Tioglicolat -Brühe -Stiftung, Vorbereitung und Verwendung

Er Tioglycolatbrühe Es ist ein angereichertes Mittel zur Flüssigkeitskonsistenz. Es ist mit dem Akronym FTM bekannt). Es wurde von Brewer geschaffen und 1944 von Vera modifiziert, der ihn Pepton von Kasein integrierte.

Dieses Medium hat ein niedriges Oxidationspotential -Reduktion, daher wird es nicht für die Entwicklung strenger aeroben Bakterien empfohlen, aber es ist ideal für die Wiederherstellung optionaler aerober Bakterien, strenger und mikroaerophiler anaerobe Bakterien.

Tioglycolatbrühe ohne Indikator. Probe Vaginalsekretion. Quelle: Bobjgalindo [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lizenzen/by-sa/4.0)]]

Die hohe Leistung, die bei diesem Medium bei der Isolierung und Wiederherstellung einer Vielzahl von Mikroorganismen beobachtet wurde, hat es von den United States Pharmacopoeia (USP), der offiziellen Vereinigung von Agrarchemikern (AOAC) und von der europäischen Pharmakopoeia (EP) akzeptiert, es akzeptiert wurde.

Diese Organisationen empfehlen es für die Sterilitätskontrolltests von pharmazeutischen Produkten und für die Anreicherung verschiedener Arten von Proben.

Der Thioglykolat-Cado besteht aus Hefeextrakt, digratem Kasein, wasserfreiem Dextrose, L-Cistin, Natriumchlorid, Natriumtioglykolat, Ruhe und Peak in einer kleinen Menge in einer geringen Menge.

Es gibt mehrere Versionen dieses Medium_1, Und Tioglicolatbrühe mit kaliktivem Carbonat.

Es ist zu beachten, dass die Variante der mit Hemin und Vitamin K angereicherten Tioglycatbrühe dazu dient.

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Basis

Tioglycolat -Brühe gilt als Anreicherung und nicht selektiv, da sie die Entwicklung der meisten nicht absorbierenden Bakterien ermöglicht. Ernährungsbedürfnisse werden von Hefeextrakt, Pankreasverdauter und Glukose bereitgestellt.

Andererseits enthält dieses Medium, obwohl es sich um eine Brühe handelt, eine kleine Menge Agar; Dies führt zu einem niedrigen Oxid-Reduktionspotential, da der Sauerstoffeintritt bremst, so dass der Sauerstoff abnimmt, wenn er sich im Röhrchen vertieft.

Aus diesem Grund ist dieses Medium ideal für die Entwicklung optionaler aerober Bakterien, Mikroaerophile und strenger anaeroben, diese letzten 2, ohne unter diesen Bedingungen zu inkubieren. Das gleiche Medium reguliert die Sauerstoffmenge innerhalb der Umwelt, fehlt am Boden des Rohrs und in ausreichender Menge an der Oberfläche.

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Ebenso wirken Tioglycolat und L-Cistin als Reduktionsmittel und beiträgt zur Vorbeugung der Ansammlung von Substanzen bei. Darüber hinaus enthalten diese Verbindungen Sulfidrils (-Sh-) Gruppen, die unter anderem die hemmenden Wirkungen von Merkurialderivaten, Arsenikaler, neutralisiert.

Andererseits ist Unruhe ein Oxid -Reduktionsindikator. Diese Substanz ist farblos, wenn sie reduziert und rosa ist, wenn sie oxidiert werden. Es gibt die Varianten von Tioglicolatbrühe mit Indikator und ohne Indikator. Die Verwendung hängt von der Art der Stichproben- und Laborpräferenz ab.

In der Zwischenzeit behält Natriumchlorid das osmotische Gleichgewicht der Tioglycatbrühe auf, und die Verwendung von Anhydra -Glucose verhindert überschüssige Feuchtigkeit in der dehydrierten Umgebung.

Vorbereitung

Tioglycolatbrühe mit Indikator

29,75 g des dehydrierten Mediums wiegen und in 1 Liter destilliertem Wasser auflösen. Die Mischung bleibt bei ca. 5 Minuten übrig. Bringen Sie eine Wärmequelle mit und rühren Sie häufig um, bis sie sich vollständig auflöst.

Gießen Sie das Medium in Testrohre und autoklavieren Sie 15 Minuten bei 121 ° C. Vor dem Gebrauch abkühlen lassen. Überprüfen Sie den Einsatz des Handelshauss auf seine Erhaltung. Einige empfehlen, bei Raumtemperatur am dunklen Ort zu sparen, andere im Kühlschrank, das vor Licht geschützt ist.

Der vorbereitete mittlere pH -Wert beträgt 7,1 ± 0,2.

Die Farbe des dehydrierten Mediums ist leicht und vorbereitet Beige ist ein klarer Bernstein mit etwas Opaleszenz.

Tioglycolatbrühe mit Hemin- und Vitamin -K -Indikator₁

Es gibt kommerzielle Medien, die Hemina und Vitamin K bereits bringen₁, Besonders für anaeroben Anbau.

Wenn Sie kein angereichertes Medium für Anaerobier haben, kann die grundlegende Tioglykolatbrühe vorbereitet werden. Zu diesem Zweck werden 10 mg Heminhydrochlorid und 1 mg Vitamin K zugegeben₁ Für jeden Liter Medium. Wenn jedoch Blut oder Serum in die Tioglycolat -Brühe zugesetzt wird, ist die Zugabe von Hemin nicht erforderlich.

