Voges-Proskauer-Test, was ist, Foundation, Vorbereitung, verwendet

Er Voges-Proskauer-Test Es ist ein biochemischer Test, der zur Identifizierung von Bakterien zur Familie Enterobacteriaceae verwendet wird. Besonders ist nützlich, um Stämme von zu unterscheiden Escherichia coli von Klebsiella und Enterobacter, unter anderem.

Der Test wird in dem flüssigen Kulturmedium als Red Methylvöge Proskauer durchgeführt, besser bekannt mit dem Akronym RM/VP. Dieses Medium besteht aus gepuffertem Polypepton, Glucose, Dipotiumphosphat und destilliertem Wasser.

Rote Metil von Metilo-Voges Proskauer (RM/ VP)/ positivem und negativem VP-Test. Quelle: Foto des MSC -Autors aufgenommen. Marielsa Gil/ Sudipta.November15 [CC BY-SA 3.0 (https: // creativecommons.Org/lizenzen/by-sa/3.0)] aus Wikimedia Commons

Das aktuelle RM/VP -Medium ist eine Modifikation des Clark- und Lubs -Medium. Daher gab es weniger Wasserstoffionen, die für die positive Reaktion von Voges-Proskauer erforderlich waren.

Der Test basiert auf der Kapazität des Mikroorganismus der Verwendung von Glucose durch den Butylén-Glycolic-Weg und bildet in Gegenwart von Sauerstoff und einem alkalischen pH-Wert ein neutrales Endprodukt namens Acetoin.

Im RM/VP-Medium können Sie nicht nur den Voges-Proskauer-Test aufzeigen, sondern auch den metilianischen roten Test aufzeigen.

Basis

Grundlage des Voges-Proskauer-Tests

In der Mitte vorhandene Pluripeptons liefern die unverzichtbaren Ernährungsbedarf für Bakterienwachstum. Glukose ist für seinen Teil die Hauptverbindung. Viele Bakterien haben die Fähigkeit, Glukose zu metabolisieren und Pyruvsäure zu bilden.

Pyruvinsäure ist ein Mittelpunkt im Glukosestoffwechsel und von dort aus kann jeder Mikroorganismus unterschiedliche Wege aufnehmen. Einige bilden gemischte Säuren wie Milchsäure, Essigsäure, Ameisensäure und Succinsäure, andere bilden neutrale Produkte wie 2,3-Butnediol.

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Der Voges-Proskauer-Test zeigt die Kapazität des Mikroorganismus zur Bildung von Acetylmethylcarbinol (Acetoin), einem Zwischenprodukt von 2,3-Butnediol bei Aerobiose-Bedingungen.

Acetoin ist reduziert und 2,3-aus-aus-Form, aber diese Reaktion ist reversibel. Wenn 2,3-Butnediol oxidiert wird. Daher ist Sauerstoff unverzichtbar.

Dipotium -Phosphat ist der Puffer, der die Mischung auf einen pH -Wert von 6,9 ± 0,2 kissent.

Grundlage für die Entwicklung der Beweise und der Interpretation

Um die Reaktion zu zeigen, muss eine Offenbarung unter Verwendung von zwei Reagenzien (Barrit -Reagenzien) durchgeführt werden, die als Voges A und Voges B bekannt sind.

Voges A ist eine 5% α-Naftol-Lösung, und Voges B ist eine 40% ige Kaliumhydroxid-Präparation. Wenn kein Kaliumhydroxid verfügbar ist, kann es durch 40% Natriumhydroxid ersetzt werden.

Α-Naftol ist ein Katalysator, der die Intensität der Farbe der Reaktion erhöht, was den empfindlichsten Test macht. Das α-NAFTOL muss immer zuerst zuerst zugegeben werden, wobei das Röhrchen so rührt, damit das Medium mit Sauerstoff in Kontakt kommt. Auf diese Weise wird das vorliegende Acetoin auf Diacetyl oxidiert, und das 2,3-aus-Butnediol wird zu Acetoin oxidiert, wobei es an Diacetyl geleitet wird.

So wird α-Naftol der Diacetyl verbinden, was wiederum dem in der Arginin-Aminosäure vorhandenen Guanidin-Kern beigetragen hat, letzteres von den Multipartonen.

