Färbung von Sporen

Sporenfärbung durch die Shaeffer-Fulton- oder Wirtz-Conklin-Methode. Quelle: Y auch (Original -Uploader) [GFDL (http: // www.Gnu.Org/copyleft/fdl.html) oder cc-be-sa-3.0, Wikimedia Commons

Was ist die Färbung von Sporen??

Der Färbung von Sporen Es ist die Methodik, mit der die Resistenzstrukturen gefärbt werden, die einige bakterielle Gattungen bilden, wenn sie sich unter ungünstigen Bedingungen befinden. Es dient dazu, Bakterien zu identifizieren.

Es gibt viele Genres, die Sporen bilden, aber die wichtigsten sind Bazillus Und Clostridium. Diese Genres werden als relevanter angesehen, weil sie pathogene Spezies für das menschliche Wesen haben.

Jeder Bacillus kann zu einer Spore führen. Zum Zeitpunkt der Färbung der Präparation befindet sich die Spore innerhalb des Bacillus (Endospora) oder außerhalb dieses (Exospora). Mit herkömmlichen Färbungstechniken für Bakterien - wie die Färbung von Gramm - sind die Sporen farblos.

Gegenwärtig gibt es mehrere Farbmethoden, die die dicke Struktur der Spore überqueren können, um sie zu färben. Diese Methoden sind sehr unterschiedlich, und Dorner's Technique, Möwens Flecken- und Shaeffer-Fulton-Methodik, auch als Wirtz-Conklin bekannt.

Von allen genannten Techniken ist die Methodik von Shaeffer-Fulton die am häufigsten in Routinelabors verwendete. Verdankt seinen Namen zwei Mikrobiologen, die 1930 die Färbung erstellt haben: Alicia Shaeffer und Macdonald Fulton. Manchmal wird die Technik jedoch zu Ehren von zwei Bakteriologen von 1900 als Wirtz-Conklin bezeichnet.

Basis

Die Sporen sind nicht mit herkömmlichen Farben gefärbt, weil sie eine sehr dicke Wand haben. Die komplexe Zusammensetzung der Sporen verhindert den Eintritt der meisten Farbstoffe.

Wenn die Spore von außen nach innen untersucht wird, werden die folgenden Schichten beobachtet: Erstens gibt es das Exosporium, das die beste und externste Schicht ist, die von Glykoproteinen gebildet wird.

Dann kommt die Nagelhaut, die Resistenz gegen hohe Temperaturen liefert, gefolgt von dem aus Peptidoglycan bestehenden Kortex. Anschließend gibt es die Basis der Basis, die den Protoplasten schützt.

Die Spore ist eine dehydrierte Struktur, die 15% Calcium- und Dipycolinsäure enthält. Daher basieren die meisten Sporen -Färbungstechniken auf der Wärmeanwendung, damit der Farbstoff die dicke Struktur durchdringen kann.

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Sobald die Spore befleckt ist, kann sie den Farbstoff nicht beseitigen. In der Shaeffer-Fulton.

Beim Waschen mit Wasser wird der Farbstoff aus der vegetativen Zelle entfernt. Dies geschieht, weil der grüne Farbstoff von Malachit leicht grundlegend ist, sodass die vegetative Zelle schwach bindet.

Stattdessen kann man nicht aus der Spore kommen und schließlich wird der Bacillus mit Safranin eingestellt. Diese Stiftung gilt für den Rest der Techniken, bei denen etwas Ähnliches passiert.

Sporen -Färbungstechniken

Um die Färbung von Sporen durchzuführen, müssen Sie eine reine Ernte der verdächtigen Belastung haben, die Sie studieren möchten.

Die Ernte ist 24 Stunden lang extreme Temperaturen ausgesetzt, um den Mikroorganismus zu sporular zu stimulieren. Dafür kann die Ernte in einem 44 ° C oder in einem Kühlschrank (8 ° C) für 24 oder 48 Stunden platziert werden.

Wenn Sie bei den oben genannten Temperaturen zu lange abreisen, werden nur Exospaier beobachtet, da alle Endosporen den Bacillus verlassen haben.

Höhe. Dann wird ein kleiner Teil der Ernte genommen und eine ausgedehnte Geldstrafe. 

Anschließend ist es trocknen zugelassen, es ist in der Hitze und im Farbstoff mit einigen der unten erläuterten Techniken festgelegt:

Dorner -Technik

• Bereiten Sie sich in einem Reagenzglas eine konzentrierte Suspension des in destillierten Wassers sporulierten Mikroorganismus vor und fügen Sie ein gleiches Volumen an Fenicade Fuchsina von Kinyoun hinzu.
• Legen Sie das Röhrchen in einem Bad mit kochendem Wasser zwischen 5 und 10 Minuten.
• Bei einem sauberen Objektträger mischte ein Tropfen der vorherigen Suspension mit einem Tropfen wässriger Nigrosinlösung bei 10%gekocht und gefiltert.
• Mit weicher Hitze ausdehnen und trocknen.
• Untersuchen Sie mit 100x -Ziel (Immersion).

Die Sporen sind rot gefärbt und Bakterienzellen erscheinen fast farblos vor einem dunkelgrauen Hintergrund.

