Cytochemiegeschichte, Studienobjekt, Nutzen und Techniken

Der Cytochemie Es enthält eine Reihe von Techniken, die auf der Identifizierung und Disposition bestimmter bestimmter Substanzen in der Zelle basieren. Es wird als Zweig der Zellbiologie angesehen, der die Zellmorphologie mit der chemischen Struktur kombiniert.

Laut Bensley, Gründer der Anwendung der modernen Zytologie, drückt es aus, dass der Zweck der Cytochemie darin besteht, die chemische Organisation von Zellen zu entdecken, um die Geheimnisse des Lebens zu verstehen. Sowie untersuchten die dynamischen Veränderungen, die während der verschiedenen Funktionsstadien auftreten.

1: Paget -Extramamaria -Krankheit. (Hämatoxylin-Eosin) 2: Senile Platten, die im Gehirnrinde bei einem Patienten mit Alzheimer-Krankheit beobachtet wurden. (Silberimprägnierung) 3: Kaninchenzunge, Kollagenfasern (blau). Muskelfasern (lila Streifen). (Massons Trichrom). 4: Lebergewebe mit fettem Degeneration. (Sudan III) 5: Aufblättere Leber. Nekrose. (Toluidinblau) Quellen: Wikipedia. com/useer: kgh [cc by-sa 3.0 (http: // creativecommons.Org/lizenzen/by-sa/3.0/)]/Public Domain-Dateien/Mohit Lalwani [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lizenzen/by-sa/4.0)]]

Auf diese Weise ist es möglich, die metabolische Rolle zu bestimmen, die diese Substanzen in der Zelle treffen.

Cytochemistry verwendet zwei Hauptmethoden. Die erste basiert auf chemischen und physikalischen Verfahren. Diese Techniken greifen auf die Verwendung des Mikroskops als unverzichtbares Instrument zurück, um die chemischen Reaktionen zu visualisieren.

Beispiel: Die Verwendung von zytochimischen Farbstoffen wie der Reaktion von Ferexgen oder PAS -Reaktion unter anderem.

Die zweite Methode basiert auf Biochemie und Mikrochemie. Mit dieser Methodik ist es möglich, das Vorhandensein von intrazellulären Chemikalien quantitativ zu bestimmen.

Unter den Substanzen, die in einem zellulären Gewebe oder einer Struktur nachgewiesen werden können, sind die folgenden: Proteine, Nukleinsäuren, Polysaccharide und Lipide.

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Geschichte der Cytochemie

Cytochemische Techniken seit ihrer Erfindung haben dazu beigetragen.

Anschließend öffnete die Cytochemie neue Horizonte unter Verwendung bestimmter Substrate, um das Vorhandensein von Enzymen oder anderen Molekülen in der Zelle zu färben.

Ebenso sind andere Techniken wie Immunozytokyse, die für die Diagnose vieler Krankheiten sehr hilfreich waren. Immunzytochemie basiert auf Antigen-Antikörper-Reaktionen.

Andererseits hat die Cytochemie auch fluoreszierende Substanzen verwendet, die Fluorochrome genannt werden, die ausgezeichnete Marker für den Nachweis bestimmter zellulärer Strukturen sind. Aufgrund der Eigenschaften des Fluorochroms unterstreicht es die Strukturen, auf die es eingestellt wurde.

Was studierst du?

Die verschiedenen zytochemischen Techniken, die bei einer biologischen Probe verwendet werden.

Diese Substanzen können Enzyme, Schwermetalle, Lipide, Glykogen und definierte chemische Gruppen sein (Aldehyde, Tyrosin usw.).

Die von diesen Techniken bereitgestellten Informationen können nicht nur die Zellidentifizierung, sondern auch für die Diagnose verschiedener Pathologien leiten.

Zum Beispiel sind eine zytochemische Färbung sehr nützlich, um zwischen den verschiedenen Leukämie -Arten zu unterscheiden, da einige Zellen bestimmte Schlüsselenzyme oder Substanzen exprimieren und andere nicht.

