Bakterienabstrich Was ist, Eigenschaften und Vorbereitung

Er Bakterienabstrich Es handelt.

Die Erweiterung in Form eines Films wird durchgeführt, um die Mikroorganismen so weit wie möglich zu trennen, da die Beobachtung nicht klar ist, wenn die Beobachtung gruppiert ist.

In der Untersuchung von Bakterienpflanzen werden Abstrich-, Fixierungs- und Färbungstechniken verwendet, um sie besser zu analysieren. Aufgrund der geringen Größe von Mikroorganismen ist notwendigerweise die Verwendung eines optischen Mikroskops zur Beobachtung erforderlich.

Optische Mikroskope sind unverzichtbare Instrumente für die Beobachtung des Abstrichs. Diese verwenden optische Objektive und Licht, wodurch die Visualisierung von Proben mit großer Größe zunimmt.

Im Allgemeinen haben lebende Zellen keine wesentlich farbigen Strukturen, Ansichten des optischen Mikroskops sind farblose, transparente Proben und zeigen nur sehr wenig interne Kontrast und ihre Umgebung.

Die Beobachtung mit dem einfachen optischen Mikroskop des klaren Feld.

Für die optimale Beobachtung von Mikroorganismen ist es notwendig, ein Gleichgewicht zwischen dem Kontrast und der Auflösung zu erreichen. Die Details der Zellen können im Mikroskop auch bei hoher Auflösung nicht beobachtet werden. Die Verwendung von Farbstoffen durch Färbungstechniken ist erforderlich, die einen Kontrast zur Beobachtung beitragen.

Merkmale eines Bakterienstrichs von guter Qualität

Hervorragender Kontrast

Um einen hervorragenden Kontrast zu erreichen, werden hoch entwickelte Mikroskope genannt Phasenkontrastmikroskop, Differentialinterferenz und Dunkelfeldmikroskop. Diese Art von Mikroskop wird verwendet, um unter anderem bakterielle Strukturen wie Schoten und Filamente zu beobachten.

Färbung ist eine einfache Technik, um den Kontrast zu erhöhen, der mit einem klaren Feldmikroskop erreicht wird. In dieser Technik können verschiedene Farbstoffe verwendet werden, die die Mikroskopbeobachtung signifikant verbessern.

Die Färbung werden direkt auf den Abstrichen oder Erweiterungen der Microorganismus -Suspensionen auf den zuvor getrockneten und festen Folgen hergestellt.

Gut fixiert

Fixierung ist eine Technik, mit der zelluläre Strukturen erhalten bleiben. verursacht Inaktivierung von Mikroorganismen und Adhäsion am Glas des Rutschens. Es gibt verschiedene Fixierbehandlungen: Wärmefixierung und chemische Fixierung.

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Wärmefixierung

Dies ist die am häufigsten verwendete Methode bei der Beobachtung von Bakterienabstrich. Die Technik besteht darin, die Abstrichbakteriensuspension durch die Flamme eines Feuerzeugs zu übergeben. Diese Technik kann die externe Morphologie von Bakterien bewahren, zerstört aber ihre inneren Strukturen.

Chemische Fixierung

Chemische Fixierung verwendet chemische Substanzen bei der Konservierung wie Formaldehyd oder Formalin, Ethanol und Essigsäure unter anderem. Der Vorteil der Verwendung des Fixierens chemischer Mittel besteht darin, dass die Erhaltung der internen zellulären Strukturen von Mikroorganismen erreicht wird.

Blutabstrich. Quelle: Bobjgalindo [GFDL (http: // www.Gnu.Org/copyleft/fdl.HTML) oder CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lizenzen/by-sa/4.0)] aus Wikimedia Commons

Gute Färbung

Die häufigsten Verfahren zur Durchführung der Färbung eines zuvor Trocknings und eines festen Abstrichs sind die positive oder einfache Färbung, die Differentialfärbung und die negative Färbung. Es gibt auch spezielle Techniken zur Färbung bestimmter Zellstrukturen (Kapsel, Sporen, Flagella).

