Hämatoxylin-Eosin-Färbungseigenschaften, Verwendungen, Techniken

Der Hämatoxylinfärbung - Eosin Es ist eine Färbungstechnik, die die Kombination von Hämatoxylin- und Eosinfarbstoffen verwendet. Dieses Farbstoff ist ein perfektes Duo, da Hämatoxylin als Basisfarbstoff und Eosin ein saurer Farbstoff ist.

Die Bezeichnung grundlegender oder saurer Farbstoffe bezieht sich nicht auf den pH -Wert, den sie in Lösung erhalten, sondern spricht von dem Anteil, der sich in Bezug auf anionische oder kationische Belastungen, die sie besitzen.

Zylindrisches Epithel mit Hämatoxylin - Eosin (He) Quelle: Todd Straus und Vladimir Osipov [CC von 3.0 (https: // creativecommons.Org/lizenzen/bis/3.0)]]

In diesem Sinne wird Hämatoxylin als grundlegender (kationischer) Farbstoff angesehen und weist daher eine Affinität zu Säurestrukturen auf, wie z. B. den Kern von Zellen. Während Eosin ein saurer (anionischer) Farbstoff ist, hat eine Affinität zu alkalischen oder grundlegenden Strukturen wie Zellzytoplasma.

Aus diesem Grund wird diese Kombination von Farbstoffen häufig zum Fleck verwendet. Die Kerne sind dunkelblau oder lila gefärbt und das rosa Zytoplasma.

Die Hämatoxylin-Eosin-Färbung ist eine der am häufigsten verwendeten Färbungstechniken im Bereich Histologie und Zytologie aufgrund seiner einfachen Handhabung und niedrigen Kosten. Es wird zur Visualisierung von Zellen, dicken Nervenfasern und dem Vorhandensein bestimmter Gewebe -Mikroorganismen wie Parasiten, Pilzen und Bakterien verwendet.

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Eigenschaften

Hämatoxylin

Hämatoxylin ist ein neutraler Farbstoff. Die Komponente, die Farbe (Chromophor) liefert, befindet sich jedoch im kationischen oder grundlegenden Zentrum des Moleküls. Daher seine Affinität zu sauren Strukturen. Seine chemische Formel ist c₁₆H₁₄ENTWEDER₆ und sein wissenschaftlicher Name 7.11b-dihydroindeno [2,1-C] Chromen-3, 4,6a, 9,10 (6)H) -Pentol.

Halten Sie die Zentren der Zellen hauptsächlich, da diese sehr reich an Nukleinsäuren sind. Sie können auch zytoplasmatische Einschlüsse viraler Herkunft färben.

So dass Hämatoxylin kann färben. Letzteres wird dienen, um den Stoff zu betrachten, dh, er wird als Untersuchung fungieren.

Wenn Hämatoxylin oxidiert wird, wird Hematein aufgerufen. Die Oxidation wird durch Sauerstoff (Alterung) des Reagens oder durch Substanzen erreicht, die seine Oxidation (chemische Oxidation) unterstützen, durch Substanzen.

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Eosina

Eosina ist ein Farbstoffrot oder Rosa. Es ist in Wasser unlöslich, obwohl es eine hydrosoluble Version gibt. Im Allgemeinen bereitet Eosina den Auflösungsalkohol vor (Ethanol bei 95).

Färben Sie Zytoplasmen, Muskelfasern, zytoplasmatische Organellen und Kollagen, färben Sie jedoch keine Zellzentren. Dies liegt daran.

Es gibt zwei Arten von Eosina, das "Y" und das "B". Eosina "y" ist als gelbe Eosina bekannt. Sein wissenschaftlicher Name ist Tetrabromfluorescein und seine chemische Formel ist c_zwanzigH₈Br₄ENTWEDER₅.

Andererseits wird Eosin "B" manchmal als bläulicher Erythrosin B bezeichnet. Sein wissenschaftlicher Name ist dibromodinitrofluorescein und die Formel ist c_zwanzigH₈Br₂N₂ENTWEDER₉. Beide sind sehr ähnlich und der Unterschied bei der Verwendung des einen oder anderen ist nicht wirklich auffällig. Das beliebteste ist jedoch Eosina "y".

Eosin hat die Eigenschaft, zwischen einer lebendigen und einer toten Zelle zu unterscheiden, da sie nur in der Lage ist, die Membran zu überqueren, um ihr Zytoplasma zu färben, wenn die Zellen tot sind, und das Zytoplasma der farblosen Zelle bleibt.

Anwendungen

Nervenfaserfärbung

Mit Hämatoxylin-Eosin können dicke Nervenfasern gefärbt und identifiziert werden. Es ist jedoch nicht nützlich, die dünnen Nervenfasern zu färben, denn um letzteres zu visualisieren, wird eine Silberfarbe benötigt.

Tinten histologischer Hautschnitte

In den Färbung der Hornhautschicht der Haut ist der Farbstoff, der wirkt, Eosin, da auf dieser Ebene die Zellen keinen Kern haben.

In der Granuloseschicht der Haut färben Hämatoxylin stark mit den Keratohialin -Granulaten, die in den körnigen Zellen gefunden werden. Im Gegenteil.

Eosin färbt das Zytoplasma aller Zellen und die Farbintensität kann zwischen einer Schicht und einer anderen variieren.

