HPLC -Grundfundierung mit hoher Wirksamkeit Flüssigkeitschromatographie (HPLC), Geräte, Typen

Der Hocheffizienz Flüssigkeitschromatographie Es handelt sich um eine instrumentelle Technik, die in der chemischen Analyse verwendet wird, mit der sie ihre Komponenten trennen, reinigen und quantifizieren sowie andere Studien durchführen können. Es ist mit der von Englisch abgeleiteten HPLC -Abkürzung bekannt: Hochleistungsflüssigkeitschromatographie.

Wie der Name hervorhebt, funktioniert es, indem es Flüssigkeiten manipuliert. Diese bestehen aus einer Mischung aus dem Analyten oder der interessierenden Stichprobe und einer oder mehreren Lösungsmitteln, die als mobile Phase fungieren; Das heißt, das, das den Analyten durch das HPLC -Team und die Spalte zieht.

HPLC -Geräte. Quelle: DQWYY [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lizenzen/by-sa/4.0)]]

HPLC ist in zahlreichen Unternehmen von Qualitätsanalyselabors weit verbreitet. wie Apotheker und Lebensmittel. Der betreffende Analytiker muss die Probe, die mobile Phase, die Temperatur und andere Parameter überprüft und die Straßen innerhalb des Rades oder Karussells platzieren, damit die Ausrüstung die Injektionen automatisch durchführt.

HPLC -Geräte sind mit einem Computer gekoppelt, an dem die erzeugten Chromatogramme beobachtet werden können, sowie mit der Analyse, steuern Sie den Fluss der mobilen Phase, programmieren Sie die Art der Elution (isokratisch oder durch Gradient) und schalten Sie die Detektoren ein (UV) -Vis oder das Massenspektrophotometer).

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Basis

Im Gegensatz zur herkömmlichen Flüssigchromatographie wie Papier oder mit Gel Silica gefüllte Säule hängt HPLC nicht von der Schwerkraft ab, so dass die Flüssigkeit die stationäre Phase benimmt. Arbeiten Sie stattdessen mit Hochdruckpumpen, die die mobile oder eluente Phase durch die Säule mit größerer Intensität bewässern.

Auf diese Weise ist es nicht notwendig.

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Die Effizienz dieser Technik ist jedoch nicht ausschließlich auf dieses Detail zurückzuführen, sondern auch auf die winzigen Füllpartikel, aus denen die stationäre Phase besteht. Wenn kleiner ist, ist der Kontaktbereich mit der mobilen Phase größer, sodass sie in einem besseren Ausmaß mit dem Analyten und seinen Molekülen interagieren wird, wird mehr getrennt.

Diese beiden Eigenschaften sowie die Tatsache, dass die Technik die Detektorkopplung ermöglicht, machen HPLC viel höher als die feine oder Papierschichtchromatographie. Die Trennungen sind effizienter, die mobile Phase bewegt sich besser durch die stationäre Phase, und Chromatogramme ermöglichen es, einige Analysen in der Analyse nachzuweisen.

Ausrüstung

Vereinfachtes Diagramm des Betriebs einer HPLC -Ausrüstung. Quelle: Gabriel Bolívar.

Ein vereinfachtes Diagramm wird oben gezeigt, wie ein HPLC -Team funktioniert. Die Lösungsmittel befinden sich in ihren jeweiligen Behältern, die mit Schläuchen angeordnet sind, damit die Pumpe ein kleines Volumen in die Ausrüstung trägt. Wir haben die mobile Phase.

Die mobile oder eluente Phase muss zuerst abgenutzt sein, so dass die Blasen die Trennung der Analytmoleküle nicht beeinflussen, die mit der mobilen Phase gemischt werden, sobald die Ausrüstung die Injektionen gemacht hat.

Die chromatographische Säule befindet sich in einem Ofen, der es ermöglicht, die Temperatur zu regulieren. Daher gibt es für verschiedene Proben ausreichende Temperaturen, um Hochleistungsabtrennungen sowie einen breiten Katalog von Säulen und Art von Füllungen oder stationären Phasen für eine spezifische Analyse in spezifischer Analyse zu erreichen.

Die mobile Phase mit dem gelösten Analyten tritt in die Säule ein, und daraus werden zuerst die Moleküle, die sich weniger Affinität für die stationäre Phase "fühlen". Jedes Eluida -Molekül erzeugt ein im Chromatogramm sichtbares Signal, in dem die Retentionszeiten der getrennten Moleküle beobachtet werden.

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Andererseits endet die mobile Phase nach dem Durchlaufen des Detektors in einem Abfallbehälter.

HPLC -Typen

Es gibt viele Arten von HPLC, aber unter allen sind die herausragendsten die folgenden vier.

Normale Phasenchromatographie

Normale Phasenchromatographie bezieht sich darauf. Obwohl es als normal bezeichnet wird, ist es tatsächlich am wenigsten verwendet, da es die inverse Phase ist, die am weitesten verbreitete und effizienteste.

Inverse Phasenchromatographie

Als inverse Phase ist die stationäre Phase nun apolar und die polare mobile Phase. Dies ist besonders in der biochemischen Analyse nützlich, da sich viele Biomoleküle in Wasser und polaren Lösungsmitteln besser auflösen.

Ionenaustauschchromatographie

In dieser Art von Chromatographie bewegt sich der Analyte mit positiver oder negativer Belastung durch die Säule, die die Ionen ersetzt. Je größer die Last, desto größer ist ihre Aufbewahrung, so dass sie häufig verwendet wird, um Ionenübergangsmetalle zu trennen.

Molekulare Ausschlusschromatographie

Diese Chromatographie und nicht die Trennung ist für die Reinigung der resultierenden Mischung verantwortlich. Wie der Name schon sagt, wird der Analyte nicht mehr getrennt.

Die kleinsten Moleküle werden mehr zurückgehalten als große Moleküle, da letztere nicht zwischen den Poren der Polymerfüllungen der Säulen gefangen sind.

Anwendungen

HPLC ermöglicht sowohl eine qualitative als auch quantitative Analyse. In Bezug auf die Qualitative kann beim Vergleich der Retentionszeiten des Chromatogramms unter bestimmten Bedingungen das Vorhandensein einer bestimmten Verbindung nachgewiesen werden. Dieses Vorhandensein kann auf eine Krankheit, Verfälschung oder Drogenkonsum hinweisen.

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Daher ist es ein Team, das Teil der diagnostischen Labors ist. Ebenso liegt es innerhalb der Pharmaindustrie, da es ermöglicht, die Reinheit des Produkts sowie die Qualität derselben wie seine Auflösung in der Magenumgebung zu überprüfen. Die Ausgangsmaterialien unterwerfen sich auch bei HPLC, um sie zu reinigen und eine bessere Leistung in der Arzneimittelsynthese zu garantieren.

Mit HPLC können Sie komplexe Proteinmischungen, Aminosäuren, Kohlenhydrate, Lipide, Porphyrine, Terpenoide analysieren und trennen. Im Wesentlichen ist es eine hervorragende Option, mit Pflanzenextrakten zu arbeiten.

Und schließlich ermöglicht die molekulare Ausschlusschromatographie Sie, Polymere unterschiedlicher Größen auszuwählen, da einige möglicherweise kleiner oder groß sein können. Auf diese Weise werden Produkte mit niedrigen oder hohen durchschnittlichen Molekularmassen erhalten, was ein bestierender Faktor in ihren Eigenschaften und zukünftigen Anwendungen oder Synthese ist.

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