Coagulase Test Foundation, Verfahren und verwendet

Der Koagulase -Test Es ist eine Labortechnik, mit der das Vorhandensein des Koagulase -Enzyms hervorgehoben wird. Dieses Enzym hat die Eigenschaft des Koagulationsplasmas. Loeb im Jahr 1903 war der erste, der dieses Enzym beschrieb.

Dieser Test wird zu gram positiven Kokosnüssen und einer positiven Katalase durchgeführt, die die Stämme von ermöglicht Staphylococcus aureus vom Rest des Staphylokokkens, da er der einzige Mikroorganismus von klinischer Bedeutung ist, der es produziert.

Beide Bilder zeigen einen positiven Koagulase -Test. Quelle: Linksbild: Philippinjl [CC BY-SA 3.0 (http: // creativecommons.Org/lizenzen/by-sa/3.0/]]. Rechts Bild: Foto des Autors MSC aufgenommen. Marielsa Gil.

In diesem Sinne werden die Mitglieder der Staphylococaee -Familie, die diesen negativen Test geben.

Es gibt einige andere Stämme als S. aureus  das kann Koagulase erzeugen, wie z Staphylococcus schleiferi spp Coagulans, s. Hyicus, s. Intermedius und s. Delphini.

Die ersten drei sind jedoch auf der tierärztlichen Ebene von klinischer Bedeutung und können selten als kausales Mittel menschlicher Infektionen gefunden werden S. Delphini Es ist nur in Meeresumgebungen zu finden.

Außerdem unterscheiden sie sich leicht, weil S. Hyicus Und S. Vergleich Sie fermentieren das Mannit nicht und nicht S. Schleiferi spp coagulans Fermentiert weder die Maltose noch die Trehalosa S. aureus Ja, fermentieren Sie diese Kohlenhydrate.

Das Vorhandensein des Koagulase -Enzyms wurde mit der Virulenz von Stämmen verbunden.  Diese Theorie ist jedoch angesichts der Tatsache gefallen, dass andere virulente negative Koagulasespezies beobachtet werden, die in der Lage sind, wichtige Infektionen zu erzeugen.

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Basis

Staphylococcus aureus Es erzeugt zwei Arten von Koagulas. Deshalb werden sie als United Coagulase und freie Koagulase bezeichnet.

Das Coagulase -Enzym verdankt seinen Namen der von ihm erzeugten Aktion. Dies hat die Fähigkeit, Fibrinogen in Fibrin umzuwandeln und ein offensichtliches Gerinnsel zu erzeugen, wenn es sich in Plasma befindet, dh dieses Enzym simuliert die Thrombinaktivität des Gerinnungswasserfalls.

Tatsächlich ist eine der am meisten akzeptierten Theorien, dass die United Coagulase mit freier Koagulase reagiert, um Gerinnungsfaktoren zu aktivieren. Diese Aktivierung erzeugt eine Substanz, die ähnlich wie Prothrombin wirkt und eine Verbindung mit Thrombinfunktion erzeugt.

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Der Unterschied zum normalen Gerinnungswasserfall besteht darin, dass diese Reaktion nicht das Vorhandensein von Kalzium benötigt und nicht von Heparin beeinflusst wird.

Um den Coagulase -Test durchzuführen, reicht es aus, sich einer frischen Staphylococcus -Ernte mit einem vorzugsweise Kaninchenplasma zu stellen und somit die Bildung oder nicht des Gerinnsels zu beobachten.

Es gibt spezifische Techniken, um United Coagulase und United sowie freie Koagulase gleichzeitig zu erkennen.

Einige Stämme von S. aureus Sie geben ein schnelleres positives Ergebnis als andere. Die Geschwindigkeit der Gerinnselbildung ist direkt proportional zur gegenwärtigen Koagulasekonzentration.

Die Technik des Coagulase -Tests im Folie erkennt die United Coagulas.

Verfahren

-Koagulase -Test in Holder

Materialien

-Säuberungsblatt reinigen

-Kaninchenplasma vorzugsweise kann auch menschliches oder Pferdplasma verwendet werden. Das Plasma kann kommerziell lyophilisiert und rekonstituiert werden, wenn es verwendet werden soll oder frisch verwendet werden kann (kürzlich genommen). Eine weitere praktikable Alternative ist die Verwendung von Fibrinogen.

-Kochsalzlösung (0,85%) Steril (SSF).

Frisches Plasma erhalten

Extrahieren Sie menschliches oder tierisches venöses Blut. Jedes der folgenden Antikoagulanzien kann verwendet werden: EDTA, Calciumoxalat, Heparin oder Natriumcitrat. Gut mischen und zentrifugen. Aseptisch den Überstand (Plasma) ohne rote Blutkörperchen und Ablagerung in einem sterilen Rohr entfernen.

Plasma -Trennung. Quelle: Foto vom Autor aufgenommen: MSC. Marielsa Gil.

Lyophilisierter Plasma

Rekonstituieren.

Frischer Fibrinogen

Mischen Sie aus einem Citratplasma Plasma mit einer gesättigten Lösung von Natriumchlorid. Lassen.

Überstand abwerfen, den Niederschlag bis zu dem Fünffachen seines Volumens mit sterilem destilliertem Wasser rekonstituieren. Fügen Sie 5 Heparin -Einheiten für jede ml Fibrinogen hinzu. Speichern.

