Neubauer Kamerageschichte, Eigenschaften, verwendet

Der Neubauer Kamera, Heatimeter oder Hechozytometer ist ein Laborinstrument, das aus einer speziellen Glasplakette besteht. Diese Kammer dient dazu, einige Zelltypen wie rote Blutkörperchen, weiße Blutkörperchen und Blutplättchen durchzuführen, obwohl sie zum Zählen von Sporen, Spermien, Parasiten usw. verwendet werden kann.

Es zeigt sehr eigenartige Eigenschaften, da es aus 3 Zonen besteht. Jede Kamera verfügt über zwei Zählbereiche oder Reticles, eine oben und eine unten.

Neubauer Kamera. Quelle: Santibadia [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lizenzen/by-sa/4.0)]]. Bearbeitetes Bild.

Diese haben mehrere Abteilungen in einer Gitterform. Die Zählbereiche sind die mittleren Kisten, die in den 4 Ecken beider Reticles sowie auf dem zentralen Quadrat enthalten sind.

Die Kamera -Montage sollte sehr sorgfältig durchgeführt werden, wie alle Details die Zellzahl beeinflussen. Es gibt viele Fehler, die gemacht werden können, aber wenn eine von ihnen auftritt, muss die Kamera zerlegt, sauber und reagiert werden. Unter den Hauptfehlern kann Folgendes erwähnt werden:

Rebosar die Kamera oder eine unzureichende Füllung vornehmen, die Kamera trocknen lassen, versuchen, überschüssige Flüssigkeit mit Gaze zu entfernen, die Kamera durch Transport zu neigen, eine schmutzige oder nasse Kamera zu füllen, die Verdünnung oder die Probe nicht gut zu mischen. Alle diese Fehler führen zu einem unwirklichen Wert.

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Geschichte

Neubauers Kamera ist ein Präzisionsinstrument, und im Herstellungsprozess durchläuft strenge Qualitätskontrolle. Es wurde für präzise Partikel oder Formen durch MM erstellt³, wie Zellen in verschiedenen Flüssigkeiten. Die empfindliche Grafik ist mit Diamantstift geschnitzt.

Eigenschaften der Neubauer -Kammer

Die komplette Kamera hat die Größe eines normalen Objektträgers, damit sie auf der Mikroskopplatte platziert werden kann.

Die Kamera besteht aus drei zentralen rechteckigen Oberflächen (a, b, c). In der Zone „B“ befindet sich die R- oder Zählzone, auch als Reticulum bezeichnet. Eine auf jeder Seite der Kamera, getrennt durch die "D" -Zone.

Grafikschema der Neubauer -Kamera. Quelle: Praktischer Hämatologiehandbuch. Bioanalyseschule der Universität Carabobo, Venezuela.

Jedes Retikulum ist ein polierter Bereich, der den Beitragsbereich enthält, der graviert ist. Es besteht aus einem Quadrat mit einer Fläche von 9 mm² Und es ist intern in 9 Bilder mit 1 mm unterteilt² Oberfläche. Die vier Ecken sind in 16 kleinere Netze unterteilt (0.0625 mm² Von Oberfläche).

Diese Gitter werden durch eine Reihe von Millimeter -Linien gebildet, die sich miteinander überschneiden, die perfekt grafischen Gitter darstellen und auf die angegebenen Maßnahmen abgegrenzt werden. Diese Linien wurden mit Diamantspitze aufgezeichnet.

Verbesserte Neubauer Reticulum. Quelle: Praktischer Hämatologieführer der Bioanalyseschule der Universität von Carabobo, Venezuela.

Die vier Seiten entsprechen dem Zählbereich. An diesen Seiten oder Ecken wird die Darstellung der meisten Zellen (rote Blutkörperchen und Leukozyten) durchgeführt, während Blutplättchen im zentralen Bereich gezählt werden.

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Die zentrale Zone hat mehr Spaltungen, sie besteht aus einem 1 mm Quadrat² unterteilt in 25 Gemälde mit einem Bereich von 0,04 mm² jede. Diese sind wiederum in 16 Gitter mit einer Fläche von 0,0025 mm unterteilt².

Beschreibung des verbesserten Neubauer Reticulum. a) Quadrat der Ecken, b) Zentralquadrat. Quelle: Praktischer Hämatologieführer der Bioanalyseschule der Universität von Carabobo, Venezuela.

Der Bereich „A“ und „C“ dient als Unterstützung, um ein spezielles Objektabdeckungsabdeckungen zu platzieren, das als hämatimetrische Lamellen- oder Hämatimeterabdeckungen bezeichnet wird.

Die Höhe zwischen der Lamellen und der Zählfläche beträgt 0,1 mm. Die Oberflächenmessungen der Zählkästen sowie die Höhe der Kamera und die Verdünnung der Probe sind erforderliche Daten, um die endgültigen Berechnungen durchzuführen.

