Oxidase Test Foundation, Verfahren und verwendet

Der Oxidase -Test Es ist eine diagnostische Methode, die das Vorhandensein des enzymatischen Komplexes zeigt, der als Cytochromoxidase C bezeichnet wird. Dieses System induziert die Transformation des reduzierten in oxidierten Cytochrom⁺) In der Atemwege.

Der Oxidase -Term ist eine summarische Methode, um sich auf das Cytochrom -Oxidase -Enzym zu beziehen, das auch als Oxidase -Infenol bezeichnet wird. In der Antike wurde angenommen, dass Cytochromoxidase- und Indeophenoloxidase -Enzyme zwei verschiedene Enzyme waren, aber heute ist bekannt, dass sie gleich sind.

Positiver und negativer Oxidase -Test. Quelle: Kein maschinenlesbarer Autor zur Verfügung gestellt. Alpha.Prim ~ commonswiki angenommen (basierend auf Urheberrechtsansprüchen). [Public Domain]

Cytochrome sind für ihren Teil Hämoproteine, die Eisen enthalten und das Cytochromoxidase -System vervollständigen. Cytochrome können von einer Art zur anderen variieren.

Es gibt verschiedene Sorten von Cytochromen (Cytochrome A1, A2, A3 und 0). Einige Bakterien können nur einen produzieren, aber andere bis zu zwei oder drei gleichzeitig. In diesem Sinne wird das Vorhandensein von Cytochrom A und A3 als Cytochrom -Oxidase C bekannt. Dies ist die Art von Cytochrom, die den Oxidase -Test nachweist.

Die Genres von Neisseria und Pseudomonas enthalten Oxidase -C -Zytokrom. Diese Genres geben den positiven Oxidase -Test an und tragen dazu bei, sie vom Acinetobacter- und Stenotrophomonas -Genres zu unterscheiden.

Es gibt auch andere Genres, die positive Oxidase sind.

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Basis

Eigenschaften des Cytochromoxidase -Systems C

Das Oxidase -Cychokomasystem C wirkt wie folgt: Positive Oxidase -Mikroorganismen verwenden Sauerstoff, um durch aerobe Atem Energie zu erzeugen. Dieses System funktioniert dank des Transports von Elektronen von Spendersubstanzen wie NADH⁺ In diesem Fall Sauerstoff zu empfangen.

Dies führt zu Energie (ATP) und Wasserperoxid, abhängig vom Oxidase -Cytochromsystem, das den Mikroorganismus besitzt.

Aus diesem Grund sind die meisten positiven Oxidase -Bakterien auch eine positive Katalase, eine notwendige Erkrankung zur Eliminierung von Wasserstoffperoxid, die erzeugt wird, da diese Substanz für Bakterien giftig ist.

Das Oxidase -C -Zytokromsystem ist in einigen aeroben Bakterien vorhanden, bestimmte optionale anaerobe, knappe mikroaerophile und ohne strenge anaerobe. Letzteres ist verständlich, da strenge Anaerobes nicht in Gegenwart von Sauerstoff leben kann, daher fehlt ihnen das Cytochrom -Oxidase -System.

Beweisprinzip

Verwenden Sie in diesem Test Substanzen, die als künstliche Elektronenakzeptoren fungieren und die Eingeborenen innerhalb der Elektronentransportkette ersetzen.

Hauptsächlich Farbstoffe wie Paraphenylendiamin und Indophenol werden verwendet, die als Rezeptorsubstrate und künstliche Elektronenspender fungieren.

Paraphenyndiamin wird vom Cytokromoxidase -C -System oxidiert. Der Farbstoff in seiner reduzierten Form ist farblos, aber in seiner oxidierten Form ist er gefärbt.

Auf diese Weise das Vorhandensein des Cytochromoxidase C -Systems C; Nun, eine positive Reaktion erzeugt je nach verwendeten Reagenz.

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Wenn sich die letzte Elektronenakzeptorsubstanz in der Atemwege von Sauerstoff unterscheidet, ergibt sich der Oxidase -Test negativ (es gibt keine Farbproduktion). Dies ist der Fall bei anaeroben Mikroorganismen.

Wenn sich das vom Mikroorganismus verwendete Cytochrom von der Cytochromoxidase C unterscheidet, wird es auch den negativen Test ergeben.

Verfahren

Für den Oxidase -Test gibt es mehrere Reagenzien und Protokolle, alle mit dem gleichen Zweck.

Reagenzien

Kovacs Reactive, Gordon und McLeod -Reagenz, Nadi -Reagenz, Schreinerreagenz, Suhrland und Morrison und Verwendung von Oxidase -Scheiben.

-Kovacs Oxidase -Reagenz

Es besteht aus Tetramethyl-p-Phenylendiamin-Dichlorhydrat bei 1%.

