Histochemistry Foundation, Verarbeitung, Färbung

Der Histochemie Es ist ein sehr nützliches Instrument für die Untersuchung der Morphologie verschiedener biologischer Gewebe (Gemüse und Tiere) aufgrund seines Reaktionsprinzips von Gewebekomponenten wie Kohlenhydraten, Lipiden und Proteinen, unter anderem, mit Farbsubstanzen Farben.

Dieses wertvolle Werkzeug ermöglicht es nicht nur, die Zusammensetzung und Struktur der Gewebe und Zellen zu identifizieren, sondern auch die verschiedenen Reaktionen, die in diesen auftreten. Ebenso mögliche Gewebeschäden, verursacht durch das Vorhandensein von Mikroorganismen oder anderen Pathologien.

Histochemische Färbung. Nilvirus, Gram -positives und gram negativer Bakterien (Gram), Histoplasma capsulatum (Grocott), Mycobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Quelle: Pixinio.com/wikipedia.Org/Nephron [CC BY-SA 3.0 (https: // creativecommons.Org/lizenzen/by-sa/3.0)]/CDC/DR. George p. Kubica [Public Domain]

Die Histochemie hat, da vergangene Jahrhunderte wichtige Beiträge geliefert hat, z. Dies war aufgrund der Tatsache möglich, dass das von Ehrlich verwendete Gehirn des Experimentiertiers nicht mit Anilin färbte, was ein Grundfarbstoff ist.

Dies führte zur Verwendung verschiedener Farbstoffe wie Methylen und Indophenolblau, um die verschiedenen Arten von Zellen zu färben. Dieser Befund führte zur Klassifizierung von Zellen in Acidophilen, Basophilen und Neutrophilen gemäß ihrer spezifischen Färbung.

Jüngste Studien haben diese Technik angewendet, um das Vorhandensein verschiedener Verbindungen, einschließlich Phenole, sowie Kohlenhydrate und nichtstrukturelle Lipide bei den Spezies zu demonstrieren Litsea Glaucescens, Am bekanntesten als Laurel. Sein diese sowohl im Blatt als auch im Holz.

Ebenso identifizierte Colares et al., 2016 die Pflanze für medizinische Interessen Tarenaya Hassleriana, durch histochemische Techniken. Bei dieser Spezies wurde das Vorhandensein von Stärke, Mirosina sowie phenolischen und lipophilen Verbindungen gezeigt.

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Basis

Die Histochemie basiert auf der Färbung von zellulären Strukturen oder Molekülen, die in den Geweben vorhanden sind, dank ihrer Affinität zu bestimmten Farbstoffen. Die Farbreaktion dieser Strukturen oder Moleküle in ihrem ursprünglichen Format wird anschließend im optischen Mikroskop oder im elektronischen Mikroskop visualisiert.

Die Spezifität der Färbung ist auf das Vorhandensein von Ionenannahmegruppen in den Zellen oder Gewebemolekülen zurückzuführen.

Schließlich besteht das Ziel histochemischer Reaktionen darin, durch Färbung nachweisen zu können. Von den größten biologischen Strukturen bis zu den kleinsten Geweben und Zellen. Dies kann aufgrund der Tatsache erreicht werden, dass die Farbstoffe chemisch mit den Molekülen der Gewebe, Zellen oder Organellen reagieren.

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Strafverfolgung

Die histochemische Reaktion könnte zu Schritten vor der Verwirklichung der Technik wie der Fixierung, Einbeziehung und Schneiden des Gewebes führen. Daher sollte berücksichtigt werden.

Trotzdem ist die vorherige Fixierung des richtigen Gewebes wichtig, da sie Autolyse oder Zellzerstörung verhindert. Dafür.

Die Einbeziehung des Gewebes erfolgt so, dass es beim Schneiden seine Festigkeit aufrechterhält und verhindert, dass es deformiert wird. Schließlich erfolgt der Schnitt mit einem Mikrotom für die Untersuchung von Proben durch optische Mikroskopie.

Vor der Durchführung einer histochemischen Färbung wird außerdem empfohlen, externe oder interne positive Kontrollen in jede Testanhänger in Einklang zu bringen. Sowie die Verwendung bestimmter Farbstoffe für Strukturen zu studieren.

Histochemische Färbung

Von der Entstehung histochemischer Techniken bis zur Gegenwart wurde eine breite Palette von Farbstoffen verwendet, darunter die häufigste Verwendung wie: Schiff (PAS), Grocott, Ziehl-Neelsen und Gramm.

Ebenso wurden andere Farbstoffe weniger häufig verwendet, wie z. B. chinesische Tinte, Orcein oder Massons Trichromfärbung.

Schiffes Periódinsäure (PAS)

Mit dieser Färbung sehen Sie Moleküle mit hohem Kohlenhydratgehalt wie: Glykogen und Mucin. Es ist jedoch auch nützlich für die Identifizierung von Mikroorganismen wie Pilzen und Parasiten. Zusätzlich zu bestimmten Strukturen (Basalmembran) in der Haut und in anderen Geweben.