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Tioglycolatbrühe mit Calciumcarbonat

Kommt kommerziell und bereitet den Anweisungen des Einsatzes nach Anweisungen vor.

Tioglycolatbrühe ohne Indikator

Dies hat die gleiche Zusammensetzung des grundlegenden Tioglycats, enthält jedoch nicht Resazurin.

30 g dehydriertes Medium wiegen und in einem Liter destilliertem Wasser auflösen. Der Rest der Vorbereitung entspricht der in der Tioglycate -Brühe mit Indikator beschriebenen.

Verwenden

Tioglycolatbrühe ist nützlich für die Anreicherung klinischer Proben, insbesondere für diejenigen von sterilen Stellen. Es ist auch nützlich für nicht klinische Proben wie Kosmetika, Medikamente usw.

Für die Inokulation flüssiger Proben (wie CSF, unter anderem Synovialflüssigkeit) zentrifugieren die Proben und dann werden 2 Tropfen des Sediments in die Tioglykolat -Brühe genommen und platziert. 24 Stunden bei 35 ° C inkubieren. Wenn es zu diesem Zeitpunkt kein Wachstum (Trübung) gibt, wird es bis zu maximal 7 Tage inkubiert.

Wenn die Stichprobe mit Hiopus entnommen wird, werden die Kulturmedien zuerst in Platten geimpft und schließlich wird der Tupfer in die Brühe eingeführt, der Teil, der auffällt und der Röhrchen bedeckt ist, und der Tupfer im Inneren lässt. Inkuba bei 35 ° C für 24 Stunden, 7 Tage maximal.

Für feste Proben muss es in physiologischer Salzlösung (SSF) homogenisiert werden und dann die Tioglykolatbrühe mit 2 Tropfen der Suspension inokuliert.

Manchmal kann es als Transportmittel für Proben verwendet werden.

Die Tioglycolat -Brühe -Variante mit Calciumcarbonat wird für eine längere Zeit zur Aufrechterhaltung von Kontrollen verwendet, da sie die durch die Verwendung von Glukose erzeugte Säuren neutralisiert; Diese Säuren sind für bestimmte Bakterien giftig.

Wachstum in der Tioglykolatbrühe wird aufgrund der Trübung der Umwelt beobachtet. Es wird empfohlen, eine Grammfärbung durchzuführen und anschließend in nicht -selektiven und selektiv.

QA

Für die Sterilitätskontrolle wird empfohlen, ein oder zwei Brühen ohne Impfung zu inkubieren. Das erwartete Ergebnis ist eine transparente Brühe ohne Farbänderung, obwohl es normal ist, dass eine leichte rosa Farbe auf der Rohroberfläche beobachtet wird.

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Für die Qualitätskontrolle zwischen 10 und 100 UFC von zertifizierten Kontrollen wie z Staphylococcus aureus ATCC 6538, Mikrokokken luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium -Sporogenes ATCC 19404, Clostridium -Sporogenes ATCC 11437, Vulgatus -Bakteroide ATCC 8482.

Inkubieren Sie die Aerobiose bei 30-35 ° C für 24 Stunden bis zu maximal 3 Tage, da diese Mikroorganismen ein schnelles Wachstum sind.

In allen Fällen wird eine gute Entwicklung erwartet, mit Ausnahme von Mikrokokken luteus Und Bacillus subtilis, wo es eine moderate Entwicklung geben kann.

Für die Qualitätskontrolle der mit Hemina und Vitamin K angereicherten Tioglykolatbrühe₁, Kontrollstämme können verwendet werden Vulgatus -Bakteroide  ATCC 8482, Clostridium Perflingens ATCC 13124 und Fragilis bakteroide ATCC 25285. Das erwartete Ergebnis ist ein zufriedenstellendes Wachstum.

Empfehlungen

-Manchmal ist ersichtlich, dass die Oberfläche der Tioglycate -Brühe mit Indikator rosa wird; Dies liegt an der Oxidation der Umwelt. Wenn die rosa Farbe 30% oder mehr der Gesamtbrühe abdeckt.

Dadurch wird der absorbierte Sauerstoff beseitigt und das Medium in seine ursprüngliche Farbe zurückgebracht. Dieses Verfahren kann nur einmal durchgeführt werden.

-Um das Wachstum von aeroben Bakterien zu verbessern, muss es mit dem leicht faulen Deckel inkubiert werden. Es ist jedoch vorzuziehen, für diesen Zweck eine Infusionsbrühe -Gehirnherz oder eine blödliche Sojabrühe für die gute Entwicklung strenger Aerobes zu verwenden.

-Das Einfrieren der Umwelt oder Überhitzung sollte vermieden werden, da beide Bedingungen das Medium beschädigen.

-Direktes Licht schädigt das Kulturmedium, es muss vor Licht geschützt werden.

Verweise

1. Britania Laboratories. USP -Tioglycolat mit Indikator. 2015. Erhältlich bei: Labbritania.com.
2. Quos SAS Laboratorien. 2019. Tioglycolatbrühe. Verfügbar bei: Quios.com.CO
3. BD Laboratories Flüssigkeit Thioglycollat ​​Medium (FTM). 2003. Verfügbar bei: BD.com/Europa
4. BBL -Medien, die in Röhrchen zur Kultivierung anaerobischer Mikroorganismen hergestellt wurden. Tioglycate Media. 2013. Verfügbar bei: BD.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologische Diagnose von Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial s.ZU. Argentinien.