Mai Grunwald-Giemsa Fleck

Chronische Myeloid-Leukämie-Probe mit Färbung von May Grunwald-Giemsa. Quelle: Paulo Henrique Orlandi Mourao, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Was ist May Grunwald-Giemas Färbung?

Der Mai Grunwald-Giemsa Fleck, O Pappenheim, ist eine unterschiedliche Färbungstechnik, die die Reagenzien Giemsa mischt und May Grünwald. Es wird zur Differenzierung normaler und abnormaler Blutzellen in peripheren Blutstrich und Knochenmark sowie zur Färbung histologischer Schnitte und zytologischer Proben verwendet.

Beide Reagenzien -Giemsa und May Grunwald - werden von der Romanowsky -Färbung abgeleitet, einer Technik, die auf der Kombination von Säure und Basisfarbstoffen basiert.

Giemsa verbesserte die Technik, indem sie die Mischung aus Eosin, Methylenblau und seinen Derivaten mit Glycerin stabilisierte. Stattdessen verwendete May Grünwald Eosin und Methylenblau, indem sie das Methanol als Lösungsmittel verwendet. Diese strategische Kombination hat hervorragende Ergebnisse erzielt.

Während die Beobachtung der Zellmorphologie ähnlich den Farben von Giemsa und Wright wirkt, verbessert diese Technik die oben genannte Verfeinerung der Färbung der Parasiten, die Malaria verursachen, das Böse von Chagas, Leishmaniasis und Trichomoniasis.

Darüber hinaus hat es sich gezeigt, dass es für die zytologische Untersuchung der spermischen Flüssigkeit sehr nützlich ist. Es wurde nicht nur hervorgehoben, indem die morphologischen Eigenschaften von Spermien gezeigt werden, sondern auch, dass Leukozyten, Epithelzellen und Spermatogenesezellen stark differenziert werden können.

Basis

Die Technik folgt der Grundlage der Färbung von Romanowsky, bei der saure Farbstoffe eine selektive Affinität für grundlegende Zellkomponenten haben und saure Komponenten grundlegende Farbstoffe anziehen.

Mit anderen Worten, sowohl Zellstrukturen als auch Farbstoffe haben positive oder negative elektrische Belastungen, gleiche Belastungen werden abgewiesen und unterschiedliche Lasten ziehen an.

Beispielsweise werden grundlegende Farbstoffe wie Methylenblau positiv beladen und von negativ belasteten Strukturen angezogen. Deshalb färbt sich dieser Farbstoff die Kerne, die reich an DNA und RNA sind, die negativ beladene Phosphate -Gruppen haben.

Das Granulat der basophilen segmentierten und die Zytoplasmen der mononuklearen weißen Blutkörperchen, die ARN enthalten.

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Außerdem hat der saure Farbstoff eine negative Belastung und bindet daher an positiv belastete Strukturen wie Erythrozyten und Granulate der segmentierten Eosinophile. Wie für die Granulate der segmentierten Neutrophile, beide Farbstoffe reparieren.

Vielfalt von Farbstoffen

In dieser Technik eine Kombination von Reaktionen zwischen orthochromatischen und metakromatischen Farbkoexisten. Ortchromatisch (eosin und methylenblau) sind an der Zellstruktur fixiert, mit der sie verwandt sind, und liefern eine stabile Farbe, die nicht variiert.

Andererseits metakromatisch (diejenigen, die von Methylenblau, Azurblau und Azure B stammen), variiert ihre ursprüngliche Farbe, sobald sie von der spezifischen Struktur vereint sind. Es kann sogar eine Vielzahl von Nuancen geben.

Schließlich erfordert der Schritt, der die May -Grunwald -Lösung unternimmt. Um zu passieren, muss der Farbstoff polar oder ionisieren und somit in der Lage sein, die verwandten Strukturen auszurüsten und zu betrachten.

Technik

Materialien

• Folie.
• Farbbrücken.
• Mai Grünwald Lösung.
• Giemsa -Färbung.
• Destilliertes Wasser.

Konzentriert May grunwald Farbstoff

0,25 g Methylen-Eosin-Blau (Farbstoff nach May grunwald) und sich in 100 ml Methanol auflösen, sollte gewichtet werden. Dann ist die Vorbereitung 1 Stunde lang gemischt und 24 Stunden stehen lassen. Nach der Zeit wird es gefiltert.

Um die Technik anzuwenden, wird der Mai -Grünwald -Farbstoff wie folgt verdünnt: Für 200 ml verdünnter Farbstoff werden 30 ml der konzentrierten Lösung gemessen, 20 ml Pufferlösung und 150 ml destilliertes Wasser, eingestellt an pH 7 eingestellt.2-7.3. Anschließend ist es gemischt und gefiltert.

Konzentrierte Giemsa -Färbung

0,5 g von Azur-eosin-Peak von Methylen (Farbstoff nach Giemsa), in 50 ml Methanol auflösen und 50 ml Glycerin hinzufügen.

Um die Technik auszuführen, ist 1:10 mit Pufferlösung verdünnt und lassen Sie 10 Minuten lang stehen. Es kann bei Bedarf gefiltert werden.

