Kinyoun -Färbung

Cryptosporidium parvum mit Kinyoun -Färbung gefärbt. Quelle: Punlop Anusonpornperm, Wiikimedia Commons

Was ist Kinyouns Färbung??

Der Kinyoun -Färbung Es handelt sich um eine Färbungstechnik, die zum Färben von Bakterien und säuremalkoholresistenten Parasiten verwendet wird. Er wurde aus der Modifikation von Ziehl-Neelsens Färbung geboren. Beide Techniken werden auf die gleiche Weise interpretiert, unterscheiden sich jedoch in zwei Elementen: Bei der Herstellung des Hauptreagens und bei der die Kinyoun -Technik keine Wärme verwendet.

Aus diesem Grund ist es auch als Ziehl-Neelsen in kaltem modifiziertem oder Kinyouns Kaltfärbung bekannt. Ist für die Farbe von angezeigt Mycobacterium tuberculosis, Leprae Mycobacterium, Atypische Mykobakterien, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris Und Cyclosporras Cayetanensis.

Es ist erwähnenswert Nocardias Sie sind mit dieser Technik schwach gefärbt, da sie teilweise saurer Alkohol sind. Für dieses Genre gibt es also eine Modifikation der Methodik.

Die Technik von Kinyoun wurde wiederum mit der von Didier modifizierten Trichromtechnik zur Erkennung von Coccidios kombiniert (Cryptosporidium parvum Und Isospora Belli) und mikrosporidäre Sporen (Enterocytozoon Bieneusi Und Enchelitozoon intestinalis).

Basis

Das Hauptreagenz der Färbung ist Carbolfucsin oder Fenicade Fuchsin, das die Eigenschaft hat, sich den vorhandenen carbolischen Säuren in der Ritterzellwand anzuschließen, die reich an Lipiden (Mykolsäuren) von Mycobakterien und bestimmten Parasiten sind.

Diese Vereinigung wird nicht von der Säure -Defalsäure entgegengewirkt, daher werden Mikroorganismen als resistente Alkoholsäure definiert.

Im Gegensatz zur Ziehl-Neelsen-Technik, die den Farbstoff durch Hitze festlegt, ist dieser Schritt bei der Kinyoun-Technik nicht erforderlich, da die Fenicade Fuchsin-Lösung, die hergestellt wird, eine hohe Phenolkonzentration enthält.

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Das Phenol löst das Lipidmaterial der Zellwand, das den Eintritt des Carbolfucsin -Farbstoffs ermöglicht. Nachdem der Farbstoff eingedrungen ist, ist es trotz des Waschens mit Alkohol säurlich festgelegt.

Auf diese Weise nehmen resistente Alkoholsäure -Mikroorganismen die charakteristische rote Farbe an, während alles, was nicht saurer Alkohol ist, verfärbt und blau gefärbt ist.

Technik

Materialien

• Modifizierter phönizierter Fuchsin.
• Alkoholsäure.
• Methylenblau.

Kinyoun Phönizierte Fuchsina -Vorbereitung

• Basis Fuchsina: 4 gr.
• Phenol: 8 ml.
• Alkohol (95%): 20 ml.
• Destilliertes Wasser: 100 ml.

Das Grundfuchsin in Alkohol sollte langsam gelöst werden und ständig mischen. Anschließend schmilzt das kristallisierte Phenol in einem Badezimmer bei 56 ° C. Nach der Auflösung werden 8 ml zu der zuvor hergestellten Fuchsin -Lösung hinzugefügt.

Alkoholsäurezubereitung

• Konzentrierte Salzsäure: 3 ml.
• Ethanol (95%): 97 ml.

Sie müssen messen, verbinden und mischen.

Methylenblau -Kontrastfarbstoffvorbereitung

• Methylenblau: 0.3 g.
• Destilliertes Wasser: 100 ml.

Es wiegt und löst sich auf.