Das KOVACS -Reagenz wird hergestellt, indem 1 g der in 50 ml destillierten Wasser erwähnten Substanz auflöst. Es ist bis zu seiner Gesamtlösung subtil erhitzt. Übertragen Sie auf eine bernsteinfarbene Flasche mit ausreichender Kapazität und vervollständigen Sie das Volumen bei 100 ml mit destilliertem Wasser. Warten Sie mindestens 15 Minuten, bevor Sie es verwenden. Sparen Sie in Kühlschrank, die vor Licht geschützt sind.

Es wird als KOVACS -Oxidase -Reagenz gedreht, um es vom KOVACS -Reagenz zu unterscheiden, das verwendet wird, um den Indol -Test aufzudecken. Dieses Reagenz ist das empfindlichste, weniger giftig, aber teurer als der Rest der Reagenzien.

Eine positive Reaktion wird ein Beweis sein. Eine negative Reaktion wird nachgewiesen, da die Kolonie keine Farbänderung vorliegt oder eine leichte rosa Färbung erfordert. Das Medium kann auch verdunkeln, aber das bedeutet keine positive Reaktion.

Bei diesem Reagenz ist die Reaktionszeit entscheidend, diese Farbänderung, die zwischen 5 und 15 Sekunden auftritt.

-Gordon und McLeod Reagenz

Es besteht aus Dimethyl-P-Phenylendiamin-Dichlorhydrat, auch bekannt als N-Dimethyl-p-Phenylendiamin oder p-Amynodimethylanilin-P-Amocorhydrat. Es wird wie für das KOVACS -Oxidase -Reagenz beschrieben hergestellt, wodurch die betroffene Substanz ersetzt wird.

Dieses Reagenz ist etwas stabiler als das Kovacs-Oxidase-Reagenz, obwohl alle Reagenzien, die p-penilendiamin enthalten.

Diese Reaktion ist spät.

-Nadi -Reagenz

Es besteht aus 1% α-Naftol in Ethylalkohol (95% Ethanol) und 1% Amin-Limanylin. Die Mischung wird in gleichen Teilen und mit absolutem Ethylalkohol als Dilient hergestellt, bis die ausreichende Menge für 100 ml abgeschlossen ist.

-Tischler reaktiv, Suhrland und Morrison

Es besteht aus 1% P-Amynodimethylalanin-Oxalat. Bereiten Sie sich auf die gleiche Weise vor, die für das Kovacs -Oxidase -Reagenz beschrieben wird, und ändert sich für die entsprechende Substanz.

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Mit der Lösung werden reaktive Streifen wie folgt hergestellt: Whatman 6-8 cm Nummer 1.

Sie dürfen trocknen, ohne Kontakt mit Metall zu haben, sparen in Gläserfaden mit Trockenmittel und im Kühlschrank aufbewahren. Diese Streifen sind bis zu 6 Monate stabil.

Es ist das stabilste Reagenz aller genannten. Ein weiterer Punkt dafür ist, dass das Medium nicht um die Kolonie herum färbt, wenn es direkt auf der Platte verwendet wird.

Das Auftreten einer roten Farbe wird als positiver Test interpretiert.

-Oxidase -Scheiben

Sie sind kommerzielle Scheiben, die mit Reagenz für den Oxidase -Test imprägniert sind. Es gibt mehrere kommerzielle Marken auf dem Markt.

Die Verwendung ist sehr praktisch, da wir keine frischen Reagenzien vorbereiten dürfen, was die Arbeit erleichtert. Die erhaltenen Ergebnisse sind zuverlässig, solange die Scheiben ordnungsgemäß erhalten bleiben.

Protokolle

Direktplattenmethode, indirektes Verfahren auf Papier und Verwendung von imprägnierten Scheiben mit Oxidase -Reagenzien.

-Direkte Plattenmethode

2 oder 3 Tropfen einer der oben genannten Reagenzien werden zu diesem Zweck direkt auf die in einer Kulturmediumplatte enthaltenen Kolonie (en) hinzugefügt, die nicht Glukose enthält.

Die Veränderung oder nicht die Farbe der Kolonien wird interpretiert, nicht das Medium. Die gültige Reaktionszeit hängt vom verwendeten Reagenz ab.

-Indirekte Methode auf Papier

Schneiden Sie ein Stück Filterpapier (Whatman Nr. 1) auf eine Größe von 6 cm² Und es wird in einem leeren Petrisch gestellt.

Fügen Sie 2 oder 3 Tropfen des KOVAC -Oxidase -Reagens auf Papier hinzu, nehmen Sie an der Kolonie teil, die Sie mit einem Platingriff oder einem Holzstock studieren möchten, und erweitern Sie es in einer geraden Linie auf dem imprägnierten Reagenzierpapier. In einer Zeit von 5 bis 10 Sekunden interpretieren.

Mit den mit dem Zimmermann, Suhrland und Morrison Reagenz erstellten Streifen erstreckt sich eine Kolonie auf den trockenen Streifen. Der gleiche Streifen dient dazu, mehrere Stämme auszuprobieren. Interpretieren auf 10 Sekunden.