Anwendungen

Es wird für die Zellzahl verwendet. Insbesondere ist es im Hämatologiebereich sehr hilfreich, da die 3 -Blut -Bluden -Serie hergestellt werden kann. das heißt, rote Blutkörperchen, weiße Blutkörperchen und Blutplättchen.

Es kann jedoch in anderen Bereichen verwendet werden, zum Beispiel, um Spermien, Sporen, Bakterien oder andere wichtige Elemente abhängig von der Art der Probe zu zählen.

Wie wird verwendet?

Probenvorbereitung

Um die Zellzahl durchzuführen, beginnt sie normalerweise mit einer früheren Verdünnung. Beispiel: Um weiße Blutkörperchen zu zählen, wird eine 1:20 -Verdünnung mit Turk -Flüssigkeit hergestellt. Die Verdünnung ist gut gemischt, bevor die Pipette geladen und die Neubauer -Kamera eingerichtet wird.

Es gibt Fälle, in denen eine 1:20 -Verdünnung nicht ausreicht, um zu zählen. Zum Beispiel bei Patienten, die an bestimmten Arten von chronischen Leukämien leiden. In diesen Fällen sollten höhere Verdünnungen als 1: 100 hergestellt werden.

Im Gegenteil, das Konto ist sehr niedrig, wie bei schweren Leukopenien können kleinere Verdünnungen gemacht werden, um die Probe zu konzentrieren. Beispiel: Sie können eine Verdünnung 1:10 durchführen.

Die Änderungen, die vorgenommen werden, beeinflussen die Berechnungen.

Versammlung der Neubauer -Kammer

Neubauers Kammer wird durch Platzieren der hämatimetrischen Lamellen in die zentrale Zone zusammengestellt. Beide müssen sehr sauber und trocken sein. Um die Lamellen zu platzieren, wird sie von den Kanten und fallen sanft auf die Kamera ab.

Dies wird gefüllt, indem die Spitze einer automatischen Pipetten- oder Thoma -Pipette in einem Winkel von 35 ° am Rand des Ladungsbereichs platziert wird. Die Flüssigkeit wird sanft entlassen und die Ladezone wird durch Kapillarität gefüllt. Dies geschieht auf beiden Seiten, um die beiden Reticles zu laden.

Es sollten keine Reticles nicht überlastet werden und Flüssigkeit sollte nicht abgelehnt werden. Die Last muss genau sein. Es ist wichtig, dass die Füllung homogen erfolgt, dh es sollte keine Blasen geben.

Sobald die Kamera 2 Minuten lang in Ruhe eingestellt ist, damit die Zellen im Hintergrund ausfallen, und ihre Visualisierung und Zählung ist einfacher.

Nach der Ruhezeit ist die Zeit am Licht des Lichtmikroskops zur Beobachtung montiert. Zuerst konzentriert es sich mit einem 10 -fachen Ziel und falls erforderlich, wird es an 40x übergeben.

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Um Ihre Visualisierung zu verbessern, wird das Mikroskoplicht verringert. Zu diesem Zweck wird der Kondensator abgesenkt und das Zwerchfell schließt ein wenig.

Konto

Für den Bericht der weißen Blutkörperchen oder Leukozyten muss die gesamte Oberfläche der vier mittleren Quadrate der Ecken und des zentralen Quadrats jedes Retikulums gezählt werden.

Die Anzahl beginnt am Quadrat der oberen linken Ecke. Es beginnt vom ersten Quadrat der ersten Reihe, dh von links nach rechts, um das gegenüberliegende Ende zu erreichen.

Dort wird es abgesenkt und der Look wird von rechts nach links zurückgegeben, bis es das andere Ende und so an den Zellen in jedem Raster in Form von Zickzack erreicht hat. Die 16 Gitter jedes mittleren Quadrats werden gezählt.

Um zu vermeiden, dass eine Zelle zweimal zählt. Die Zellen, die sich links und die oberen Linien befinden, werden gezählt und diejenigen, die sich rechts und unteren Linien befinden, werden ignoriert.

Ein manueller Zellzähler sollte verfügbar sein, damit der Bediener den Geräteschlüssel so oft wie Beobachtungszellen unterdrückt. Mit der Verwendung des Buchhalters kann der Bediener zählen, ohne dass sie aus dem mikroskopischen Feld nachschlagen müssen. Am Ende des Kontos werden Sie die Gesamtzahl der Zellen beobachten, die gezählt wurden.

Berechnungen

Für Berechnungen können Sie auf verschiedene Weise fortfahren. Sie können ein einzelnes Retikulum zählen oder beides kann gezählt werden und ein Durchschnitt von beiden. In diesen beiden Situationen müssen die gezählten Zellen mit einem Faktor multipliziert werden, was in diesem Fall 40 sein würde. Und so wird die Gesamtzahl pro mm erhalten³.

Wenn jedoch die beiden Reticles gezählt werden und es keinen Durchschnitt gibt, muss es mit einem anderen Faktor multipliziert werden, in diesem Fall um 20.