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Modifizierte Dorner -Technik

• Eine erweiterte Aufhängung des sporulierten Mikroorganismus wird auf einer Folie hergestellt und auf Wärme befestigt.
• Die Probe ist mit einem Filterpapierstreifen bedeckt, zu dem Fenicade Fuchsin hinzugefügt wird. Der Farbstoff ist 5 bis 7 Minuten mit der Flamme des Bunsen leichter erhitzt, bis die Dampfablösung erzeugt wird. Dann wird das Papier zurückgezogen.
• Die Zubereitung mit Wasser wird gewaschen und trocknet dann mit absorbierendem Papier.
• Der Abstrich ist mit einem dünnen Film von 10%Nigrosine bedeckt, wobei eine zweite Folie verwendet wird, um Nigrosine oder eine Nadel zu verlängern.

Die Färbung durch Sporen und Bakterien entspricht der in der vorherigen Technik beschriebenen.

Shaeffer-Fulton- oder Wirtz-Conklin-Technik

• Machen Sie eine ausgedehnte Geldstrafe mit einer Aufhängung des sporulierten Mikroorganismus auf einer Folie und fixieren Sie die Wärme.
• Decken Sie den Objektträger mit wässriger grüner Malachitlösung bei 5% ab (ein Filterpapier kann auf das Blatt platziert werden).
• Erwärmen Sie die Flamme von Bunsens Feuerzeug, bis es eine Dampfablösung verursacht und die Flamme entfernen. Wiederholen Sie den Vorgang von 6 bis 10 Minuten. Wenn während des Eingriffs die Malachit Green -Lösung verdunstet, kann mehr hinzugefügt werden.
• Entfernen Sie das Filterpapier (falls platziert) und waschen Sie mit Wasser.
• Decken Sie den Objektträger 30 Sekunden lang mit 0,5% wässrigem Safranin ab (einige Varianten der Technik verwenden 0,1% wässriges Safranin und lassen Sie ihn 3 Minuten lang).

Mit dieser Technik werden die Sporen grün und der rote Bazilli präsentiert.

Es hat die Unannehmlichkeiten, dass die Endosporen junger Pflanzen nicht gut gefärbt sind, da sie extrem klar oder farblos aussehen. Um dies zu vermeiden, wird empfohlen, 48 -Stunden -Inkubationspflanzen zu verwenden.

Möeller -Technik

• Decken Sie den Abstrich 2 Minuten lang mit Chloroform ab.
• Chloroform wegwerfen.
• Decken Sie mit 5% Chromsäure 5 Minuten lang ab.
• Mit destilliertem Wasser waschen.
• Das Blatt mit Fuchsin-Fenicada-Carbol ist bedeckt und der Flamme des Bunsen leichter ausgesetzt, bis die Emission von Dämpfen dann einige Momente aus der Flamme entfernt wird. Die Operation wird bis 10 Minuten wiederholt.
• Mit Wasser waschen.
• Verwenden Sie angesäuertes Ethanol (Hydrochloralkohol), um verfärbt. Es bleibt 20 oder 30 Sekunden.
• Mit destilliertem Wasser waschen.
• Mieten Sie das Blatt mit Methylenblau 5 Minuten lang ab.
• Mit destilliertem Wasser waschen.
• Es darf trocknen und die Probe zum Mikroskop bringen.

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Die Sporen sehen rot und die blauen Bacilli aus. Es ist wichtig, Dämpfe nicht zu streben, da sie giftig und langfristig krebserregend sein können.

Möger -Technik ohne Hitze modifiziert

Im Jahr 2007 haben Hayama und seine Mitarbeiter eine Modifikation von Möwens Technik erstellt. Sie eliminierten die Farbstofffarbe und ersetzten ihn durch 2 Tropfen des Tensid-Tergitols 7 pro 10 ml Fuchsin-Fenzierung Carbol-Lösung 7. Die gleichen Ergebnisse wurden erhalten.

Anwendungen

Die Färbung von Sporen liefert sehr wertvolle und nützliche Informationen für die Identifizierung des Erregers, da das Vorhandensein desselben, seine Form, die Lage innerhalb des Bacillus und die Fähigkeit, die vegetative Zelle zu verformen oder nicht, Daten sind, die die Spezies leiten können die in ein bestimmtes Geschlecht beteiligten Arten.

In diesem Zusammenhang ist es wert, zu sagen, dass die Sporen rund oder oval sein können, sie können sich in der Mitte oder auch in einer palazentralen, subterminalen oder terminalen Position befinden.

Schema der Form und Position von Endosporen und Exospore

Beispiele

• Clostridium difficile Es bildet eine ovale Spore in einer terminalen Position, die den Bazillus verformt.
• Die Spore von Clostridium Tertium Es ist oval, verformt den Bacillus nicht und befindet sich auf terminaler Ebene.
• Die Endospora von Clostridium Tetani Es ist terminal und verformt den Bacillus, wodurch das Aussehen eines Drum Stick.
• Die Sporen von Clostridium botulinum, C. histolytisch, C. Novy Und C. septicum Sie sind rund oder oval, unterirdisch und verformen den Bacillus.
• Die Endospora von Clostridium sordelli Es befindet sich in der zentralen Position mit einer leichten Verformung.

Verweise

1. Moeller Fleck. Abgerufen von.Wikipedia.Org.
2. Endospora. Von es geborgen.Wikipedia.Org.
3. Forbes, b., Sahm, d., Weissfeld, a. Mikrobiologische Diagnose von Bailey & Scott. Pan -American Editorial s.ZU.