Giemsa -Färbung

Giemas Färbung ist eine häufige Methode, um verschiedene Gewebe und Blutproben zu untersuchen

Was ist Giemas Färbung??

Der Giemsa -Färbung Es handelt. Es schuf Gustav Giemsa, deutscher Chemiker und Bakteriologe, der Romanowskys Arbeit perfektionierte, indem er Glycerin hinzufügte, um die Verbindungen zu stabilisieren.

Die Änderungen an der ursprünglichen Romanowsky -Technik erzeugt, die mikroskopische Beobachtungen signifikant verbessern durften, wurde die Technik mit dem Namen der Giemsa -Färbung getauft.

Eine einfache Technik, die von großer Funktionabilität und wirtschaftlicher Technik auszuführen ist, wird sie derzeit im klinischen Labor für hämatologische Geruch, Knochenmarkproben und Gewebeschnitte häufig verwendet.

Giemas Färbungstechnik ist für zytologische Studien sehr nützlich, da sie die Beobachtung spezifischer Zellstrukturen ermöglicht. Diese Technik färbt Zytoplasmen, Kerne, Nucleolos, Vakuolen und Zellgranulate und unterscheidet sogar feine Chromatinspuren.

Darüber hinaus können signifikante Veränderungen in der Größe, Form oder Färbung des Kerns nachgewiesen werden, wenn er möglich ist.

Gründung von Giemas Färbung

Romanowsky -Farbstoffe haben den Basiskontrast zwischen Säure- und Basisfarbstoffen, um grundlegende bzw. saure Strukturen abzutöten. Wie zu sehen ist, gibt es eine Affinität der sauren Farbstoffe, die Grundstrukturen zu färben und umgekehrt.

Der verwendete grundlegende Farbstoff ist Methylenblau und seine rostigen Derivate (Azure A und Azure B), während der saure Farbstoff Eosin ist.

Die sauren Strukturen der Zellen sind Nukleinsäuren, das Granulat der basophilen segmentierten unter anderem. Daher werden sie mit Methylenblau gefärbt sein.

In diesem Sinne sind die grundlegenden Strukturen der Zellen Hämoglobin und einige Granulat. Diese werden mit Eosina gefärbt sein.

Andererseits können Methylen und Azurblau durch metakromatische Farbstoffe gekennzeichnet sind, die den verschiedenen Strukturen einen variablen Ton geben können, je nach Ladung von Polyianionen, die sie besitzen.

So schafft die strategische Kombination von grundlegenden und sauren Farbstoffen, ein breites Farbenspektrum entsprechend den biochemischen Eigenschaften jeder Struktur zu entwickeln, die durch hellblau, dunkelblau, lila und lila blaue Farben im Fall von Sauresäurestrukturen gehen.

Die von Eosina bereitgestellte Färbung ist stabiler und erzeugt Farben zwischen Rötung, Orange und Lachs.

Materialien

Vorbereitung der Mutterlösung

Die Herstellung der Mutterlösung erfordert ein Gewicht von 600 mg Giemsa -Staub, Messung von 500 ccm Aceton -freier metilolischer Alkohol und 50 ccm neutraler Glycerin.

Vorbereitungsart

Legen Sie den schweren Gieessa -Staub auf einen Mörtel. Wenn es Klumpen gibt, müssen sie pulverisiert werden. Anschließend eine nennenswerte Menge des gemessenen Glycerins hinzufügen und sehr gut mischen. Die erhaltene Mischung wird in eine sehr saubere Bernsteinflasche gegossen.

Der Rest von Glycerin wird in den Mörtel platziert. Mischen Sie erneut, um den Rest des Farbstoffs zu reinigen, der an den Mörserwänden festgehalten wurde, und werfen Sie die gleiche Flasche.

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Die Flasche ist bedeckt und dauert 2 Stunden in einem Wasserbad bei 55 ° C. So lange.

Anschließend darf die Mischung abkühlen lassen, um den Alkohol zu platzieren. Zuvor wird ein Teil des gemessenen Alkohols in den Mörtel gestellt, um das Waschen der Färbung zu beenden, und wird dann neben dem Rest des Alkohols zur Mischung hinzugefügt.

Diese Vorbereitung sollte mindestens 2 Wochen reifen lassen dürfen. Der Teil, der aus der Mutterlösung verwendet wird, muss gefiltert werden.

Um die Verunreinigung der Zubereitung zu vermeiden, wird empfohlen, den Teil zu bestehen, der ständig an eine kleine Bernsteinflasche mit Dripper verwendet wird. Reracharge jedes Mal, wenn das Reagenz erschöpft ist.

