Die Hälfte meines Was ist das Fundament, die Vorbereitung, verwendet

Er Meine Hälfte Es ist ein biochemischer Test, der verwendet wird, um die Identifizierung von Bakterienarten zur Enterobacteriace -Familie zu erleichtern. Es ist ziemlich nahrhaft und besteht aus Glukose, Hefeextrakt, Pepton, Triptein, L -Dornitinhydrochlorid, Bromocresh und Agarpurpur.

Die Bedeutung seines Akronyms (Mine) beschreibt jeden der Parameter, die in diesem Medium beobachtet werden können. Motilität, Indol und Ornitin. Motilität ist die Fähigkeit des Mikroorganismus, sich um das Vorhandensein von Flagella zu bewegen. Damit diese Eigenschaft beobachtet werden kann, muss die Konsistenz des Mediums halbsolid sein.

Interpretationsschema der Ergebnisse in der mittleren Mine. Quelle: Vorbereitet vom Autor MSC. Marielsa Gil

Die Indol -Produktion zeigt das Vorhandensein der Enzym -Triptofanasa, die auf die Tryptophan -Aminosäure wirkt und für ein aufschlussreiches Reagenz erforderlich ist, um die Produktion von Indol sichtbar zu machen.

Schließlich bestimmt Ornithin, ob die Bakterien in der Lage sind, Decarboxillary.

Basis

Pepton, Hefeextrakt und Triptein

Diese Elemente tragen zur Ernährungskraft dieses Mediums bei. Sie dienen als Quelle für essentielle Nährstoffe und Aminosäuren für die bakterielle Entwicklung.

Darüber hinaus ist Triptein eine Quelle von Tryptophan, um das Vorhandensein des Enzyms Triptofanasa zu demonstrieren, das den fälligen Tryptophan verschlechtert.

Das Indol ist farblos, daher wird seine Anwesenheit durch Zugabe von fünf Tropfen des Ehrlich- oder Kovacs-Reagens gezeigt, beide mit P-Dimethylaminobenzaldehyd.

Die Aldehydgruppe dieser Verbindung reagiert mit dem Indol und erzeugt ein rotes Fuchsie -Produkt auf der Oberfläche des Agars.

Jeglicher Farbton sollte als positiver Test betrachtet werden. Der Test muss sofort gelesen werden, da sich die Farbe verschlechtert.

Andererseits muss dieser Test aufgedeckt werden.

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Deutung

Positiver Test: Bildung eines rot.

Negativer Test: Es gibt keine Ringbildung.

Motilität

Die Bakterienkapazität des Umzugs wird ein Beweis sein.

Ein negativer Motilitätstest wird durch Beobachtung einer dünnen Wachstumslinie belegt, und alles, was in der Nähe ist, wird ohne Wachstum sein.

Es ist wichtig, dass die Motilität vor der Enthüllung gelesen wird.

In mobilen Bakterien, aber mit langsamem Wachstum ist es schwierig, seine Motilität mit diesem Medium zu demonstrieren. In diesem Fall wird empfohlen, andere Tests oder Methoden wie die mittlere Motilität oder die ausstehende Tropfenmethode zu verwenden.

Glucose

Glucose ist fermentierbar.

Glukosefermentation sollte immer auftreten, basierend auf dem Prinzip, dass alle Bakterien zur Familie Enterobacteriaceae die Glukose fermentieren.

L -dornitin

Für den Fall, dass die Bakterien die Enzym -Ornitin -Decarboxylase produzieren, kann sie wirken, sobald das Medium durch Glukosefermentation gesäuert wurde.

Das Enzym -Ornithin -Decarboxylase wirkt auf die Carboxylgruppe der Aminosäure, die ein Amin namens Putresina produziert.

Dieser Test sollte nach 24 Stunden Inkubation gelesen werden, denn wenn Sie versuchen zu lesen.

Denken Sie daran, dass die erste Reaktion, die auftritt, die Fermentation von Glukose ist, so dass das Medium in einer Anfangsphase gelb wird (erste 10 bis 12 Stunden) gelb gelb (erste 10 bis 12 Stunden) gelb gelb gelb. Wenn die Decarboxylierung des Ornithin später auftritt, wird das Medium lila.

Es ist wichtig, den Decarboxylierungstest des Ornithin zu interpretieren, bevor das Indol enthüllt, da das Aggregat des Kovacs -Reagens die Farbe des Mediums modifiziert.

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Deutung

Negativer Test: Gelb oder gelbes Medium.

Positiver Test: Völlig lila Hälfte.

PH -Indikator

In diesem Fall wird Bromocresol lila verwendet; Die Person, die für die Enthüllung verantwortlich ist, wenn sich in der Mitte eine pH -PH -Änderung gibt. Durch die Säulenung wird der Indikator gelb, und wenn Alkalinäre lila werden.

