Was ist der Lentivirus??

Der Lentivirus, Aus Latein Lenti Dies bedeutet langsam, sie sind Viren, die zwischen Monaten und Jahren lange Zeit von der anfänglichen Infektion bis zum Auftreten der Krankheit erfordern. Diese Viren gehören zum Genre Lentivirus und Retrovirus (Familie Retroviridae), die ein RNA -Genom haben, das durch Reverse Transcriptase (TR) zu DNA transkribiert wird.

In der Natur sind die Lentivirus in Primaten, Hischungen und Katzen vorhanden. Beispielsweise gibt es in Primaten zwei phylogenetisch verwandte Linien: Affenefizienz -Immundefizienzviren (SIV) und Menschen immundefizienzviren (HIV). Beide sind die Wirkstoffe, die das erworbene Immunschwäche -Syndrom verursachen (AIDS).

Quelle: PhD DRE bei English Wikipedia [CC BY-SA 3.0 (https: // creativecommons.Org/lizenzen/by-sa/3.0)]]

Lentivector, das aus Lentivirus erhalten wurde, wurden häufig für die Grundlagenforschung in Biologie, funktioneller Genomik und Gene -Therapie verwendet.

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Stadien des Retrovirus -Lebenszyklus

Der Lebenszyklus aller Retrovirus beginnt mit der Vereinigung des Organismus zu einem spezifischen Rezeptor auf der Oberfläche der Zelle, gefolgt von der Internalisierung des Virus durch Endozytose.

Der Zyklus setzt sich mit der Eliminierung der Virusbedeckung und der Bildung eines Virus -Nucleoprotein -Komplexes (VNC) fort, das aus viralem Genom besteht, das mit viralen und zellulären Proteinen assoziiert ist. Die Zusammensetzung der komplexen Veränderungen verändert sich im Laufe der Zeit und hängt mit der Konvertierung über TR des Invadergenoms in einem Doppel -DNA -Propeller zusammen.

Die Integration des Virusgenoms in das der Zelle hängt von der Fähigkeit des viralen Genoms ab, in den Wirtskern einzudringen. Die Reorganisation des VNC hat eine wichtige Einfuhr im Import des Kerns, obwohl wichtige Zellproteine ​​wie Transportin-SR2/TNPO3, Importin-Alpha3 und Importin7 auch den Kern beeinflussen.

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Virale Proteine ​​wie Integration und Transkriptionsfaktoren der Wirtszelle wie LEDCF sind entscheidend für die Integration des viralen Genoms.

Dies verwendet die Maschinerie der Wirtszelle, um virale Proteine ​​zu transkribieren und zu übersetzen und Virionen zusammenzustellen, um sie im extrazellulären Raum zu befreien.

Von lentivirus zum lentivector

Das Retrovirus -Genom verfügt über drei offene Messwerte (MLA) für verschiedene virale Elemente. Zum Beispiel Capsidia und Matrix (Gen Gag), Enzyme (Gen Pol) und Wrap (Gen schicken).

Der Aufbau eines Virusvektor. Auf diese Weise kann ein viraler Vektor eukaryotische Zellen infizieren, retro-transkriben, in das Genom der Wirts-Eukaryot-Zelle integrieren und den Transgen (eingefügte therapeutische Gen) exprimieren, ohne Krankheiten zu verursachen.

Eine Methode zum Konstruktion von Lentivektor ist die Übergangstransfektion. Es basiert auf der Verwendung von viralen Minigenomen (als Konstrukte genannt), die nur die interessierenden Gene transportieren. Die Übergangstransfektion besteht aus unabhängiger Konstruktion von Konstrukten.

Einige Retrovektoren haben nur Hauptelemente für den Zusammenbau von Viruspartikeln, die als nicht funktionsfähige Retrovektoren bezeichnet werden. Sie werden verwendet, um Verpackungszellen zu transfektionieren.

Vektoren mit einer Transgenexpressionskassette können Zellen infizieren, transformieren (Transduktion) und Transgen exprimieren.

Die Verwendung separater Konstrukte zielt darauf ab, Rekombinationsereignisse zu vermeiden, die den wilden Phänotyp wiederherstellen könnten.

Lentivektor -Technologie

Die Lentivector -Technologie hat eine breite Verwendung in Basisbiologie- und Translationsstudien zur Überexpression von Transgenen -Stabilen, der Ausgabe von Genen, die durch Standort, die Stummschaltung von anhaltenden Genen, die Modifikation von Stammzellen, die Erzeugung transgener Tiere und die Pluripotent -Zellinduktion, verwendet werden.

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Lentivektoren sind leicht zu manipulieren und Systeme zu produzieren. Sie sind irreversibel integriert und sicherlich das Wirt -Genom. Zellen infizieren, die in der Teilung sind oder nicht.

Sie zeigen Tropismus gegenüber bestimmten Stoffen und erleichtern die Therapie. Sie exprimieren keine viralen Proteine, daher haben sie eine geringe Immunogenität. Sie können komplexe genetische Elemente senden.

In der Grundlagenforschung wurden HIV -basierte Lentivektoren als Interferenz -RNA -Sendesysteme (RNAI) verwendet, um die Funktion eines bestimmten Gens zu beseitigen und so die Interaktion mit verschiedenen anderen zu untersuchen.

Lentivektor aus HIV erhalten

Zu Beginn der 90er Jahre wurden die ersten Lentivektoren aus dem HVI-1 gebaut. HVI-1 ist weltweit für AIDS verantwortlich.

Die erste Generation von Lentivector hat einen bedeutenden Teil des HIV -Genoms. Enthält Gene Mädchen Und Pol, und mehrere zusätzliche virale Proteine. Diese Generation wurde mit zwei Konstrukten erstellt. Einer von ihnen, der Schiff ausdrückt, liefert Verpackungsfunktionen. Ein anderer drückt alle MLA mit Ausnahme des Versands aus.

Der Transfervektor besteht aus einer Expressionskassette, die durch zwei Arten von langen Wiederholungen (LTR) und Gene gekennzeichnet ist, die für die Verpackung und umgekehrte Transkription erforderlich sind.

In der zweiten Generation von Verpackungsvektoren fehlt die meisten Accessoire -Gene und behalten TAT und Rev. Diese Gene wurden in der dritten Generation entfernt und durch ein viertes Konstrukt bereitgestellt.

Transfervektoren der dritten Generation bestehen aus zwei Packungskonstrukten. Man kodiert Mädchen Und Pol. Eine andere Cod Rev. Ein drittes Konstrukt codiert die Hülle, die von VSV-G abgeleitet ist. Derjenige, der das Interessegen codiert, enthält inaktivierte LTT -LTT -Sequenzen, um eine Rekombination zu vermeiden.

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Im letzten Fall erhöhen Transkriptionsregulierungselemente die Leistung von Transfergenen.

Lentivektor aus anderen Viren erhalten

Das HIV-2-Virus ist eng mit dem Magabey Gris Siv verwandt (siv_IHR) und ist für AIDS in Westafrika verantwortlich. Aus diesem Virus wurden Vektoren der ersten und zweiten Generation erhalten.

Ähnlich wie HVI-1 aus dem SIV_IHR, des EIAV (infektiöses Anämie -Virus) des IVF (Feline Immunodeficiency Virus) und der BIV -Vektoren von drei Generationen wurden gebaut. EIAV -basierte Vektoren wurden für den klinischen Einsatz entwickelt.

Aus dem Caprin-Arthritis-idephalitis-Virus (CAEV) wurden Vektoren der ersten und dritten Generation gebaut. Während des IVR von African Green Monkey wurden Vektoren der ersten Generation gebaut.

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