Positive Färbung oder einfache Färbung

Die positive oder einfache Färbung ist die am häufigsten verwendete Abstrichfärbungstechnik. Verwenden Sie Farbstoffe, die in der Lage sind, bestimmte mikrobielle Strukturen zu verbinden, und ermöglicht es ihnen, sie am Mikroskop zu beobachten.

Diese Farbstoffe haben chromophorische Gruppen (farbiger Teil) in ihrer chemischen Struktur mit alternativen Doppelbindungen und einfachen Bindungen (Konjugation). Diese Verbindungen können wiederum ionische oder kovalente Bindungen mit einigen zellulären Strukturen herstellen.

Die Farbstoffe, die in der positiven oder einfachen Färbung verwendet werden Anilin (farbige organische Salze).

Andererseits finden wir unter den Farbstoffen einige mit Basic -pH und andere mit Säure -pH.

Grundfarbstoffe

In den grundlegenden Farbstoffen hat die Chromophor -Gruppe eine positive elektrische Ladung. Die überwiegende Mehrheit der prokaryotischen Mikroorganismen hat einen internen neutralen pH -Wert, und ihre Zelloberfläche hat eine negative Belastung. Durch diese elektrostatische Wechselwirkung bindet Chromophor an Zelle und Farbstoff.

Beispiele für grundlegende Farbstoffe sind Methylenblau, violettes Glas, Malachitgrün, Grundsicherung, Safranin unter anderem.

Säurefarbstoffe

In sauren Farbstoffen hat die Chromophor -Gruppe eine negative elektrische Ladung. Diese werden für die Proteinfärbung mit positiven Ladungsgruppen verwendet. Beispiele für Säurefarbstoffe sind saure Sicherung, bengalische Rose, Kongo -Rot und Eosin.

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Differentialfärbung

Die Differentialfärbungstechnik besteht darin, zwei Farbstoffe unterschiedlicher Farbe oder Intensität anzuwenden, um das Mikroskopmikroskop zu unterscheiden. Gramfärbung und Säure-Alkohol-Resistenzfärbung sind die am häufigsten verwendete Differentialfärbung in der Bakteriologie.

Die Färbung von Gram wird als vorläufiger Test verwendet, um die Form, Größe und Zellgruppe zusätzlich zur Art der Zellwand zu kennen. Durch Gram -Färbungstest werden Zellwandbakterien als gram positive Bakterien und gramnegative Bakterien eingestuft.

Negative Färbung

In dieser Technik werden chemische Farbstoffe verwendet, die nicht in zelluläres Innenraum eindringen, sondern das Medium, in dem die Mikroorganismen als schwarzer Hintergrund erscheint.

In der negativen Färbungstechnik wird der Abstrich mit einem Tropfen chinesischer oder Nigrosin -Tintensuspension hergestellt, der nach dem Trocknen bei Raumtemperatur einen undurchsichtigen Film für den Durchgang des Lichts bildet. Auf diese Weise werden Mikroorganismen als helle Formen auf einem dunklen Hintergrund beobachtet.

Vorbereitung

ZU. Abstrich

1.- Waschen Sie die Objektträger sehr gut, trocken mit saugfähigem Papier und kennzeichnen Sie sie. Das Etikett muss den Inhalt der Vorbereitung, des Datums und des Namens derer angeben, die sie verarbeitet haben.

2.- Zünden Sie den leichteren und sterilisieren Sie den Impfgrenze in der Flamme zu Rot lebendig.

3.- Lassen Sie den Griff.

4.- Nehmen Sie das bakterielle Ernterohr, entfernen Sie die Kappe und geben Sie schnell die Mündung des Rohrs in der Nähe der helleren Flamme (Flamme).

5.- Betreten Sie den Inokulationsgriff in das Röhrchen, das die Bakterienkultur enthält, und nehmen Sie die Probe.