-Multiplikations-Faktor

Als nächstes wird der Multiplikationsfaktor berechnet.

Für die Berechnungen werden mehrere Daten berücksichtigt, einschließlich des Titels der Verdünnung, der Höhe der Kammer und der Oberfläche erzählt.

Verdünnung

Die verwendete Verdünnung, die auf Standard -Weise verwendet wird, ist 1:20 für die Leukozytenzahl.

Kammerhöhe

Die Höhe zwischen der Kamera und der hämatimetrischen Lamina beträgt 0,1 mm.

Gezählte Oberfläche

Wenn 5 Quadrate 1 mm gezählt werden² Oberfläche bedeutet, dass das Gesamtkonten der Anzahl 5 mm beträgt². Diese Daten müssen mit der Kamerahöhe multipliziert werden, um das erzählte Gesamtvolumen zu erhalten. Das heißt 5 mm² x 0,1 mm = 0,5 mm³.

Formeln und Berechnungen

Mit den Daten, die gesagt werden, heißt es:

Wenn bei 0,5 mm³ -Es gibt ° von Zellen gezählt

In 1 mm³ --Es wird - x Anzahl von Zellen geben

X -Zelle N ° = (n ° von Zellen kaliert x 1) /0,5 mm³

Aber auch die Verdünnung muss berücksichtigt werden. Daher lautet die Formel wie folgt:

(N ° der zählten Zellen x 1) x 20/0,5 mm³

Zusammenfassend können Sie schließlich die Anzahl der Zellen mit 40 multiplizieren. Somit wird der Wert von Leukozyten pro mm erhalten³.

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Wenn die beiden Retikel gezählt werden, werden die Datendaten geändert, so dass in diesem Fall 10 Quadrate, dh 10 mm². Und ein Gesamtvolumen von 1 mm3 erzählt. Die Formel würde bleiben:

(N ° der Zellen zählte x 1) x 20/1 mm³

In diesem Fall wäre der Multiplikationsfaktor daher 20 betragen.

Fehler

-Wenn die Kamera beim Laden der Flüssigkeit überschritten oder überschritten wird, variiert die Höhe der Kamera. Dies führt zur Zählung des Realen. Wenn Sie versuchen, überschüssig mit Gaze oder Baumwolle zu entfernen, stellt dies einen Karafalfehler dar. Diese Wirkung lässt die Zellen sich konzentrieren und die Anzahl erhöhen.

-Wenn es schlecht angeklagt ist, wird der Grafen unter dem Realen liegen.

-Für den Fall, dass die Kamera montiert und ausgelassen ist, ist es nicht mehr möglich, die Zählung zu erzeugen, da sie fehlerhafte Ergebnisse ausstrahlt.

-Wenn vor dem Laden der Kamera die Verdünnung der Probe nicht gut gemischt ist, besteht das Risiko eines Lesefehlers, da die Zellen nicht homogen verteilt sind. Daher wird es weniger oder größere Zellenkonzentrationen geben, abhängig davon, ob die Probe von der Flüssigkeitsoberfläche bzw. dem Boden des Rohrs entnommen wird.  

-Das Vorhandensein von Blasen verringert die Flüssigkeitsmenge, die in das Absehen eintreten muss, und stört die korrekte Visualisierung und Verteilung von Zellen. All dies beeinflusst die Ergebnisse erheblich.

-Heben Sie das Mikroskop während der Zählung erst an, bis jedes große Quadrat abgeschlossen ist, um sich zu vermeiden.

-Ein Fehler für Fehler besteht darin, die Kamera nach dem Montieren zu beugen. Daher sollten Sie die Mikroskopplatte sorgfältig hochladen.

Empfehlung

Wenn Sie aus irgendeinem Grund eine Anomalie bei der Einreichung der Kamera feststellen, wird am meisten empfohlen, diese Zubereitung zu zerlegen, die Kamera zu reinigen und von Grund auf neu zusammenzustellen.

Seien Sie sehr vorsichtig, wenn Sie die Kamera reinigen, um den Kratzer der Reticles zu vermeiden. Denken Sie andererseits daran, dass der hämatimetrische Lamel empfindlich und zerbrechlich ist. Eine unzureichende Manipulation kann sie brechen.

Stellen Sie vor dem Zählen sicher, dass die Zellen gut verteilt sind. Eine ungleiche Verteilung von Zellen erfolgt durch eine schlechte Mischung aus der Probe oder Verdünnung. In diesem Fall muss die Baugruppe wiederholt werden.

Eine Möglichkeit zu wissen, ob die Zellen gut verteilt sind.

-Wenn die weiße Blutkörperchen über 50 zählen.000 mm³ Es ist ratsam, das Konto zu wiederholen und eine größere Verdünnung zu machen.

-Wenn es die Verdünnung ändert, muss der Multiplikationsfaktor erneut berechnen, da dies die Formel beeinflusst.

Verweise

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