Malonatbrühe, Vorbereitung und verwendet

Er Malonato -Brühe Es ist das für den diagnostischen Test verwendete flüssige Kulturmedium (Malonato -Test), das einige Genres der Enterobacteriace -Familie unterscheidet. Es wurde von Leifson in 1 erstellt.933 und anschließend durch Ewing modifiziert, wodurch der ursprünglichen Formel eine kleine Menge Dextrose- und Hefeextrakt hinzugefügt wurde.

Das Medium besteht gerade. Dieser Test ist im Allgemeinen in der biochemischen Identifikationsbatterie für Enterobakterien enthalten, was dazu beiträgt, bestimmte Gattungen und Arten zu unterscheiden.

Grafische Darstellung des Malonato -Tests. ZU. Negativer Test, b. (Ansäuerung) Negativer Test, C. (Mittlere Alkalinisierung) positiver Test. Quelle: öffentlich -domänenfarbige Röhren.Netz

Der Malonato -Test basiert hauptsächlich auf der Fähigkeit einiger Mikroorganismen, Natrium -Malonato als einzelne Kohlenstoffquelle und als Stickstoffquelle für Ammoniumsulfat zu verwenden.

Der Malonato -Test gibt normalerweise bei einigen Arten der Genres Enterobacter, Klebsiella und Citrobacter positiv. Während die meisten Arten der Genres Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus und Providencia negative Reaktion geben.

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Basis

Der Malonat -Test besteht aus Beweisen.

Die meisten Enterobakterien, die Malonato nicht verwenden.

In diesem Fall wird jeder Alkalisierungsversuch aufgrund der Verwendung von Peptons durch die Herstellung von Säuren entgegengewirkt, die durch die Fermentation der Dextrose erzeugt werden. Ebenso wirken das Dipotium- und monopotasische Phosphate als Puffer, der den pH -Wert bei 6,7 hält.

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Deshalb ist die Brühe, wenn der Test negativ ist, die gleiche ursprüngliche Farbe (grün). Selten konnte das Medium aufgrund der Fermentation der Dextrose angesäuert werden; Ohne die Verwendung von Peptonas und der pH -Indikator würden die Farbe von Medium nach Gelb drehen. Dafür muss der pH auf 6 sinken.

Wenn dieser Test nun positiv ist, dass der Mikroorganismus Malonato und Ammoniumsulfat als Kohlenstoff- bzw. Stickstoffquellen verwendete.

In diesem Fall wird das Medium aufgrund der Befreiung von Natrium und der daraus resultierenden NaOH -Formation alkalisiert. In diesem Sinne verwandelt der pH -Indikator (Bromotimolblau) die Farbe der Mitte des Grüns in Blau, wenn der pH -Wert gleich oder größer als 7,6 ist. Blau kann klar oder intensiv sein (Preußen blau).

Schließlich behält Natriumchlorid die Osmolarität des Mediums bei und Wasser ist die Verdienung aller Komponenten.

Deutung

Brühe der gleichen Farbe (grün): negativer Test

Gelbe Brühe: negativer Test

Klare oder intensive blaue Brühe: positiver Test

Es gibt eine Variante namens Malonato Phenylalaninbrühe, auch Shaw und Clarke Medium genannt. In diesem Fall können zwei Tests analysiert werden, die Verwendung von Malonato als Kohlenstoffquelle und die Produktion von Pyruvinsäure aus Phenylalanin.

Vorbereitung

Malonato -Brühe

Die Anzahl der Gramm, die durch den Einsatz des ausgewählten Handelshauss angegeben sind (es kann von einem zu anderen variieren). Schwere Gramm werden in einem Liter destilliertes Wasser aufgehängt. Leicht bis zu seiner vollständigen Auflösung erhitzen. Verteilen Sie 3 ml des Mediums in 13/100 Reagenzgläser mit Baumwolldeckel.

Sterilisieren Sie im Autoklav bei 121 ° C 15 oder 20 Minuten.

Cool. Wenn sie nicht sofort verwendet werden, sparen Sie im Kühlschrank bis zur Verwendung. Temperieren Sie die Brühen bei Raumtemperatur, bevor Sie sie impft.

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Der mittlere pH muss 6,7 ± 0,2 betragen. Die Farbe des vorbereiteten Mediums ist flaschengrün.

Malonato Phenylalaninbrühe

Wiegen Sie 11 g des dehydrierten Mediums und löst sich in 1 Liter destilliertem Wasser auf. Der Rest der Zubereitung entspricht dem oben beschriebenen.

Es kann auch durch Zugabe von 2 gr/l Phenylalanin in das Malonato -Brühe -Medium hergestellt werden, bevor es sterilisiert wird.