6.- Wenn sich die Ernte in Flüssigkeit befindet, legen Sie die Probe mit dem Griff in der Mitte des Objekttrans.

7.- Sterilisieren Sie den Inokulationsgriff.

8.- Lassen Sie das Trocknen des Abstrichs in der Luft.

9.- Wiederholen Sie die Schritte dreimal von 3 bis 8.

10.- Wenn die Ernte fest ist. Dies wird durchgeführt, um eine kleine Probe der mit dem Impfgrenze eingenommenen Ernte gemäß den Angaben der Schritte 2 bis 5 (ASEPSIS -Bedingungen) zu mischen.

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elf.- Erweitern Sie die mit dem Wasserabfall verdünnte Probe auf dem Objektträger und wiederholen Sie dreimal.

B. Fixierung

1.- Zu den trockenen Abstrichlehrern in flüssigen Medium -zwei Tropfen Methanol oder absolutem Ethanol hinzufügen.

2.- Lassen Sie die Luft trocknen, die vom Feuerzeug abtrocknet werden.

3.- Wenn der Abstrich von einer festen Kultur stammt, wird der feste trockene Geruch mit Hitze hergestellt und 2- bis 3 -mal schnell vorbeifahren.

4.- Berühren Sie den Boden des Abstrichs mit dem dorsalen Teil der linken Hand (für rechtsgehandelte; ansonsten verwenden Sie die rechte Hand) und überprüfen Sie, ob es kalt ist.

C. Einfache Färbung

1.- Zu den Abstrichen 2 Tropfen des ausgewählten Farbstoffs hinzugefügt und für die Zeit, die in den spezifischen Protokollen jedes Farbstoffs erforderlich ist (normalerweise zwischen 1 und 5 Minuten), handeln lassen (normalerweise zwischen 1 und 5 Minuten).

2.- Einige Farbstoffe benötigen für die Aktivierung einen Wärmeverbrauch. In diesem Fall müssen Sie beim Erhitzen des Gepäcks in der Flamme des Feuerzeugs sehr vorsichtig sein (manipulieren Sie es mit Pinzetten und Vermeidung von Kochen). Eine Überhitzung des Abstrichs kann die gewünschten Zellen zerstören.

3.- Entfernen Sie das überschüssige Farbstoffwaschen mit destilliertem Wasser aus einem Bild. Beseitigen Sie Waschwasser und schlägt sanft auf die Folie für sein Lied, die auf dem Arbeitstisch geneigt ist.

4.- Lufttrocknung erlauben.

5.- Abhängig von der Art der Beobachtung wird in dieser Phase eine Abdeckung verwendet oder nicht. Die Abdeckung und bewahrt den Abstrich. Wenn zu diesem Zeitpunkt eine Öltauchung beobachtet wird, wird der Abstrich nicht verwendet, der Abstrich kann nicht erhalten werden.

D. Endgültige Erhaltung des Abstrichs

1.- Tauchen Sie den Abstrich nacheinander in jeder der unten angegebenen Lösungen mindestens 5 Minuten. Der Zweck dieser "Badezimmer" ist es, den Abstrich vollständig dehydriert zu lassen. Jedes Reagenz muss gut abgelassen werden, bevor er den Abstrich im folgenden Badezimmer betritt.

Die Reihenfolge der dehydrierenden Bäder ist wie folgt:

1. 70 % Ethanol
2. 95 % Ethanol
3. Reines Aceton
4. Acetonmischung -xilol 1: 1
5. Xilol

Dann leisten Sie die Lufttrocknung.

2.- Montieren Sie die Abdeckungen, vorzugsweise 22 × 22 mm, unter Verwendung von Kanada -Balsam oder anderen Mitteln für die Montage.

Verweise

1. Cappucino, j.G. und Welch, c.T. (2017). Mikrobiologie: ein manuelles Labor. Pearson.
2. Holt, j.G. Editor. (1977). Das kürzere Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. 8^th Baltimore: Die Williams und Wilkins Co.