Tetrapationat -Brühe Was ist, Foundation, Vorbereitung, verwendet

Er Tetationatbrühe O TT -Brühe ist ein selektives flüssiges Kulturmedium für die Anreicherung und Wiederherstellung von Stämmen der Gattung Salmonella. Es wurde von Müeller erstellt und später von Kauffmann modifiziert, sodass es diejenigen gibt, die ihn Müeller-Kauffmann-Brühe nennen.

Das ursprüngliche Medium enthielt Peptonas Protein, Calciumcarbonat und Natriumthiosulfat. Kauffmann fügte Gallensalze hinzu und schuf eine weitere Modalität mit hellgrünem. Diese Substanzen hemmen das Wachstum von Coliformen und lassen das freie Medium für die Entwicklung pathogener Bakterien in diesem Fall Salmonellen.

Aggregat der Jod -Jodlösung für die Tetationato -Brühe. Quelle: Manuel Almagro Rivas [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lizenzen/by-sa/4.0)]]

Die Modifikation war sehr erfolgreich, da die Empfindlichkeit des Mediums signifikant zunahm. Daher ist es derzeit nützlich für die Suche nach Salmonellas in jeder Art von Probe, insbesondere jedoch für feste oder flüssige Kot und Lebensmittel.

Seine Vorbereitung besteht aus zwei Phasen; Das kommerzielle Medium ist eine Grundlage für die Vorbereitung der TetRationato -Brühe und später, damit die Tetationato eine Jodlösung gebildet werden kann, die das Medium vervollständigt.

Die American Public Health Association (APHA) empfiehlt die Verwendung der mit hellgrünen Tetrationat -Brühe, die mit hellgrüner Anreicherung von Proben auf der Suche nach Salmonellen ergänzt ist.

Im Allgemeinen ist die Tetationato -Brühe ideal, wenn das Vorhandensein von Bakterien der Gattung der Salmonellen in kleinen Mengen vermutet wird oder durch Exposition gegenüber inhibitorischen Substanzen oder durch industrielle Prozesse, die ihre Lebensfähigkeit minimieren.

Basis

Die vorhandenen Peptones entsprechen digreatischem Kasein und digretiertem Digrealpeptikumpeptikum. Diese liefern die Quelle von Kohlenstoff, Stickstoff und Nährstoffen im Allgemeinen für Bakterienwachstum.

Kann Ihnen dienen: Mastozoologie: Herkunft, welche Studien, Beispiel für Forschung

Natriumthiosulfat reagiert für seinen Teil mit der Iodidlösung, um Tetrapationato zu bilden. Dies hemmt das Wachstum von Coliformen und begünstigt die Entwicklung von Bakterien, die die Enzym -Tetationato -Reduktase enthalten, darunter die geschlechtsspezifische Salmonellen, aber auch Proteus.

Gallensalze wirken auch als inhibitorische Substanz der meisten positiven Grammbakterien und einige Gramm negativ (coliforme).

Calciumcarbonat absorbiert die toxischen Substanzen. In diesem Sinne neutralisiert Calciumcarbonat die Säure, die den pH -Wert des stabilen Mediums hält.

Im Falle der Modalität mit brillantem Grün erhöht diese Substanz die selektive Kraft der Tetationatbrühe, indem sie andere Mikroorganismen als die geschlechtsspezifische Salmonellen hemmt.

Vorbereitung

-Tetationatbrühe

Iodurada -Jodlösung

Wiegen:

• 6 g Jod.
• 5 g Kaliumiodid.

Kaliumiodid löst sich in ungefähr 5 ml sterilem destilliertem Wasser, dann wird das Jod nach und nach zugesetzt, während die Mischung erhitzt wird. Nachdem es vollständig gelöst ist, ist es bündig mit sterilem destilliertem Wasser, bis es ein endgültiges Volumen von 20 ml erreicht.

Halbe Basis für Tetationato -Brühe

46 Gramm des dehydrierten Mediums wiegen und in 1 Liter sterilem destilliertem Wasser suspendieren. Mischen Sie und erhitzen Sie sie bis zu seiner Gesamtauflösung, können nur einige Minuten führen. In Autoklaven nicht sterilisieren. Die Basis des Mediums darf ungefähr 45 ° C ca. ca. abkühlen lassen, und zu diesem Zeitpunkt wird 20 ml der Jodlösung zugegeben.

