische Substanzen zu verdünnen, die ihre Lebensfähigkeit beeinflussen können, und ermöglicht deren Entwicklung. Darüber hinaus ist die Ernährungszusammensetzung der laktischen Brühe strategisch, um das Wachstum von zu begünstigen Salmonella sp über anderen Mikroorganismen.

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Für die endgültige Identifizierung muss es gegenüber anderen endgültigen Kulturen subkulturell sein.

Andererseits ermöglicht die Zusammensetzung des Mediums auch laktose fermentäre Mikroorganismen, die Gas produzieren.

Vorbereitung

Um einen Liter Laktosebrühe vorzubereiten, müssen 13 Gramm des dehydrierten Mediums gewogen und in 1 gelöst werden.000 ml destilliertes Wasser.

Um die Auflösung des Mediums im Wasser zu unterstützen, können Sie die Lösung ein wenig erhitzen, aber nicht zu viel.

Sobald homogen ist, wird die Lösung wie folgt hergestellt: Wenn die Brühe für die Suche nach Coliformen verwendet wird.

Durhams Röhre ist ein sehr wichtiges Detail, da es die Bildung von Gas ermöglicht, Daten von großem Wert auf der Suche nach Coliformen.

Die Röhrchen, die 10 ml der Lactosado -Brühe vorbereitet haben.

Wenn die Lactosado-Brühe als Vornutzbrühe verwendet wird, ist es nicht erforderlich, die Durham-Fermentationsröhre zu platzieren. In diesem Fall ist mehr mittel (225 ml) erforderlich, was in 500 ml Gläser, breiten Mund und mit thermischem resistenten Fadenabdeckung serviert wird.

Anschließend werden die Röhren oder Flaschen 15 Minuten lang bei 121 ° C zum Autoklaven gebracht.

Das Medium muss bei einem endgültigen pH von 6 sein.9 ± 0.2 bis 25 ° C.

Die Brühen werden bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahrt. Vor der Verwendung müssen sie bei Raumtemperatur temperieren.

Andererseits kann die Lactosado -Brühe auch bei doppelter Konzentration vorbereitet werden.

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Einige Labors fügen Brome hinzu. In diesem Fall hat die Brühe eine lila Farbe und wenn sich Fermentation in Gelb ändert.

Anwendungen

In mikrobiologischen Labors ist die Lactosado-Brühe weit verbreitet, da sie ein relativ wirtschaftliches Medium ist, das zuverlässige und schnelle Ergebnisse (24-48 Stunden) bietet (24-48 Stunden).

Es kann zur Analyse von Gesamt- und Fäkal-Coliformen in Wasser und Nahrung oder als Vornutzbrühe für verwendet werden Salmonellen.

Vorberichung

Voranrichel ist ein Schritt vor der Anreicherung der Stichprobe, die die Wiederherstellung von Geschlechterbakterien erheblich verbessert Salmonellen In verarbeiteten Lebensmitteln.

Dazu ist die Probe der festen Lebensmittel (25 Gramm) oder der Flüssigkeit (25 ml) in 225 ml Lactosado -Brühe gesät, was 24 bis 48 Stunden inkubiert. Anschließend wird es subkulturell in einer mittelgroßen als Selenito-Brühe Cistina oder Tetrationato-Brühe angereicherte sein. Dann gehen Sie zu Selektiven Medien XLD und SS.

Gesamt- und fäkale coliforme Analyse

Es ist ein ausgezeichnetes Medium als Indikator für eine Fäkalienverschmutzung.

Daher ist Lactosado -Brühe ideal für die mutmaßliche Phase der coliformen Studie nach der wahrscheinlichsten Zahlmethode.

Für Proben, in denen eine große Anzahl von Coliformen vermutet wird, wird eine niedrigere Menge desselben (1 ml) inokuliert, während für Proben, in denen weniger Coliformen vermutet werden, mehr Probenahmevolumen inokuliert wird (10 ml).

Für die Analyse werden 10 durchgeführt^-1, 10^-2, 10^-3, Für jede verwendete Konzentration eine 3-5 Rohrbatterie bilden.

Aus jeder Verdünnung wird das gleiche Volumen in Lactosado -Brühen gesät.

Die Röhrchen werden 24 Stunden lang inkubiert. Die negativen Brühen werden weitere 24 Stunden inkubiert.

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Die Interpretation der Ergebnisse erfolgt durch Beobachtung von zwei Merkmalen: Das erste ist das Vorhandensein oder Fehlen einer Trübung, und da dieses Medium keinen pH -Indikator enthält, wird es keine Farbänderung geben.

Die zweite ist die Gasproduktion. Das Gas wird im Durham -Röhrchen leicht durch das Aussehen eines oder mehrerer Luftblasen im Inneren nachgewiesen.

Es wird als positiv angesehen, wenn beide Merkmale beobachtet werden, dh Trübung mit der Gasproduktion. Positive Röhrchen müssen in Bestätigungsmedien abgelehnt werden (2% helle Gallenbrühe und EC -Brühe).

Mittlere Qualitätskontrolle

• Bei der Vorbereitung des Medium.
• Das Medium vor der Sterilisierung nicht überhitzen.
• In den Reagenzgläser vor der Sterilisierung verteilen, nie danach.
• Verwenden Sie nicht, wenn das Medium mehr als 3 Monate vorbereitet hat.
• Verwenden Sie keine Änderung der üblichen Eigenschaften des Mediums.
• Bei der Vorbereitung einer Lactosado -Brühe -Stapel müssen Sie die Qualität der gleichen Aussaatstämme beweisen, die bekannt sind wie Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter fruundii Und Klebsiella pneumoniae. Sie wachsen sehr gut mit der Gasproduktion (Positive Kontrolle).
• Es kann auch enthalten Pseudomonas aeruginosa, Salmonellen Typhimurium entweder Enterococcus faecalis, Sie wachsen gut, aber ohne Gasproduktion (Negativkontrolle).
• Es muss anhängig sein, dass die ursprüngliche Farbe des dehydrierten Mediums beige und die des sehr klaren und transparenten gelb vorbereiteten Mediums ist. Wenn eine Änderung der Farbe oder des Aussehens beobachtet wird, kann sich die gleiche Verschlechterung geben.

Verweise

1. Acevedo r., Severiche, c., Castillo, m. Umweltbiologie und Mikrobiologie. Universität Cartagena, Kolumbien.
2. Conda Pronadisa Laboratorien. Doppelkonzentration der Laktosebrühe (Europäische Pharm).