Merkmale der Stamm (mikrobielle), Identifizierung, Isolation

A Mikrobielle Dehnung Es ist der Satz von Nachkommen aus einem einzigen mikrobiellen isolierten, das in einem reinen Medium angebaut wird und normalerweise aus einer Reihe von Organismen besteht, die aus derselben anfänglichen Kolonie stammen.

Ein Stamm stellt auch eine Reihe von Individuen aus einer Population einer mikrobiellen Spezies dar, die bestimmte phänotypische und/oder genotypische Eigenschaften teilt, die ihn leicht von anderen von derselben Spezies unterscheidet, deren Unterschiede jedoch nicht ausreichen, um sie als verschiedene Arten zu kategorisieren.

Foto einer Petrischplatte mit festem Kulturmedium, das mit Antibiotika ergänzt ist, wo resistente Mikroben wachsen.Org/lizenzen/by-sa/4.0) über Wikimedia Commons)

Der Stamm ist die "Grundlage" für eine mikrobiologische Studie, da er Wissenschaftlern garantiert, dass die Parameter und Merkmale, die über eine Art Mikrobe untersucht werden, nur für diese Spezies spezifisch sind. Darüber hinaus können sie in gewisser Weise die Reproduzierbarkeit von Untersuchungen sicherstellen.

Zum Beispiel ist das erste Ziel für taxonomische Studien in der Mikrobiologie, „den Stamm“ des Organismus zu erhalten, der von einer Population einer anderen Art von Mikrobe erwünscht ist.

Mit der Belastung können Sie eine Art Mikrobe am Leben erhalten und isoliert In vitro Für lange Zeiträume, das heißt, weit entfernt von seiner natürlichen Umgebung. Sie können Stämme von vielen verschiedenen Mikroorganismen wie Bakterien, Pilzen, Viren, Protozoen und Algen erhalten.

Für die Aufrechterhaltung der Stämme müssen diese in strikter Isolation gehalten werden, wodurch der Anstieg vermieden wird, dass er Kontakt mit einem verschmutzten Mittel wie Pilzsporen oder einem Wirkstoff von externen Mikroorganismen hat.

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Eigenschaften von Stämmen

Alle Stämme, unabhängig von der Art des Mikroorganismus (die Art), die sie darstellen, müssen einige grundlegende Parameter erfüllen, darunter:

- Sie müssen stabile genetische Linien sein oder eine hohe genetische Treue aufweisen

Es ist wichtig, dass alle Personen, die im Kulturmedium bleiben. Das heißt, alle stammen aus derselben Person oder zumindest aus derselben Bevölkerung.

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- Sie müssen leicht zu pflegen oder zu kultivieren zu lassen sein

Personen, die einer Belastung angehören, sollten leicht in einer Umgebung zu halten sein In vitro. Mit anderen Worten, nicht alle Mikroben können sich aus ihrer natürlichen Umgebung isolieren. Wenn diese in externen Medien schwer zu kultivieren sind, kann ihre Biologie leicht mit minimalen Veränderungen in der Umgebung verändert werden, in der sie im Labor isoliert bleiben.

- Sie müssen ein schnelles Wachstum und eine schnelle Entwicklung unter optimalen Bedingungen haben

Wenn sich isolierte Mikroben nicht schnell innerhalb des zu diesem Zweck verwendeten Kulturmediums entwickeln, können diese für ihre Studie schwer zu bewahren sein, da sie die Nährstoffe in ihrer Umgebung erschöpfen, die Phase verändern oder ihr Überleben unter diesen Bedingungen in diesen Bedingungen beeinträchtigen können Bedingungen.

- Sie müssen definierte Eigenschaften und Parameter vorlegen

Ein isolierter Microorganismus -Stamm muss gemeinsame Eigenschaften aufweisen, die ihn identisch und speziell auf Personen beziehen, die identisch sind. Diese Eigenschaften müssen im Laufe der Zeit konstant sein.

- Einfache Manipulation

Im Allgemeinen erfordern Stämme, die in Routineuntersuchungen verwendet werden. Dies stellt sicher, dass sowohl Studenten als auch neue Forscher die Kontinuität von Studien im Laufe der Zeit aufrechterhalten können.

AUSWEIS

Molekulare Identifizierung

Es gibt verschiedene Methoden, um eine frisch isolierte Belastung zu identifizieren. Derzeit ist jedoch die genaueste, schnelle und einfache Technik zur Bestimmung der Identität fast jeder Arten die Analyse einiger Regionen der genetischen Sequenzen, aus denen das Genom des Individuums besteht.