Andererseits sollte beachtet werden, dass die folgenden Überlegungen für die Verwendung von Cytochemie möglich sind, damit die folgenden Überlegungen vorgenommen werden müssen:

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1) Die Substanz muss an dem Ort, an dem sie natürlich ist, immobilisiert werden.

2) Die Substanz muss anhand von Substraten identifiziert werden, die spezifisch damit reagieren und nicht mit anderen Verbindungen.

Dienstprogramm

Die Proben, die durch zytochemische Techniken untersucht werden können, sind:

- Erweitertes peripheres Blut.

- Knochenmark erweitert.

- Fabriken für Histochemie -Techniken eingestellt.

- Zytozentrifugationszellen.

Cytochemische Techniken sind im Bereich der Hämatologie von großer Unterstützung, da sie häufig zur Diagnose und Differenzierung bestimmter Arten von Leukämie verwendet werden.

Zum Beispiel: Mattierungsreaktionen dienen dazu, zwischen einer myelomonozytischen Leukämie von akuter monozytischer Leukämie zu unterscheiden.

Knochenmarkabstriche und peripheres Blut dieser Patienten sind ähnlich, da einige Zellen nur aus morphologischer Sicht schwer zu identifizieren sind. Zu diesem Zeitpunkt wird der Nachlasstest durchgeführt.

In der ersten geben sie positiv die spezifischen Matten, während in der zweiten die nicht spezifischen Angelegenheiten positive Angelegenheiten geben.

Sie sind auch in der Histologie sehr nützlich, da beispielsweise die Verwendung der Schwermetallfärbungstechnik (argische Imprägnierung) intensive braune retikuläre Fasern im Myokardgewebe färbt.

Techniken in der Cytochemie

Die am häufigsten verwendeten Techniken werden unten erklärt:

- Verwendung von Farbstoffen

Die verwendeten Farbstoffe sind in zytochemischen Techniken sehr vielfältig und können nach mehreren Ansichten klassifiziert werden:

Nach dem Radikal, für das sie Affinität haben

Sie sind unterteilt in: Säuren, grundlegend oder neutral. Sie sind die einfachsten und am häufigsten verwendeten im Laufe der Geschichte und ermöglichen die Unterscheidung der basophilen Komponenten von Acidophilen. Beispiel: Hämatoxylin-Eosin-Färbung.

In diesem Fall sind die Zentren der Zellen blau gefärbt (sie nehmen die Hämatoxylin, die der Grundfarbstoff ist) und die roten Zytoplasmen (sie nehmen das Eosin, das die Säurefarbe ist).

Entsprechend der Farbe, die sie zur Verfügung stellen

Sie können orthochromatisch oder metakromatisch sein. Ortchromatisch sind diejenigen, die die Strukturen derselben Farbe wie der Farbstoff färben. Zum Beispiel der Fall von Eosina, dessen Farbe rot und Farbstoffe rot ist.

Metakromatisch färben Sie stattdessen die Strukturen einer anderen Farbe als ihre Farbe wie Toluidin, deren Farbe blau und dennoch Farbstoffviolett ist.

Vital oder supravitale Färbung

Sie sind harmlose Farben, das heißt, sie färben die Zellen und sie bleiben am Leben. Diese Farbstoffe werden als wichtig (z. B. das Blau von Tripán zu färben Makrophagen) oder suprital (zB Janus 'grün bis färben Mitochondrien oder das neutrale Rot, das Lysosomen färben).

- Lipiderkennung durch fettlösliche Farbstoffe

Osmium Tetroxid

Färbungslipide (nicht gesättigte Fettsäuren) schwarz. Diese Reaktion kann mit dem optischen Mikroskop beobachtet werden.

Sudan III

Ist einer der am häufigsten verwendeten. Dieser Farbstoff wird in den Geweben verteilt und lockisiert. Die Farbe ist scharlachrotrot.