Kinyouns Färbungstechnik

• Bereiten Sie einen Abstrich direkt aus der Probe vor, die unter anderem Sputum, Lungenflüssigkeit, Urinsediment, Cerebrospinalflüssigkeit oder Kot oder aus einer Suspension von Mikroorganismen aus reinen Kolonien, die in Medienmedien entwickelt wurden, sein können.
• Fix den Abstrich mit Hitze.
• Legen Sie den Abstrich auf die Färbungbrücke und bedecken Sie das Fenicade Fuchsin -Reagenz von Kinyoun, die zubereitet werden. 3 oder 5 Minuten stehen lassen.
• Mit destilliertem Wasser waschen.
• Dekorieren Sie 3 Minuten mit saurem Alkohol und waschen Sie erneut mit destilliertem Wasser.
• Dekorieren Sie wieder 1 oder 2 Minuten mit saurem Alkohol, bis es mehr färbt.
• Mit destilliertem Wasser waschen und abtropfen lassen, den Objektträger in vertikale Position legen.
• Decken Sie die Zubereitung mit Methylenblau ab und lassen Sie 4 Minuten lang.
• Mit destilliertem Wasser waschen und Luft trocknen lassen.
• Untersuchen Sie 40x und dann 100x.

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Wenn Sie die Färbung resistenter Alkoholsäure -Mikroorganismen verbessern und beschleunigen möchten, wird 1 Tropfen eines Feuchtigkeitsmittels (wie Frosch Nr. 7) zu 30 oder 40 ml Fenicate Fuchsin von Kinyoun zugegeben.

Einige Laboratorien verändern den blauen Methylenkontrastfarbstoff aufgrund hellgrüner oder Pikrinsäure. Der erste verleiht dem Hintergrund eine grüne Farbe und die zweite erzeugt eine gelbe Farbe.

Spezielle Kinyoun -Technik für Nocardias

Verbesserung der Färbung von Geschlechtsbakterien Nokardie Eine Modifikation der Färbung von Kinyoun wird verwendet. Die Technik ist wie folgt:

• Decken Sie den Abstrich 3 Minuten lang mit Fenicade Fuchsina von Kinyoun ab.
• Mit destilliertem Wasser waschen.
• Kurz mit 3% vorbereiteten Alkohol verfärben, bis es mehr färbt.
• Wieder mit destilliertem Wasser waschen.
• Decken Sie die Präparation mit Methylenblau ab und lassen Sie Act 30 Sekunden lang auf.
• Mit destilliertem Wasser waschen und Luft trocknen lassen.

Kombinierte Technik der durch Didier modifizierten Phönizierung und Trichromfuchsina

Diese Technik wird für die Analyse von Stuhlproben auf der Suche nach Coccidios und Sporen von empfohlen Microsporidium sp gleichzeitig. Das zu befolgende Verfahren lautet wie folgt:

• Decken Sie den Abstrich mit Fenicade Fuchsina von Kinyoun 10 Minuten lang ab.
• Entfernen Sie den Farbstoff und waschen Sie mit destilliertem Wasser.
• Dekorieren Sie 30 Sekunden lang mit Salzsäurealkohol.
• Wieder mit destilliertem Wasser waschen.
• Decken Sie den Abstrich mit trichromischer Lösung 30 Minuten bei 37 ° C ab.
• Mit destilliertem Wasser waschen.
• 10 Sekunden lang mit Essigsäurealkohol dekorieren.
• Waschen Sie den Geruch 30 Sekunden lang mit 95% Ethanol.

QA

Als positive Kontrolle werden Abstrich mit Stämmen von hergestellt Mycobacterium tuberculosis und sie sind mit den Reagenzien gefärbt, um zu überprüfen, ob die Bakterien die richtige Farbe haben (Rot-Fucsie).

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Negative Kontrollen können auch verwendet werden, indem Abstrich mit jedem Stamm, der nicht resistent ist.

Kinyoun-Technik im Vergleich zur Ziehl-Neelsen-Technik

Kinyouns Technik ist einfacher, da er den Durchgang des Heizens beseitigt, aber sein Hauptvorteil besteht darin. Daher ist Kinyouns Färbung sicherer für das Personal, das für die Durchführung der Färbung zuständig ist.

Es ist wichtig zu berücksichtigen, dass Sie vorsichtig sein müssen.

Bei den Nachteilen zeigt ein negativer Abstrich nicht unbedingt an, dass der Mikroorganismus nicht vorhanden ist. Darüber hinaus kann das Vorhandensein von zellulären Detritus falsch positive Aspekte verursachen, was Verwirrung in der Diagnose erzeugt.

Referenz

1. Angewandte klinische Chemie. BK Kinyoun Kit. Cromakit erholte sich.Ist.
2. Orozco-Rico, m. Kinyoun -Färbung und zwei Coccidios in HIV. MD Medical Magazine. 
3. Forbes, b., Sahm, d., Weissfeld, a. Mikrobiologische Diagnose von Bailey & Scott. Pan -American Editorial s.ZU.