Technik

In einem Objektträger werden ein Tropfen Kochsalzlösung und ein Tropfen Plasma getrennt platziert. Nehmen Sie mit einem Platingriff 1 oder 2 reine Kolonien des Mikroorganismus, um es zu versuchen.

Mischen Sie die Bakterienlast im Plasmaabfall und wiederholen Sie den Betrieb im SSF -Tropfen. Beachten Sie die Ergebnisse sofort. Ein positives Ergebnis ist das, bei dem die Bildung eines makroskopischen agglutierten (weißen Niederschlags) nach einer Minute auf der Tropfenseite mit Plasma beobachtet wird.

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Der Tropfen von SSF dient als negative Kontrolle. Wenn eine Agglutination mit dem SSF beobachtet wird. In diesem Fall muss es mit dem Rohrtest bestätigt werden.

Es wird auch empfohlen, eine positive Kontrolle mit einem bekannten Stamm von zu montieren S. aureus.   

Deutung

Agglutination innerhalb von 5 bis 20 SEG (starker positiver Test).

Variable Agglutination zwischen 20 Sekunden und einer Minute (positiver verzögerter Test).

Ein gewisses Maß an Agglutination nach einer Minute (zweifelhafter Test). Es wird empfohlen, den Test zu wiederholen oder nach der Rohrmethode zu bestätigen.

Es gibt keine Agglutination (negativer Test).

Ergebnis mit SSF. Es muss immer negativ sein, wenn das Ergebnis des Tests automatisch ist.

-Rohrkoagulase -Test

Materialien

-Sterile Testrohr

-Plasma

-Maria Bad bei 37 ° C.

Technik

Messen Sie mit einer sterilen 0,5 -ml -Pipette Plasma und legen Sie es in ein 12 x 75 Reagenzglas. Laden Sie den Platingriff mit 2 bis 4 reinen Kolonien, um von einer festen Ernte von 18 bis 24 Stunden aus zu studieren und in der Plasma sorgfältig aufzunehmen. Mischen und inkubieren Sie ihn 4 Stunden bei 37 ° C.

Untersuchen Sie das Röhrchen in der ersten Stunde, ohne sie zu schütteln, nur sanft geneigt. Wenn noch kein Gerinnsel beobachtet wird, können Sie alle 30 Minuten bis zum Abschluss von 4 Stunden weiter beobachten. Wenn es nach 4 Stunden immer noch negativ ist, kann es bis zu 24 Stunden, aber bei Raumtemperatur. Beobachten und melden Sie das Ergebnis.

Basierend auf der Erfahrung empfehlen einige Mikrobiologen, 500 & mgr; l einer bakteriellen Suspension aus einer 18 -stündigen Ernte in einem flüssigen Medium zu verwenden, um den Test durchzuführen.

Anscheinend bietet es schnellere und zuverlässigere Ergebnisse als wenn Kolonien aus soliden Medien emulgiert werden, insbesondere wenn menschliches Plasma aus der Blutbank verwendet wurde.

Die Verwendung von Stämmen aus einer Brühe trägt dazu bei.

Deutung

Wenn ein Gerinnsel, der die gesamte Flüssigkeit (vollständige Gerinnung) oder Gerinnsel abdeckt.

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Wenn es nicht gebildet ist, das heißt, ist die Suspension homogen, der Test ist negativ.

-Coagulase -Test mit Fibrinogen

Fibrinogen wird genau wie Plasma verwendet und dient sowohl für den Haltertest als auch für den Rohrtest. Fahren Sie wie für Plasma beschrieben fort und interpretieren Sie dieselbe Weise.

Verwenden

Es wird verwendet, um die zu unterscheiden Staphylococcus aureus von negativen Koagulase -Staphylokokken.

QA

Haben frische Pflanzen von einer Belastung von S. aureus Als positive Kontrolle verwendet werden. Sie können auch eine Belastung von haben S. Epidermidis als negative Kontrolle.

Einschränkungen

-Ein positiver Test sollte 24 Stunden lang nicht in der Inkubation gelassen werden, wie die S. aureus produziert Fibrinolisin, das das Gerinnsel auflöst.

-Für zuverlässige Test sollten frisches oder frisch rekonstituiertes Plasma verwendet werden, und es ist wichtig, frische Bakterienpflanzen zu verwenden (18 bis 24 Stunden). Dies vermeidet falsche Negative.

-Der Test muss gemeinsam mit einer negativen und einer positiven Kontrolle durchgeführt werden.

-Einige solide Medien können den Coagulase -Test stören. Es wird nicht empfohlen.

-Wenn ein Citrat -Plasma verwendet wird, wird empfohlen, 5 Heparin -Einheiten pro ml Plasma zu platzieren, um falsch -positive Aspekte zu vermeiden. Dies liegt daran, dass einige verschiedene Mikroorganismen von S. aureus Sie können Citrat zersetzen und Plasmagerinnsel machen. In diesem Fall ist es ratsam, Gram und einen Katalasetest durchzuführen.

-Es ist wichtig, im Rohrtest die Reaktion alle 30 Minuten zu überwachen, da es Stämme von gibt S. aureus Das erzeugt hohe Konzentrationen an Fibrinolisin und wird das neu gebildete Gerinnsel verdünnen. Vermeiden Sie falsche Negative.

-Bei der Überwachung des Tests muss das Röhrchen abrupt vermieden werden. Dies kann den Beginn der Bildung des Gerinnsels zerstören, der nicht wiederhergestellt wird, was zu falschen Negativen führt.

Verweise

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