Schwarzes Sudan Flecken B

Es erzeugt einen besseren Kontrast als die vorherigen, da es sich auch in Phospholipiden und Cholesterin auflösen kann. Es ist nützlich, um azurophile und spezifische Granulate aus reifen Granulozyten und ihren Vorläufern zu erkennen. Identifiziert daher myeloische Leukämien.

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- Tinion von Aldehyde (Schiffs Perchysäurefärbung)

Schiffers Periódinsäure -Färbung kann drei Arten von Dorfgruppen erkennen. Sie sind:

- Freie Aldehyde, natürlich im Gewebe vorhanden (plasmale Reaktion).

- Aldehyde, die durch selektive Oxidation (PAS -Reaktion) erzeugt werden, produziert.

- Aldehydos erzeugt durch selektive Hydrolyse (Faulgenreaktion).

PAS -Reaktion

Diese Färbung basiert auf der Erkennung bestimmter Arten von Kohlenhydraten wie Glykogen. Schiffs Periódinsäure bricht die C-C-Bindungen von Kohlenhydraten aufgrund der Oxidation von 1-2 glykolischen Gruppen, wobei Aldehydgruppen freigelassen werden.

Die freien Aldehydegruppen reagieren mit dem Schiff -Reagenz und bilden eine lila rote Verbindung. Das Erscheinungsbild einer lila roten Farbe zeigt eine positive Reaktion.

Dieser Test gibt positiv in Pflanzenzellen, indem sie Stärke, Cellulose, Hemicellulose und Peptine nachweisen. Während es in tierischen Zellen Mukine, Mukoproteine, Hyaluronsäure und Chitin nachweist.

Darüber hinaus ist es nützlich bei der Diagnose lymphoblastischer Leukämien oder Erythroleukämie, unter anderem Pathologien des myelodisplastischen Typs.

Bei sauren Kohlenhydraten kann das Bündel von Blue Alcián verwendet werden. Der Test ist positiv, wenn eine hellblaue/türkisfarbene Farbe beobachtet wird.

Plasmale Reaktion

Die plasmal. Diese Technik gilt für gefrorene histologische Schnitte. Es ist direkt mit dem Schiff -Reagenz.

Feregenreaktion

Diese Technik erkennt das Vorhandensein von DNA. Die Technik besteht darin, das Gewebe, das einer schwachen Säurehydrolyse fixiert ist.

Hydrolyseblätter exponierten die Aldehyde von Desoxyribose auf Höhe der Desoxyribose-Purin-Union. Dann reagiert das Schiff -Reagenzie mit den freien Aldehyden, die frei waren.

Diese Reaktion ist in den Kernen positiv und in den Zytoplasmen der Zellen negativ. Positivität wird durch das Vorhandensein einer roten Farbe belegt.

Wenn diese Technik mit dem Grün-Pyronin-Grün kombiniert wird, ist es möglich, DNA und RNA gleichzeitig nachzuweisen.

- Cytochimische Färbung für Proteinstrukturen

Dazu kann die Millon -Reaktion verwendet werden, die Quecksilbernitrat als Reagenz verwendet wird. Strukturen, die aromatische Aminosäuren enthalten, werden rot gefärbt.

- Zytochemische Färbung, die Substrate verwenden, um das Vorhandensein von Enzymen zu demonstrieren

Diese Färbung basiert auf der Inkubation der biologischen Probe mit einem bestimmten Substrat und das Reaktionsprodukt reagiert später mit diazoischen Salzen, um einen farbigen Komplex zu bilden.

Esterasas

Diese Enzyme sind in den Lysosomen einiger Blutzellen vorhanden und können organische Ester hydrolysieren, die Naftol freisetzen. Dieser letzte bildet einen unlöslichen Zucker, wenn es sich mit einem Dialyage -Salz verbindet und die Stelle färbt, an der die Reaktion auftritt.

Es gibt mehrere Substrate und je nachdem, welche verwendet werden können. Die ersten sind in den unreifen Zellen der myeloischen Reihe und in den Zellen des monozytischen Ursprungs vorhanden.