Gesät und enthüllte Technik

Um das Medium von mir zu säen, wird eine gerade oder Nadel verwendet und ein Teil der Kolonie zum Untersuchung wird damit gesammelt.

In meiner Mitte wird eine tiefe Punktion in einer geraden Linie gemacht. Es ist nicht ratsam.

24 bis 48 Stunden bei 37 ° C bei Aerobiose inkubieren. Beobachten Sie die Ergebnisse in dieser Reihenfolge: Motilität, Decarboxylierung des Ornithin und enthüllen Sie schließlich das Indol.

Es ist ratsam, 2 ml zum Medium zu bringen, es in ein steriles Rohr zu übertragen und den Indol -Test dort durchzuführen. Wenn es also negativ ist, kann der Rest des ursprünglichen Rohrs 24 Stunden mehr inkubiert werden, um das Indol erneut zu enthüllen.

Die Entwicklung des Indols erfolgt wie folgt: 3 bis 5 Tropfen des Kovacs -Reagenz. Es wird beobachtet, ob ein rotes Fuchsia -roter Ring erscheint oder nicht.

Vorbereitung

Meine Hälfte

Wiegen Sie 31 Gr meiner Umwelt und lösen Sie sich in einem Liter destilliertem Wasser auf.

Erwärmen Sie, bis die Mischung eine Minute kocht und häufig rührt, bis Sie den Agar vollständig auflösen. 4 ml des Mediums in 13/100 Reagenzglas mit Baumwolldeckel verteilen.

15 Minuten bei 121 ° C in Autoklave sterilisieren. Aus dem Autoklav nehmen und schockiert gerade stehen lassen, damit sich ein halbsolides Taco gebildet hat.

In einem 2-8 ° C-Kühlschrank aufbewahren. Lassen Sie ein Temperament, bevor Sie den Bakterienstamm säen.

Die Farbe des dehydrierten Mediums ist beige und die des Medium.

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Der endgültige pH des vorbereiteten Mediums beträgt 6,5 ± 0.2

Das Medium wird mit saurem pH -Wert gelb und ist lila bis alkalischer pH.

Kovacs reaktiv (Indol -Testentwickler)

Dieses Reagenz wird wie folgt hergestellt:

150 ml Amyl, Isoamyl oder Butylalkohol werden gemessen (eine der drei). 10 g p-dimethylaminobenzaldehyd löst sich darin auf. Anschließend werden 50 ml konzentrierter Salzsäure langsam zugegeben.

Das vorbereitete Reagenz ist farblos oder klar gelb. Es muss in bernsteinfarbener Flasche gelagert und im Kühlschrank aufbewahrt werden. Eine dunkelbraune Farbe zeigt ihre Verschlechterung.

Auch das Kovacs -Reagenz kann durch das Ehrlich -Reagenz ersetzt werden. Letzteres, weil es empfindlicher ist, wird es vorgezogen, das Indol in Bakterien aufzudecken, das es in minimalen Mengen produziert, wie bei einigen nicht -fermentierenden negativen Bacilli und bestimmten Anaerobes.

Verwenden

Dieses Medium ist ein Test, der eine Batterie biochemischer Tests zur Identifizierung der Bakterien der Enterobacteriace -Familie ergänzt.

Die Decarboxylierungsdaten des Ornithin dienen zur Unterscheidung Shigella Sonnei, das gibt positiv, von Shigella boydii, shigella flexneri und s. Dysenterieae, Sie geben negativ.

Es unterscheidet auch die Gattung Klebsiella, die negativ der Enterobacter -Gattung ergibt, wo die meisten ihrer Spezies positiv sind.

Quelle: Koneman E, Allen S., Janda W., Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologische Diagnose. 5. ed. Pan -American Editorial s.ZU. Argentinien.

QA

Jedes Mal, wenn eine Hälfte von mir vorbereitet ist, kann ein Kontrolltest durchgeführt werden. Zu diesem Zweck werden bekannte oder zertifizierte Stämme verwendet, um das Verhalten des Mediums zu beobachten.

Die Stämme, die verwendet werden können, sind Escherichia coli, Morganella Morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter Aerogenes Und Proteus mirabilis.

Die erwarteten Ergebnisse sind UND. coli und m. Morganii. Dan M: +, i: + und o: +.

Klebsiella pneumoniae Gib alles negativ (m:-, i:-, o :-). Proteus mirabilis Und Enterobacter aerogenes Dan M:+ i:- und o: +.

Verweise

1. Mac Faddin J. (2003). Biochemische Tests zur Identifizierung klinischer Bedeutung Bakterien. 3. Aufl. Pan -American Editorial. Buenos Aires. Argentinien.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologische Diagnose von Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial s.ZU. Argentinien.