Normalerweise werden diese Analysen amplifizierende spezifische DNA -Regionen mit der PCR -Technik (Polymerasekettenreaktion) durchgeführt. Diese Techniken variieren je nach Rand, Familie und der Art des Mikroorganismus, aus dem Sie die Identität kennenlernen möchten. Im Allgemeinen sind diese Regionen:

- Die Regionen, die für Ribosomales orns codieren

- Die Gene, die für die Proteinuntereinheiten kodieren, die an der Atmung beteiligt sind (insbesondere wenn der Organismus aerob ist)

- Die genetische Region, die für Aktin -Mikrofilamente codiert (Teil des Zytoskeletts)

- Einige genetische Regionen von Chloroplasten- oder Proteinuntereinheiten, die an der Photosynthese teilnehmen (für einige Algen und Cyanobakterien und für alle Pflanzen)

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Sobald diese Genomfragmente erfolgreich verstärkt wurden, werden sie sequenziert, um die Reihenfolge der Nukleotide zu kennen, aus denen diese Genomregionen bestehen. Dies geschieht durch NGS -Techniken (Englisch Sequenzierung der nächsten Generation) Mit spezialisierten Teams, die als Sequenzer bekannt sind.

Die sequenzierten Regionen werden mit den Sequenzen der Mikroorganismen dieses bereits oben angegebenen Typs verglichen, was beispielsweise die Datenbank verwendet wird, die auf der GenBank -Website hinterlegt ist (https: // www.NCBI.NLM.NIH.GOV/GenBank/).

Morphologische Identifizierung

In Laboratorien, die keine molekularen Biologiewerkzeuge haben, um die genetischen Eigenschaften zu analysieren, werden andere phänotypische Parameter zur Identifizierung der Stämme vieler Mikroorganismen verwendet. Wieder einmal variieren die phänotypischen Eigenschaften, die untersucht werden, je nach Organismus, Rand, Familie und den Arten, die berücksichtigt werden. Unter diesen Parametern werden untersucht:

- Die morphologischen Eigenschaften der Mikrobe im Kulturmedium. Merkmale wie: Farbe, Form, Textur, Wachstumstyp werden unter anderem beobachtet.

- Analyse von Stoffwechselprodukten unter Verwendung biochemischer Werkzeuge. Die Produktion von sekundären Metaboliten, ausgeschiedenen chemischen Verbindungen, wird unter anderem untersucht.

- Proteincharakterisierung und Kristallisation. Interne Proteine ​​aus Mikroorganismen werden unabhängig extrahiert und untersucht.

Das typische Ding in mikrobiologischen Studien ist die Durchführung der Charakterisierung von Stämmen mit beiden Arten der Identifizierung, dh sowohl durch morphologische Beobachtungen als auch durch molekulare Analyse.

Dehnungsisolierung

Die Isolierung von Stämmen impliziert mehrere Techniken, die auch verwendet werden, um eine Art Mikrobe von einem anderen zu trennen. Die Fähigkeit, den Stamm einer Art von Interesse zu isolieren, ist wichtig, um genau die Eigenschaften zu bestimmen, die ihn definieren.

Die meisten Stämme Isolationstechniken wurden im Verlauf des neunzehnten Jahrhunderts von den Eltern der Louis Pasteur und der Robert Koch -Mikrobiologie erstellt. Beide kämpften besessen, reine Zellkulturen (Stämme) der von ihnen untersuchten Mikroorganismen zu erhalten.

Quelle: Sentebrinka/CC by (https: // createRecommons.Org/lizenzen/bis/4.0) über Wikimedia Commons

Um diese Zellkulturen zu erhalten, untersuchten sie eine große Vielfalt von Techniken und Werkzeugen, von der Verwendung steriler Sticks bis hin zu Variationen in der Zusammensetzung der Kulturmedien, in denen die von ihnen untersuchten Mikroben sich auf das Wachstum vorbereiteten.

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Dehnungsisolierungstechniken

Gegenwärtig sind alle von diesen Forschern entwickelten und verwendeten Techniken und einige andere modernere in 6 verschiedenen Typen, nämlich:

- Rayado, Streifen oder Kratzer: Mit einem feinen und spitzen Instrument befindet sich der Ort, an dem sich der Mikroorganismus befindet (Special für den Anbau von Pflanzen, befindet sich In vitro in festem Medium). Mit dem Extrem, mit dem ein gestreifter Mikroorganismus berührt wurde, ein steriles, festes, massives, reich an Nährstoffen.

- Eintauchen oder Fusion in der Mitte: Es wird eine kleine Probe von Mikroben entnommen (es kann wie in der vorherigen Technik eingenommen sein) und in das Wachstumsmedium in einem flüssigen Zustand platziert. Agar wird hinzugefügt, um zu verfestigen, und es wird erwartet, dass es abkühlt wird. Die Kolonien werden nur beobachtet, wenn der Mikroorganismus sehr entwickelt ist.

- Serienverdünnungen: Eine Stichprobe des ursprünglichen Ortes, aus dem die Art verdünnt wurde. Die Verdünnungen "säen" in soliden Medien, und die Kolonien werden voraussichtlich erscheinen.

- Exklusive Kulturmedien: Sie sind Kulturwerte, die das Wachstum nur der Art von Mikrobe von Interesse ermöglichen; Das heißt, es verfügt über Komponenten oder Nährstoffe, die nur das Wachstum der Belastung ermöglichen, die Sie isolieren möchten.

- Manuelle oder mechanische Trennung: Eine kleine Probe der Mikrobe, die zu isolieren erwünscht wird.

Einige dieser Techniken sind einfacher zu bedienen als andere. Forscher verwenden sie jedoch nach den biologischen Merkmalen der Untersuchungsarten.

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