Harnstoffbrühe Was ist, Foundation, Vorbereitung, verwendet

Er Harnstoffbrühe Es handelt. Hareasa ist ein mikrobielles Enzym, das konstitutiv auftritt, dh es wird synthetisiert, unabhängig von oder nicht, indem es das Substrat ist, auf dem es handelt.

Die Funktion der Harnstoff hängt mit der Zersetzung organischer Verbindungen zusammen. Nicht alle Mikroorganismen können dieses Enzym synthetisieren. Daher ermöglicht die Bestimmung im Labor, bestimmte bakterielle Stämme zu identifizieren und sogar zwischen Arten desselben Geschlechts zu unterscheiden.

Es gibt zwei Arten von Harnstofftests: Stuart und Christensen. Sie unterscheiden sich in ihrer Zusammensetzung und Empfindlichkeit. Das erste ist etwas Besonderes, um eine große Menge an Harnstoff zu zeigen, die von Arten der Proteingattung produziert werden.

Die zweite ist empfindlicher und kann in letzter Zeit durch andere bakterielle Genres wie Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Mikrokokken, Helicobacter und Mycobacterium kleine Mengen von Harnstoff nachweisen.

Stuarts Harnstoffbrühe besteht aus Harnstoff, Natriumchlorid und Dipotium -Phosphat.

Während Christensens Brühe oder Harnstoffgriff aus Peptonas, Natriumchlorid, Monopotásic-Phosphat, Glukose, Harnstoff, Phenolrot, destilliertem Wasser und Agar-Darm bestehen. Letzteres nur, wenn es das feste Medium ist.

Basis

Das Harnstoff -Enzym hydrolysiert den Harnstoff, um Karbonanhydrid, Wasser und zwei Ammoniakmoleküle zu bilden. Diese Verbindungen reagieren auf das Endprodukt, das als Ammoniumcarbonat bezeichnet wird.

Harnstoffbrühe

Stuarts Harnstoffbrühe ist mit einem pH -Wert von 6,8 gepuffert. Daher muss der Mikroorganismus in der Lage sein, große Mengen Ammonium zu bilden, um das Rot -Fenol zu drehen. Der pH muss über 8 steigen.

Daher ist Stuarts Harnstoffbrühe für Proteus -Spezies selektiv und liefert positive Ergebnisse in 24 bis 48 Stunden Inkubation und ist für Bakterien nicht wirksam, die nur wenige Mengen Harnstoff produzieren oder den Harnstoff langsam hydrolysiert.

Dies liegt daran, dass Proteus -Spezies in der Lage sind, Harnstoff als Stickstoffquelle zu verwenden. Andererseits benötigen andere von Bakterien produzierende Heasa eine zusätzliche Quelle.

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Pérez et al. (2002) stellten fest, dass Stuarts Harnstoffbrühe genauso effizient war.

Die Autoren der Studie behaupten, sowohl mit den Medien (Stuart als auch Christensen) 100% einem Übereinstimmung durch 24 und 48 Stunden erreicht zu haben. Machen Sie die Ausnahme, dass die Stämme, die es geschafft haben, die Medien zu einer starken rosa Fucsia-Farbe zu verwandeln.

Diese Erklärung ist notwendig, da Lodder (1970) sagte, dass fast alle Hefen es schaffen, die Lünette der Harnstoff -Christensen -Harnstoff nach Pale Rosado zu bringen. Dies liegt daran. Dies sollte nicht als positiv interpretiert werden.

Christensens Harnstoffbrühe oder Agar

Christensens Harnstoffbrühe oder Agar ist weniger gepuffert und kann kleine Mengen Ammonium erkennen. Darüber hinaus ist dieses Medium mit Peptonas und Glukose angereichert. Diese Verbindungen machen andere Heasa, die Mikroorganismen produzieren, die in der Stuart -Brühe nicht wachsen.

Ebenso bietet der Harnstofftest von Christensen schnellere Ergebnisse, insbesondere für Proteus, da sie in nur 30 Minuten als Mindestzeit und bis zu 6 Stunden als maximale Zeit stark positiv sein kann.

Der Rest der Produktion von Mikroorganismen von Harreasa kann nach 6 Stunden und nach 24, 48, 72 Stunden oder mehr die Farbe der Umwelt leicht umdrehen, und sogar einige Stämme können nach 5 oder 6 Tagen schwache Reaktionen führen.

Interpretation beider Medien (Stuart und Christensen)

Das Medium ist ursprünglich gelb-orange und eine positive Reaktion wird die Farbe von Medium nach rosa-Fucsie wenden. Die Farbintensität ist direkt proportional zur Menge des erzeugten Ammoniums.

Eine negative Reaktion hinterlässt die ursprüngliche Farbe mit Ausnahme von Hefen, die ein blasses Rosa mit Christensens Harnstoffmedium geben können.

Vorbereitung

Harnstoffbrühe

Wiegen Sie die notwendigen Gramm nach den Angaben des Handelshauss. Lösen Sie in bevorzugter steriles destilliertes Wasser auf.  Verwenden Sie keine Wärme, um sich aufzulösen, da Harnstoff wärmeempfindlich ist.