Nach dem Hinzufügen der Iodus -Lösung zum Medium muss sie sofort verwendet werden. Wenn Sie nicht die gesamte Mischung verwenden möchten, gehen Sie wie folgt vor:

Kann Ihnen dienen: Intra -spezifischer Wettbewerb: Merkmale, Typen und Beispiele

10 ml des Basismedium.

Wer nicht verwendet werden wird.

Die Farbe des Mediums vor dem Hinzufügen der Iodid -Iodid -Lösung ist milchig weiß mit weißem Niederschlag und nach dem Aggregat ist braun mit einem dichten Niederschlag. Der beobachtete Niederschlag ist normal und entspricht dem Calciumcarbonat, das nicht gelöst ist. Der endgültige pH -Wert des Mediums beträgt 8,4 ± 0,2.

-Tetationat -Brühe -Variante mit hellgrünem

Um die Tetationato -Brühe mit hellgrünem Vorbereitung vorzubereiten, werden alle oben beschriebenen Schritte durchgeführt, aber außerdem wird sie der Mischung der 0,1% hellgrünen Lösung hinzugefügt.

Grün glänzend

Diese Lösung wird wie folgt hergestellt:

Wiegen Sie 0,1 g hellgrün und in 100 ml destilliertem Wasser auf. Wärme zum Kochen erhitzen, um seine Gesamtauflösung zu erreichen. Sparen Sie in Bernsteinflasche.

Verwenden

Für Kotproben (Coproulure) ist das Protokoll wie folgt:

1 g Gradkot oder 1 ml flüssiger Kot in einem Röhrchen mit 10 ml Tetrapationatbrühe inkulieren. Strecken Sie stark und inkubieren Sie die Aerobiose bei 43 ° C für 6-24 Stunden.

Nehmen Sie anschließend ein Aliquot von 10 bis 20 µl Brühe und steigen Sie in einem selektiven Medium für Salmonellen wie SS Agar, XLD Agar, hellgrüner Agar und Heektoen enteric Agar auf.

Parallel dazu müssen selektive Mittel für Salmonellen mit der direkten Probe (Kot) ohne Anreicherung geimpft werden. Laden Sie für rektale Tupferproben das im Röhrchen gesammelte Material herunter und fahren Sie auf die oben beschriebene Weise fort.

Kann Ihnen dienen: Lipogenese: Eigenschaften, Funktionen und Reaktionen

Für Lebensmittelproben wiegen 10 g festes Lebensmittel oder 10 ml flüssiger Lebensmittel und inokulieren eine Flasche mit 100 ml Tetrapationatbrühe, die verwendet werden können. Gehen Sie auf die gleiche Weise wie die oben beschriebenen, aber 37 ° C inkubieren.

Wie zu sehen ist, wird die Beziehung zwischen der Probe und der Brühe immer 1:10 sein.

QA

Um das Kulturmedium zu testen, können Sie Stämme bekannte Kontrollen verwenden. Die am häufigsten verwendeten ATCC -zertifizierten Stämme sind.

Die zu verwendenden Stämme sind Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abträglich DSM 4224, Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 und Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Für Salmonellenstämme wird eine hervorragende Entwicklung erwartet, während es zwar erwartet wird Escherichia coli Es kann eine schwache oder regelmäßige Entwicklung haben, und gram -positive Stämme (Enterococcus und Staphylococcus) sind teilweise oder vollständig gehemmt.

Empfehlungen

-Da dieses Medium das Wachstum von Proteus nicht hemmt, platzieren einige Laboratorien normalerweise 40 mg/l Novobiocin, um die Entwicklung dieses mikrobiellen Stammes zu vermeiden. Das Antibiotikum muss vor der Jod -Iod -Lösung hinzugefügt werden.

-Nach der Vorbereitung des Mediums einschließlich der Jod -Jodlösung sollte es nicht mehr als 2 Stunden damit verbringen, geimpft zu werden.

-Zum Zeitpunkt der Verteilung des Mediums in den Röhren muss das Gemisch kontinuierlich homogenisiert werden.

-In weniger kontaminierten Proben werden die 35-37 ° C-Proben inkubiert, und in sehr verschmutzten Proben wird die Inkubation bei 43 ° C empfohlen.

Verweise

1. BBL -Medien. 2005. Vorbereitet in Rohr für den Anbau der Salmonellenspezies.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologische Diagnose von Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial s.ZU. Argentinien.