Pufferlösung Vorbereitung

Andererseits wird eine 7,2 -pH -Pufferlösung wie folgt hergestellt:

6,77 g Natriumphosphat (wasserfrei) (Nahpo werden gewogen₄), 2,59 g Kaliumdihydrogenphosphat (kH₂Po₄) und destilliertes Wasser bis zu 1.000 ccm.

Endgültige Farbvorbereitung

Für die Herstellung der endgültigen Färbungslösung werden 2 ccm der gefilterten Mutterlösung gemessen und mit 6 ccm der Pufferlösung gemischt. Die Mischung wird gerührt.

Eine relevante Tatsache, die berücksichtigt werden muss.

Zusätzliche Materialien, die zur Färbung erforderlich sind

Abgesehen von den beschriebenen Materialien, Färbungsbrücken, Laufstufen mit Wasser oder Puffer zum Waschen, Scheiben oder Abdeckungen, einer Stoppuhr, einer Stoppuhr zur Steuerung der Färbung und dem Trockenpapier oder einem Material, das zum Trocknen dient (Gaze oder Baumwolle (Gaze oder Baumwolle),.

Technik

Färbungsprozess

1. Vor dem Färben sollte die erweiterte Probe auf einer sauberen Folie fertig sein.

Proben können Blut, Knochenmark, histologische Gewebe oder Gebärmutterhals-Vaginalproben sein. Es wird empfohlen, dass die erweiterten in Ordnung sind und 1 oder 2 Stunden trocknen, bevor sie färben.

2. Auf einer Farbbrücke werden alle Blätter platziert, die färben sollen. Es funktioniert immer in derselben Reihenfolge und jedes Blatt ist gut identifiziert.

3. Stellen Sie ein paar Tropfen 100% (Methanol) Metallalkohol auf den Geruch und lassen Sie 3 bis 5 Minuten lang, um die Probe zu reparieren und zu dehydrieren.

4. Das im Blatt vorhandene Methanol verwerfen und in die Luft trocknen lassen.

5. Sobald Sie trocknen können, legen Sie die endgültige Fleckenlösung mit einem Tropfen, bis sie das gesamte Blatt bedeckt. Act für 15 Minuten lassen. Einige Autoren empfehlen bis zu 25 Minuten. Es hängt vom Handelshaus ab.

6. Abtropfen Sie den Farbstoff und waschen Sie das Reiben mit destilliertem Wasser oder mit einer Pufferlösung von 7,2.

7. Lassen Sie die Außenblätter auf einem Trocknenpapier trocknen, mit Hilfe einer Unterstützung vertikal angeordnet.

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8. Reinigen Sie die Rückseite des Rutsch.

Verwendet/Anwendungen der Färbung von Giemsa

Giemas Färbungstechnik wird in verschiedenen Bereichen verwendet: in Hämatologie, Mykologie, Bakteriologie, Parasitologie, Zytologie und Zytogenetik.

Hämatologie

Es ist die häufigste Verwendung, die dieser Färbung gegeben wird. Damit wird jeder einzelne Zellen in Knochenmarkproben oder peripherem Blut identifiziert. Berechnen Sie nicht nur die Anzahl jeder Serie, sondern auch die Möglichkeit, Leukozytose oder Leukopenie, Thrombozytopenie usw. nachzuweisen.

Da es empfindlich ist, unreife Zellen zu identifizieren, ist es für die Diagnose einer akuten oder chronischen Leukämie relevant. Es ist auch möglich.

Pilzkunde

In diesem Bereich ist seine Verwendung üblich für die Suche nach Histoplasma capsulatum (intrazelluläre dimorphe Pilz) in Gewebeproben.

Bakteriologie

In hämatologischen Abstrichen mit Giemsa ist es möglich, nachzuweisen Borrelien sp Bei Patienten, die die Krankheit untersuchen, namens Recurrentis Fever. Spirequettes werden bei Erythrozyten in Proben, die im fieberhaften Peak entnommen wurden, reichlich beobachtet.

Es ist auch möglich, intrazelluläre Bakterien wie z Rickettsias sp Und Chlamydien trachomatis In infizierten Zellen.

Parasitologie

Im Bereich der Parasitologie hat Giemas Färbung die Diagnose parasitärer Krankheiten wie Malaria, Chagas Evil und Leishmaniasis ermöglicht.

In den ersten beiden die Parasiten Plasmodium sp und das Cruzi Tripaosoma, Sie können jeweils im peripheren Blut von infizierten Patienten sichtbar gemacht werden. Sie können in verschiedenen Stadien gemäß der Phase gefunden werden, in der die Krankheit ist.