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Vorbereitung der Pufferlösung bei pH 7.2

Sie sollten gewogen werden:

• 40 mg Di-Hydrogen-Kaliumphosphat (KH2PO4).
• 151 mg Wasserstoff di-syphotischer Phosphat 12-Hydrat (Na2HPO4).

Beide Verbindungen werden in 100 ml Wasser gelöst.

Sanguine- oder Knochenmedol Srols Tincion -Verfahren

Es gibt zwei Modalitäten: einen Klassiker und einen schnellen.

Klassische Modalität

• Decken Sie den Geruch für 2 oder 3 Minuten mit der May Grunwald -Lösung verdünnt ab.
• Waschen Sie mit gepuffertem destilliertem Wasser, um die vorherige Lösung zu entfernen.
• Decken Sie mit der gleichen gepufferten Waschlösung ab und lassen Sie 1 Minute. Die Idee ist, dass der vordere Farbstoff an den Strukturen fixiert ist und dass gleichzeitig die Zellen hydratisiert sind.
• Fügen Sie 12 verdünnte Giemsa -Tinkturentropfen auf gepuffert. 15 oder 20 Minuten stehen lassen.
• Waschen Sie den Abstrich mit gepuffertem destilliertem Wasser und legen Sie es in die Luft trocknen.
• Fokus und beobachten Sie in einem optischen Mikroskop die Färbeblutzellen unter Verwendung des 40 -fachen Ziels. Bei Bedarf kann 100x verwendet werden.

Schnellmodus

• Decken Sie den Abstrich mit dem May Grunwald -Farbstoff 1 Minute verdünnt.
• Mit gepuffertem destilliertem Wasser waschen.
• Mit gepuffertem Wasser abdecken und 1 Minute stehen lassen.
• Legen Sie den verdünnten Giemsa -Farbstoff und lassen Sie sie 5 Minuten lang lassen.
• Mit gepuffertem destilliertem Wasser waschen und Luft trocknen lassen.

Die hier beschriebenen Techniken sind ein Leitfaden, aber es muss berücksichtigt werden. Es ist ratsam, die Schritte ausschließlich durch jedes Handelshaus zu befolgen.

Erweiterte Spermienflüssigkeitsfärbungstechnik

• Abdecken.
• Entfernen Sie den Farbstoff und waschen Sie mit destilliertem Wasser.
• Legen Sie eine verdünnte Gieessa -Schicht (1:10) 15 Minuten lang in destilliertem Wasser.
• Entfernen Sie den Farbstoff und waschen Sie mit destilliertem Wasser.
• Trocknen lassen und im Mikroskop beobachten.

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Wichtige Spezifikationen

Die Technik besagt, dass die Reagenzien und Waschlösungen einen pH -Wert an 7 angepasst haben.2-7.3, so dass die Affinitäten der Farbstoffe durch Zellstrukturen nicht verzerrt sind und die erwartete endgültige Farbe nicht variiert.

Anwendungen

• Diese Technik wird von klinischen Labors verwendet, um periphere Blutabreibe und Knochenmark, Gewebeschnitte und Zytologien zu färben.
• Im hämatologischen Bereich ist diese Technik für die Untersuchung von Anomalien der Zellen in Bezug auf Form, Größe und Anzahl von entscheidender Bedeutung. Es ist ein sehr wertvolles Instrument für die Diagnose bestimmter Krankheiten wie Leukämie und Anämien.
• Es präsentiert einen hervorragenden Nutzen, wenn es um Parasiten im hämatologischen Gebiet gesucht wird (Plasmodium sp Und Cruzi Tripaosoma) oder histologisch (Leishmanias sp).
• Was die vaginale Zytologie betrifft, ist diese Technik für die Beobachtung von besonders vorteilhaft Trichomonas vaginalis. Dies ist ein wichtiger Befund, da seine Anwesenheit Karzinomgemälde simuliert Vor Ort Das verschwindet dann, wenn der Parasit beseitigt wird.
• Es war ein ideales Instrument für die Untersuchung von Spermienproben, da es wertvolle Informationen über die Qualität von Spermien liefert. Die Daten, die sie anbietet, müssen hauptsächlich mit Anzahl und Morphologie sowie mit begleitenden Zellen vorhanden sein, die möglicherweise vorhanden sein und von entscheidender Bedeutung sind und von entscheidender Bedeutung sind, wie Keimzellen, Leukozyten und Epithelzellen. Mit dieser Analyse ist es möglich, Abnormalitäten zu beschreiben, die in Spermien auf Kopf, Hals, Mittelstück und Hauptstück beobachtet wurden. Darüber hinaus können sie auch dazu beitragen, Fälle von Hosospermie (Vorhandensein von roten Blutkörperchen) und Leukospermie oder Piospermie zu zeigen (Anstieg der Anzahl der Leukozyten in Samen).

Verweise

1. Merck KGAA Labor. May Grünwald Eosina Blue Microskopy Methylen.
2. Mai-Grunwald-Giemsa-Färbung. Von es geborgen.Wikipedia.Org.
3. Glaschemikalien Panreac Laboratory. Reagenzien für histologische Techniken, Hämatologie und Mikrobiologie. Aus GlaSchemikalien geborgen.com.