Verwenden

Es wird als Teil der biochemischen Testbatterie verwendet, die zur Identifizierung von Bakterien der Enterobacteriaceae -Familie montiert ist.

Helfen, zwischen: zu unterscheiden:

-Die Gattung Klebsiella und Enterobacter (+) der Gattung Escherichia und Serratia (-).

-Die Art von SSP Arizonae entrico salsonella ssp, SSP SSP Salame Salmonella Salmonella enterica SSP Diarizonae (+), der Art Salmonella enterica SSP enterica (-).

-Der Gattung Klebsiella im Allgemeinen (+) der Gattung Actinobacillus (-).

-Manchmal kann es die Differenzierung von Genres und Bakterienarten helfen Alcaligenes Faecalis (+) Acinetobacter sp (-).

Quelle: Koneman E, Allen S., Janda W., Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologische Diagnose. 5. ed. Pan -American Editorial s.ZU. Argentinien.

Verfahren

Unter einem Feuerzeug wird ein Teil einer reinen Kolonie unter Verwendung eines richtig sterilisierten und gekühlten Platingriffs eingenommen. Die abgenommene Probe (leichtes Inokulum) löst sich in der Malonato -Brühe auf. Es wird mit dem faulen Deckel in der Aerobiose bei 35 ° C ± 0,2 für 24 bis 48 Stunden inkubiert.

Sie können die Malonato -Brühe auch aus einer Ernte von 18 bis 24 Stunden in Triptyse Soja -Brühe impfen. In diesem Fall werden 0,01 ml mit einer sterilen Pipette eingenommen und die Malonato -Brühe wird geimpft. Es wird mit dem faulen Deckel in der Aerobiose bei 35 ° C ± 0,2 für 24 bis 48 Stunden inkubiert.

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Beendete die Zeit, die die Ergebnisse interpretiert werden. Jegliche Überreste der blauen Farbe, die 48 Stunden Inkubation abgeschlossen ist, sollte als positiv angesehen werden. Der Test sollte nicht als negativ interpretiert werden, wenn die 48 -Stunden -Inkubationszeit erfüllt wurde.

Bei Verwendung der Malonato-Phenylalanin-Brühe-Variante wird die Malonato zuerst interpretiert und dann 5 Tropfen HCl 1N und 3-5 Tropfen von 8% Eisen Chlorid zugesetzt. Eine dunkelgrüne Farbe wird als positiver Test für Phenylalanin interpretiert. Wenn im Gegenteil das Medium hellblau wird, ist der Test für Phenylalanin negativ.

QA

Um die Sterilitätskontrolle des Mediums durchzuführen, müssen ein oder zwei Brühen für 24 Stunden Inkubation bei 35 ° C ± 0,2 inkubiert werden. Nach dieser Zeit sollte es keine Trübung oder Farbänderung geben.

Für die Qualitätskontrolle können Sie bekannte oder zertifizierte Stämme verwenden, wie z. B.: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, SSP Arizonae entrico salsonella ssp ATCC 13314 und Escherichia coli ATCC 25922.

Die erwarteten Ergebnisse sind:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae Und SSP Arizonae entrico salsonella ssp Sie geben eine positive Reaktion (halb blau).
• Für Escherichia coli Das Ergebnis muss negativ sein, dh es wird erwartet, dass es keine Farbänderung (grün) gibt oder dass es aufgrund der Glukosefermentation gelb wird.

Einschränkungen

Verwenden Sie keine Brühe, die Trübung, Ausfälle, Farbänderungen oder ein Zeichen einer Verschlechterung aufweisen.

Verweise

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiologische Isolierung von Salmonella spp. und molekulare Werkzeuge zum Nachweis. Unfilte Gesundheit. Barranquilla (col.) 2014; 30 (1): 73-94. Erhältlich bei: Scielo.Org.CO
2. Bbl. Malonatbrühe, Ewing modifiziert. 2007. Verfügbar bei: BD.com
3. Senna Laboratories. Malonato -Brühe. Verfügbar bei: Scientific.com
4. Renylab. Malonato -Brühe. 2013. Verfügbar bei: dies.Renylab.Ind.Br
5. MBIOLOGY -Diagnostik. Malonato -Brühe. Erhältlich bei: MBIOLOGY.com
6. Koneman E, Allen S., Janda W., Schreckenberger P., Winn W. (2004). Mikrobiologische Diagnose. 5. ed. Pan -American Editorial s.ZU. Argentinien.
7. Conda Pronadisa Laboratorien. Malonato Phenylalaninbrühe. Erhältlich bei: Condalab.com