-Discs (mdirekte Ethod)

Mit sterilem destilliertem Wasser subtil feuchte kommerzielle Scheiben und überwinden Sie die Kolonie, um zu studieren. Es wird empfohlen, die Platten bei 35 ° C zu verwenden. Wenn Platten bei Raumtemperatur oder Kühlplatten verwendet werden, ist die Reaktion etwas langsamer. Interpretieren Sie den Farbwechsel zwischen 10 und 20 Sekunden.

In Blut oder Schokolade enthaltene Kolonien können verwendet werden.

-Discs (indirekte Methode)

Befeuchten das Album wie oben beschrieben. Legen Sie es auf eine leere Petrisch. Nehmen Sie ausreichend viel der Kolonie, um mit einem Platingriff oder einem Holzstock zu studieren und auf die Scheibe zu legen. Interpretieren Sie den Farbwechsel zwischen 10 und 20 Sekunden.

Verwenden

Die Gattung Neisseria und Acinetobacter ähneln manchmal viel morphologisch, weil das Acinetobacter -Genre zwar ein gramnegativer Bacillus ist, manchmal eine Cocoid -Form annehmen und zweitfrei verteilen kann, wodurch die Gattung Neisseria simuliert wird.

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In diesem Fall ist der Oxidase -Test wirklich nützlich. Das geschlechtsspezifische Neisseria ist positiv und negativ Acinetobacter.

Die Gattung Moraxella ist jedoch der Gattung Neisseria sehr ähnlich und beide geben eine positive Reaktion; Deshalb müssen wir immer Kohlenhydrat -Fermentationstests für eine endgültige Identifizierung durchführen.

Andererseits ist der Oxidase -Test nützlich, um ein Bakterium der Enterobacteriaceae -Familie (alle negativen Oxidase) anderer Fermer wie der Gattung von Pasturel, Aeromonen, Plesiomonas (positive Oxidase) zu unterscheiden, nützlich.

Die Gattung Vibrio und Helicobacter sind ebenfalls eine positive Oxidase.

QA

Verwenden Sie bekannte Stämme von Escherichia coli als negative Kontrolle und Stämme von Pseudomonas aeruginosa als positive Kontrolle.

Einschränkungen

-Reagenzien müssen frisch vorbereitet verwendet werden. Ihre Nutzungsdauer in der Raumtemperatur ist kurz, weil sie sehr instabil ist. Kühlproben können zwischen 5 Tagen und 2 Wochen dauern.

-Die Reagenzien sind farblos, wenn sie die Farbe ändern, müssen sie verworfen werden. Beschädigte Discs sind offensichtlich, weil sie im Laufe der Zeit dunkel werden.

-Eine positive Reaktion mit dem Oxidase -Reagenz von KOVACs zwischen 15 und 60 Sekunden wird als verzögerte Reaktion angesehen und sollte nach 60 Sekunden als negativ angesehen werden.

-Er Haemophylus Influenzae Es gibt eine negative Oxidase-Reaktion, wenn ein Reagenz mit Dimethyl-p-Phenylendiamin verwendet wird, aber positiv, wenn das Oxidase-Reagenz von KOVACs (Tetramethyl-p-Phenylendiamin) nützlich verwendet wird).

-Medien, die Glukose enthalten, stören den Test fälschlicherweise negativ.

-Die Stämme von Bordetella pertussis Sie können falsch positive Reaktion geben, wenn sie aus sehr konzentrierten Blutagarplatten stammen.

-Die Verwendung von Metallgriffen (Eisen), die fälschlicherweise positive Reaktion geben.

Empfehlungen

-Weil die Reagenzien sehr instabil sind und dazu neigen, sich selbst zu verändern.

-Eine andere Möglichkeit, das Selbstausgang des Reagens zu verzögern.

-Da Reagenzien instabil sind, wird empfohlen, eine wöchentliche Qualitätskontrolle durchzuführen.

-Reagenzien, die den Qualitätstest nicht bestehen.

Verweise

1. Koneman E, Allen S., Janda W., Schreckenberger P., Winn W. (2004). Mikrobiologische Diagnose. 5. ed. Pan -American Editorial s.ZU. Argentinien.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologische Diagnose von Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial s.ZU. Argentinien.
3. "Oxidase -Test." Wikipedia, freie Enzyklopädie. Januar 2018, 10:32 UTC. Apr 2019, 14:03 Uhr
4. Weltgesundheitsorganisation. Laborhandbuch für die Identifizierung und den Test der Anfälligkeit für Antimikrobianer bakterianischer Krankheitserreger von Bedeutung für die öffentliche Gesundheit in der Entwicklungswelt.2004. Verfügbar bei: wer.Int/drogenresistenz/infosarieren
5. Reaktive Streifen für die Diagnose der Oxidaseaktivität in Bakterien. Kubaner Rev. 2000; 52 (2): 150-151.