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Um die Membranfiltrationsmethode zu sterilisieren, wird verwendet. Dafür wird ein Millipor -Filter mit Poren mit 0,45 µ Durchmesser verwendet. Verwenden Sie keinen Autoklaven. Sobald die Lösung gefiltert ist, ist sie in sterilen Röhrchen verteilt. Um zuverlässige Ergebnisse zu erzielen, müssen zwischen 1,5 ml als minimaler Betrag bei 3 ml als maximale Menge pro Röhrchen übertragen werden.

Halten Sie im Kühlschrank und im Temperament, bevor Sie es verwenden.

Wenn die Filtrationsmethode nicht verfügbar ist, muss das Medium sofort verwendet werden, um zuverlässige Ergebnisse zu erhalten.

Eine andere Möglichkeit, Stuarts Harnstoffbrühe vorzubereiten, ist wie folgt:

Einige Handelshäuser verkaufen das Basismedium für den Harnstofftest ohne Harnstoff.

Die vom Handelshaus angegebene Menge wiegt. Es löst sich in destilliertem Wasser auf und sterilisiert im Autoklav bei 121 ° C 15 Minuten. Lassen Sie ein wenig stehen und wenn das Medium wärme 100 ml einer 20% vorbereiteten Harnstofflösung ist und Filterung durch Filtration zugegeben wird.

Es ist wie oben beschrieben in sterilen Röhren verteilt.

Christensens Harnstoffbrühe oder Agar

-Harnstofflösungsvorbereitung

Wiegen. Verwenden Sie die Filtrationsmethode, um zu sterilisieren. Nicht autoklavieren.

-Harnstoff -Basi -Agar

24 g dehydrierter Base in 950 ml destilliertem Wasser auflösen. 15 Minuten bei 121 ° C in Autoklave sterilisieren. Setzen.

Gießen Sie 4 bis 5 ml in sterile Röhrchen und neigen Sie, bis sie festigen. Ein langer Flötengipfel muss sein.

Dieses Medium kann auch in flüssiger Form hergestellt werden.

Anwendungen

Der Harnstofftest ist äußerst effektiv, um das Proteus -Genre von anderen Genres der Enterobacteriaceae -Familie zu unterscheiden, angesichts der schnellen Reaktion, die Proteus bietet.

Wenn Christensens Zusammensetzung verwendet wird, unterscheidet der Test zwischen Arten von derselben Gattung. Zum Beispiel, S. Haemolyticus und s. Warneri sAN Staphylococcus negative und betahemolytische Koagulase, Aber sie unterscheiden sich in was S. Haemolyticus Es ist negativ und S. Warneri Es ist positiver Harnstoff.

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Auf der anderen Seite verwendete McNulty erfolgreich 2% Christensens Harnstoffbrühe, um das Vorhandensein von zu untersuchen Helicobacter pylori In Biopsieproben aus der Magenschleimhaut (Antral -Region) entnommen.

Das Vorhandensein von H. Pylori Es wird durch einen positiven Harnstofftest belegt. Die Dauer, um die Ergebnisse zu beobachten, ist direkt proportional zur Menge der vorhandenen Mikroorganismen.

Wie zu sehen ist, ist es eine einfache Methode für die Diagnose von Helicobacter pylori In Magenbiopsien.

Schließlich ist dieser Test auch nützlich, um Spezies von den Genres Brucella, Bordetella, Bacillus, Mikrokokken und Mykobakterien zu unterscheiden.

Harnstofftest gesät

Die beiden Methoden erfordern ein starkes mikrobielles Inokulum, um die Ergebnisse zu optimieren. Die bakteriellen Kolonien werden vorzugsweise aus Blutagar und Hefen des Sabouraud -Agars genommen, mit Ausnahme einiger Ausnahmen. Das Inokulum wird in der flüssigen Umgebung emulgiert.

Für Stuarts Harnstoffbrühe wird 37 ° C für 24 bis 48 Stunden inkubiert, da sie weiß, dass sie nur nach Stämmen der Proteingattung sucht, wenn der Stamm ein Bakterium ist. Für Hefen können Sie 24 bis 48 Stunden Inkubation bei 37 ° C oder bei Raumtemperatur inkubieren.

Im Fall von Christensens Harnstoffbrühe wird 37 ºC 24 Stunden lang inkubiert. Wenn der Test negativ ist, kann er bis zu 6 Tage inkubiert werden. Wenn der Test positiv vor 6 Uhr morgens angibt, zeigt er an, dass es sich um einen Stamm des Proteingenres handelt.

Im Falle von Christensens Harnstoff -Agar ist die Lünette des Agars ohne Punktion stark inokuliert. Die Brühe ist Incuba und interpretiert auf die gleiche Weise.

QA

Um das Medium zu testen, können Sie Steuerelemente verwenden, wie z Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 und Salmonella typhimurium.  Die ersten beiden müssen positive Ergebnisse und die letzten beiden negativen Ergebnisse liefern.

Verweise

1. Britania Laboratories. Christensen Medien (Harnstoff -Basi -Agar). Erhältlich bei: Britanialab.com