Kalium oder Natriumhydroxid ist seinerseits für die Absorption von CO verantwortlich₂ Und mit den Peptons zu reagieren. Diese Reaktion entsteht die Bildung einer rosa Salmonfarbe, die nach dem Rühren des Röhrchens deutlich sichtbar ist.

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Damit die Färbung sofort auftritt. Wenn dies nicht der Fall ist, darf sich die Röhre 15 Minuten lang ausruhen.

Der Test ist im Allgemeinen nach 2 bis 5 Minuten positiv, wenn Sie eine schwach rosa Farbe sehen können. Wenn 30 min bei 1 Stunde in Ruhe gelassen werden, ist die Intensität der Farbe maximal (intensiv rot).

Ein negativer Test wird nachgewiesen, wenn die Brühe gelb ist. Wenn der Test negativ ist, kann nach 1 Stunde ein kupferiges Farbprodukt der Reaktion von Kaliumhydroxid auf α-NAFTOL gebildet werden.

Vorbereitung

Mittlerer RM/VP

Wiegen Sie 17 g dehydrierter Kultur und löst sich in einem Liter destilliertem Wasser auf. 5 Minuten stehen lassen. Zum Kochen erhitzen, um sich vollständig aufzulösen. 3 bis 4 ml in Röhrchen servieren und 15 Minuten lang in Autoklav bei 121 ° C sterilisieren.

Das dehydrierte Kulturmedium ist beige und das vorbereitete Medium ist leicht gebern.

Der endgültige pH -Wert des Mediums beträgt 6,9 ± 0,2.

Voges Reagenz a

Wiegen Sie 5 g α-Naftol und lösen Sie sich in 50 ml Ethylalkohol (absolut) auf. Anschließend mit Ethylalkohol sogar bei 100 ml hinzufügen.

Voges -Reagenz b

40 g Kaliumhydroxid wiegen und in 50 ml destilliertem Wasser in einem Becherchen auflösen. Das Glas muss in ein kaltes Wasserbad gelegt werden, um die Temperatur zu steuern.

Nachdem die Lösung kalt ist, wird sie in eine gehackte Kugel übertragen und bei 100 ml mit destilliertem Wasser spülen.

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Voges-Proskauer-Testverfahren

Um den Voges-Proskauer-Test durchzuführen.

Das Inokulum sollte nicht sehr dicht sein. 35-37 ° C sind 24 bis 48 Stunden in Incuba, obwohl in einer Inkubation für mehrere Tage manchmal erforderlich ist. Cowan und Steel glauben, dass 5 Tage die minimale Inkubationszeit sind.

Test enthüllt

Trennen Sie ein Aliquot von 1 ml in einem Röhrchen und machen Sie die Entwicklung wie folgt: Platzieren Sie 12 Tropfen (0,6 ml) der Voges A und 4 Tropfen (0,2 ml) von Voges B. Mischen Sie in die Luft und lassen Sie sich 5 - 10 Minuten vor dem Interpretation stehen. Wenn der Test jedoch immer noch negativ ist, lassen Sie sich den Röhrchen nach 30 Minuten bis 1 Stunde beobachten und beobachten.

Das Erscheinungsbild einer rosa-roten Farbe zeigt, dass die Voges-Proskauer-Reaktion positiv ist. Wenn das Medium gelb bleibt, ist die Reaktion negativ.

Die Hinzufügung der Aufschluss über die angegebene Reihenfolge und Menge ist unerlässlich, um falsch negative zu vermeiden.

Verwenden

Der Voges-Proskauer-Test ist nützlich, um zwischen den Stämmen von zu unterscheiden UND. coli Das sind negative VP der Klebsiella -Genres, Enterobacter, Serratia, die positiv VP sind.

Quelle: Koneman E, Allen S., Janda W., Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologische Diagnose. 5. ed. Pan -American Editorial s.ZU. Argentinien.

QA

Um die Qualität des vorbereiteten Mediums zu testen, können Sie Steuerelemente verwenden, einschließlich Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella Typhimurium und Enterobacter -Abwasserkanal ATCC 13047.

Die erwarteten Ergebnisse sind positive Voges-Proskauer-Reaktionen nur für K. Lungenentzündung Und UND. Cloacae. Der Rest gibt negative Reaktionen.

Verweise

1. Britania Laboratories. MR-VP-Durchschnitt. Verfügbar unter: www.Britanialab.com