Um die Suche nach Blutparasiten zu verbessern, wird dies empfohlen.

Ebenso kann die Haut -Leishmaniasis bei der Bewertung von Proben von Lederbiopsien mit Giemsa diagnostiziert werden, wo der Parasiten gefunden wird.

Zytologie

Die Färbung von Giemsa wird auch für die zytologische Untersuchung endozervikaler Proben verwendet, obwohl es nicht die für diesen Zweck am häufigsten verwendete Technik ist.

In Fällen von Ressourcenknappheit kann dies jedoch verwendet werden, wobei die vom PAP -See angebotene Funktionalität und günstigere Kosten ähnlich sind. Es erfordert jedoch Fachwissen durch die Prüfung.

Zytogenetik

Ein relevantes Merkmal von Giemas Färbung ist seine Fähigkeit, sich den Regionen, die reich an Adeninen und Timinas von DNA sind. Dies ermöglicht die Visualisierung der DNA während der Zellmyitose in verschiedenen Kondensationszuständen.

Diese Studien sind notwendig, um chromatische Aberrationen wie Duplikationen, Deletionen oder Translokationen der verschiedenen Regionen von Chromosomen nachzuweisen.

Giemsa -Färbung. Quelle: Panreac Appichem ITW -Reagenzien. Version 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Spanien.

Empfehlungen für gute Flecken

- Das Trocknen der Blätter sollte nicht beschleunigt werden. Die Aufsichtszeit für das Trocknen muss im Freien erwartet werden. Ungefähr 2 Stunden.

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- Färben Sie unmittelbar nach 2 Stunden für bessere Ergebnisse.

- Damit die Gerüche besser repariert und gefärbt werden, muss die Probe auf das Blatt verteilt werden, damit eine dünne und gleichmäßige Schicht vorhanden ist.

- Die bevorzugte Blutprobe ist die Kapillare, da der SMere.

- Wenn venöses Blut verwendet wird, sollte EDTA als Antikoagulans und nicht als Heparin verwendet werden, da letztere normalerweise die Zellen verformt.

Häufige Fehler in der Färbung von Giemsa

In der Praxis dieser Färbung können Sie Fehler machen. Sie werden durch plötzliche Veränderungen der Tonalitäten der Strukturen belegt.

Extrem blaue Färbung

Es kann an:

- Sehr dicker Abstrich.

- Die Färbungszeit überschreiten.

- Unzureichend waschen.

- Verwendung von Reagenzien deutlich über dem neutralen pH -Wert (alkalisch).

Unter diesen Bedingungen werden die Farben der folgenden Strukturen so verzerrt, dass Erythrozyten anstatt Rosensalz zu färben. grau und so weiter wird es in den üblichen Farbtönen Abweichungen geben.

Übermäßig rosa Färbung

Es kann an:

- Unzureichende Färbungszeit.

- Längere oder übermäßige Wäsche.

- Schlecht trocknend.

- Verwendung sehr saurer Reagenzien.

In diesem speziellen Fall sind die Strukturen, die normalerweise blau gefärbt sind.

Beispiel: Erythrozyten haben eine starke helle oder orange rote Farbe, Kernchromatin sieht blassrosa aus und die eosinophilen Granulate werden aus hellem rotem hellem Färben gefärbt.

Vorhandensein von Niederschlägen im Abstrich

Die Ursachen können sein:

- Verwenden Sie schmutzige oder schlechte Scheiben.

- Lassen Sie den Abstrich nicht trocknen.

- Lassen Sie die Fixierungslösung zu lange.

- Unzureichende Wäsche am Ende der Färbung.

- Unzureichende Filtration oder Nichtfiltration des verwendeten Farbstoffs.

Vorhandensein morphologischer Artefakte

In den Abstrichen können morphologische Artefakte die Visualisierung und Interpretation der vorhandenen Strukturen behindern. Das ist wegen:

- Art des verwendeten Antikoagulans wie Heparin.

- Verwendung von schmutzigen, verschlechterten oder fettigen Blättern.

Speichermodus

Nach der Vorbereitung muss der Farbstoff bei Raumtemperatur (15-25 ° C) gehalten werden, um zu verhindern, dass der Farbstoff ausfällt. Es muss in einem gut geschlossenen Bernsteinbehälter aufbewahrt werden.

Verweise

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2. Panreac apprichem itw reags. Giemsa -Färbung. Version 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Spanien.
3. Clark, g. Färbeverfahren (1981). Williams & Willkins.