Das Fundament dieser Färbung ist, dass die Farbton -Oxida die Kohlenstoffbindungen zwischen zwei nahe gelegenen Hydroxilgruppen vorhanden sind. Dies erzeugt die Freisetzung der Aldehydgruppe, und dies wird durch das Schiff -Reagenz der Schiff festgestellt, wobei sie eine lila Farbe werfen.

Das Schiff -Reagenz besteht aus Basisfuchsin, Natriummetabisulfit und Salzsäure, wobei diese Komponenten für die lila Farbgebung verantwortlich sind, wenn die Aldehydgruppen vorhanden sind. Ansonsten wird eine farblose Säure erzeugt.

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Die Färbungsintensität hängt von der Menge der in den Monosacchariden vorhandenen Hydroxilli -Gruppen ab. Zum Beispiel in Pilzen, Basalmembranen, Mucinas und Glykogen, die die Farbe von rot nach lila verlaufen kann, während die Kerne blau gefärbt sind.

Grocott

Es ist eine der Färbung, die die größte Empfindlichkeit bei der Identifizierung von Pilzen in in Paraffin enthaltenen Geweben darstellt. Dies ermöglicht die Identifizierung der verschiedenen Pilzstrukturen: Hyphen, Sporen, Endosporen unter anderem. Daher wird es als routinemäßige Färbung für die Mykose -Diagnose angesehen.

Insbesondere wird es bei der Diagnose einer pulmonalen Mykose wie Pneumocystose und Aspergilose verwendet, die durch einige Genres -Pilze verursacht werden Pneumocystis Und Aspergillus, bzw.

Diese Lösung enthält Silber- und Chromsäure -Nitrat, wobei letztere ein Fixiermittel und Farbstoff sind. Das Fundament ist, dass diese Säure die Oxidation der Hydroxils gegenüber Aldehydos durch die in den ausgewählten Strukturen vorhandenen Mucopolys erzeugt, beispielsweise in der Zellwand der Pilze.

Schließlich wird das in der Lösung vorhandene Silber von den Aldehyden oxidiert, was zu einer schwarzen Färbung führt, die als Argentafin -Reaktion bezeichnet wird. Sie können auch Kontrastfarbstoffe wie hellgrün und damit Pilzstrukturen in Schwarz mit hellgrünem Hintergrund beobachten.

Ziehl-Neelsen

Diese Färbung basiert auf dem Vorhandensein von Säure-Alkohol-Resistenz teilweise oder insgesamt in einigen Mikroorganismen wie Genres Nokardie, Legionellen und Mykobakterium.

Die Verwendung dieser Färbung wird empfohlen, da die Zellwand der zuvor zitierten Mikroorganismen komplexe Lipide enthält, die das Eindringen von Farben behindern. Vor allem in Atemwegsproben.

Es werden starke Farbstoffe wie Fenicade Fuchsin (Basisfarbstoff) verwendet und Wärme werden so angewendet, dass der Mikroorganismus den Farbstoff behalten und nicht mit Säuren und Alkoholen verfärbt. Schließlich wird eine Methylenblau -Lösung angewendet, um die verfärbten Strukturen zu färben.

Das Vorhandensein von Säurealkoholresistenz wird in roten Strukturen beobachtet, während Strukturen, die nicht der Verfärbung widerstehen, blau gefärbt sind.

Gramm und chinesische Tinte

Gram ist eine sehr nützliche Färbung bei der Diagnose von Bakterien- und Pilzinfektionen unter anderem. Diese Färbung ermöglicht es, zwischen den gram positiven Mikroorganismen des negativen Gramms zu unterscheiden, was deutlich die Unterschiede zeigt, die in der Zusammensetzung der Zellwand bestehen.

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Während chinesische Tinte eine Färbung ist, die verwendet wird, um die Strukturen zu kontrastieren, die Polysaccharide enthalten (Kapsel). Dies liegt daran, dass ein Ring in der Umgebung bildet und in der möglich ist Cryptococcus Neoformans.

Orcein

Mit dieser Färbung sind elastische Fasern und Chromosomen verschiedener Zellen gefärbt, was die Bewertung des Reifungsprozesses des letzteren ermöglicht. Aus diesem Grund war es in zytogenetischen Studien sehr nützlich.

Dies basiert auf der Sammlung des Farbstoffs durch die negative Belastung von Molekülen wie DNA, die in den Zentren der Vielzahl von Zellen vorhanden sind. Diese sind also blau bis dunkel violett gefärbt.

Massons Trichrom

Diese Färbung wird zur Identifizierung einiger Mikroorganismen oder Materialien verwendet, die mellatische Pigmente enthalten. Dies ist der Fall von Mykose, die durch Dematiac Pilz, Ugohifomicose und bei schwarzem Getreide -Eumicetom verursacht wird.

Schlussbetrachtungen

In den letzten Jahren gab es viele Fortschritte bei der Schaffung neuer diagnostischer Techniken, bei denen die Histochemie beteiligt ist, aber mit anderen Grundlagen oder Prinzipien verbunden ist. Diese Techniken verfolgen einen anderen Zweck, wie dies bei Immunhistochemie oder Enzymohistochemie der Fall ist.

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