Färbefärbung mit Hämatoxylin-Eosin

Gómez und Mitarbeiter, 2005 zeigten sie, dass die Färbung mit Hämatoxylin -Eosin bei der Identifizierung von Fällen von Amibiasis durch wirksamer war Entamoeba histolytica Und Entamoeba unterschiedlich dass die frische Visualisierungsmethode (Kochsalzlösung und Lugollösung) bei Patienten mit akuter Durchfallkrankheit.

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Es wurde auch gezeigt, dass es eine große Empfindlichkeit zur Nachweis von Erythrophagozytose hat (Amöben mit Phagozyten -Erythrozyten).

Färbung histologischer Schnitte für die Diagnose einer Infektion

Walwyn und Mitarbeiter schlugen 2004 die Verwendung histologischer Färbung vor, um Mikroorganismen zu erkennen, die Infektionen verursachen.

Unter Verwendung der Färbung von Hämatoxylin-Eosin gelang es, Infektionen zu visualisieren, die durch verursacht wurden, durch Clostridium, Actinomyces, Spirile oder Candida. Sie gelang es auch, das Vorhandensein des Parasiten zu beobachten Sarkoptes Escabiei In Lederschnitten und viralen Einschlüssen durch Cytomegalovirus und Herpes in Schnitten verschiedener Gewebe.

Techniken

Für histologische Proben

Die Färbung histologischer Schnitte durchläuft eine Reihe von Schritten. Das erste besteht darin, den histologischen Schnitt zu erhalten. Dies muss parafiniert sein und dann die Schnitte (Ultra-Finanz) mit einem Mikrotom erhalten. Die Technik besteht aus den folgenden Schritten:

1 Malmation von überschüssigem Paraffin: Xilol oder HEMO -D können verwendet werden, 3-5 Minuten untertauchen.

2-Relief der Stichprobe: Dies wird erreicht, indem die Probe in verschiedene Konzentrationen von Alkoholen (Ethanol) in absteigender Reihenfolge (100 °, 90 °, 70 °) getaucht wird (Ethanol). In allen Fällen 7 Minuten.

3-Eliminierung von überschüssigem Alkohol: Dazu ist es 7 Minuten lang in Wasser eingetaucht.

4-Collection mit Hämatoxylin: Die Probe ist 6-10 Minuten auf ein Tablett, das Hämatoxylin enthält. Die Belichtungszeit hängt von der Größe und Dicke der Probe ab.

5-Eliminierung von überschüssigem Hämatoxylin: Wasser wurde 5 Minuten gewaschen und dann wird ein schneller Durchgang (10-20 Sekunden) durch saures Alkohol hergestellt. Anschließend 5 Minuten lang wieder mit Wasser gewaschen. Dann in Ethanol mit 96 ° pro 1 Minute eingetaucht.

6-farbig mit Eosina: Dazu ist die Probe 5 Minuten im Eosina -Tablett eingetaucht.

7-Deshydration der Probe: Dazu werden die Alkoholschalen (Ethanol) wieder verabschiedet, diesmal jedoch in aufsteigender Reihenfolge. (70 °, 90 °, 100 °). (5 Sekunden, 5 Sekunden, 1 Minute).

Klärung der 8-Stichprobe: Dies wird dem Xylol 5-10 Minuten ausgesetzt und trocknet dauerhaft mit Kanada-Balsam oder einem ähnlichen Material.

Für Stuhlproben auf der Suche nach UND. Histolytica

In einer Lamelle, die mit dem Kot des Patienten verlängert wurde und 5 Minuten lang mit 80% Alkohol befestigt ist. Das Blatt wird 5 Minuten lang in Hämatoxylin getaucht und sofort mit Wasser gewaschen.

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Anschließend ist es schnell in sauren Alkohol und dann in ammoniakales Wasser eingetaucht. Mit Wasser waschen. Es ist 5 Minuten in Eosina gefärbt. Die Probe wird dehydriert, wie in der vorherigen Technik erläutert und schließlich mit Xileno geklärt.

Reagenzvorbereitung

- Hämatoxylin

In einem Liter destilliertem Wasser 50 Gramm Kalium oder Ammoniumaluminiumsulfat auflösen. Wenn Sie vollständig gelöst sind, fügen Sie 1 Gramm kristallisierter Hämatoxylin hinzu. Beim Auflösen in seiner Gesamtheit werden 1 g Zitronensäure zusammen mit 50 g Chloralhydrat und 0,2 g Natriumiodinus zugesetzt.

Die Mischung wird 5 Minuten lang gekocht, dann ist es abkühlen und filtriert, um die festgelegten festen Partikel zu beseitigen, die geblieben sind. Das so hergestellte Reagenz kann sofort verwendet werden.

- Eosina

Es kann mit alkoholischer oder wässriger Basis zubereitet werden.

Alkoholisches Eosin

In 100 ml Ethanol bei 95 ° 0,5 Gramm Eosina "y" auflösen. Fügen Sie dann ein paar Tropfen Gletscher Essigsäure hinzu.

2% wässriges Eosin

In 1250 ml destilliertem Wasser 25 Gramm Eosin „Y“ -Hydrloslösliche auflösen. Fügen Sie dann ein paar Tropfen Gletscher Essigsäure hinzu.

Säurealkohol

Messen Sie 0,5 ml konzentrierter Salzsäure und vervollständigen Sie 100 ml mit absolutem Alkohol.

Ammoniakalwasser

Messen 0.5 ml konzentriertes Ammoniak und komplett 100 ml mit destilliertem Wasser.

Verweise

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