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Das zur Bestimmung spezifische Matten verwendete Substrat ist: Naftol-as-D Chloracetat. Während für die Bestimmung nichtspezifischer Matten mehrere Substrate wie das Acetat -Naftol, das Naphyl -APH -APH Acetat und das Butyrat -Naphylalpha kontrollieren.

In beiden Fällen werden die Zellen in intensiven Rot rot gefärbt, wenn die Reaktion positiv ist.

Myeloperoxidase

Dieses Enzym findet sich in den azurophilen Granulaten von Granulozyten- und Monozytenzellen.

Seine Erkennung wird verwendet, um Leukämie myeloischer Ursprung in Bezug auf Lymphoide zu unterscheiden. Zellen, die Myeloperoxidasen Colo aus Ockergelb enthalten.

Phosphatasen

Diese Enzyme füllen Phosphorsäuren aus verschiedenen Substraten frei. Sie unterscheiden.

Zu den bekanntesten gehören Phosphomonosterae, die einfache Ester hydrolysieren (P-O). Beispiel: alkalische Phosphatase und saure Phosphatase sowie Phosphamidasen, die die Gewerkschaften hydrolysieren (P-N). Diese werden verwendet, um lymphoproliferative Syndrome und zur Diagnose einer Tricholeukämie zu differenzieren.

- Trikromfarben

Mallary-Azan-Trichrom

Sie sind nützlich, um das Zytoplasma von den Zellfaserzellen zu differenzieren. Die Zellen sind rot gefärbt und die Kollagenfasern von Blau.

Massons Trichrom

Dies hat den gleichen Nutzen wie das vorherige, aber in diesem Fall sind die Zellen rot gefärbt und die Kollagenfasern von Grün.

- Farbstoff, der bestimmte Organellen färbt

Janus Green

Diese färbt sich selektiv Mitochondrien.

Silber- und Osminsäuresalze

Fleck auf den Golgi -Apparat.

Toluidinblau

Nissis Körper färben sich

Silber- und Pas -Salze

Retikuläre Fasern und Basalblattfleck.

Orcein und Fuchsin Resorcin

Färben Sie die elastischen Fasern. Mit dem ersten sind sie braun gefärbt und mit dem zweiten blauen oder intensiven Lila.

- Andere in der Cytochemie verwendete Techniken

Verwendung von fluoreszierenden oder fluorochromen Substanzen

Es gibt Techniken, die fluoreszierende Substanzen verwenden, um den Ort einer Struktur in einer Zelle zu untersuchen. Diese Reaktionen werden mit einem speziellen Mikroskop bezeichnet, der als Fluoreszenz bezeichnet wird. Beispiel: IFI -Technik (indirekte Immunfluoreszenz).

Nachweis von zellulären Komponenten durch Immunzytochemie

Diese Techniken sind in der Medizin sehr nützlich, da sie dazu beitragen, eine bestimmte Zellstruktur zu erkennen, und sie auch quantifiziert. Diese Reaktion basiert auf einer Antigen-Antikörper-Reaktion. Zum Beispiel: Elisas Techniken (Enzym -Immun -Aufsatz).

Empfehlungen

- Es ist erforderlich, Abstrichsteuerungen zu verwenden, um die ordnungsgemäße Funktion der Farbstoffe zu bewerten.

- Frischer Abstrich sollte verwendet werden, um zytochemischen Farben ausgesetzt zu werden. Wenn nicht möglich, müssen sie vor Licht geschützt und bei 4 ° C erhalten bleiben.

- Es sollte darauf geachtet werden, dass der verwendete Fixer die Untersuchung der Substanz nicht negativ beeinflusst. Das heißt, es sollte vermieden werden, dass es in der Lage ist, es zu extrahieren oder zu hemmen.

- Der Zeitpunkt der Verwendung der Fixiermittel muss respektiert werden.

Verweise

1. „Cytochymik." Wikipedia, freie Enzyklopädie. 30. Juni 2018, 17:34 UTC. 9. Juli 2019, 02:53 Uhr erhältlich unter: Wikipedia.Org
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