Wright -Färbung

Verschiedene periphere Blutschärfe mit Wright -Färbung gefärbt. ZU. Akute Leukämie b. Plasmodium vivax im Erythrozyten. C. Plasmodium falciparum, Macrogametocito. D. Lymphozyten

Was ist Wrights Färbung?

Der Wright -Färbung Es handelt sich um eine Färbungstechnik des amerikanischen Pathologen James Homer Wright im Jahr 1902, basierend auf der Färbung von Romanowsky, um verschiedene Arten von Blutzellen besser zu unterscheiden. 

Diese Färbung ist polychromatisch, was bedeutet, dass sie abhängig von der Struktur, die den Farbstoff absorbiert, mehrere Farben erzeugt. Diese Färbungstechnik wurde weit verbreitet, um unterschiedliche weiße Blutkörperchen durchzuführen und die Morphologie von roten Blutkörperchen, Blutplättchen und Leukozyten in peripherem Blut und Knochenmark zu untersuchen.

Seine Anwendung ist sehr wichtig, da in den verschiedenen Zelllinien des Blutes Anomalien beobachtet werden können, was die Diagnose von Krankheiten wie Leukämie oder bakterielle oder parasitäre Infektionen erleichtert.

Vielleicht sind dies die häufigsten Anwendungen, bei denen diese Technik verwendet wird. Sie sind jedoch nicht die einzigen. Es ist auch in anderen Proben als Blut und Knochenmark nützlich.

Gründung von Wrights Färbung

Wrights Färbung wurde aus dem Romanowsky -Fleck geboren.

Die Mischung von Farbstoffen, die bei der Wright -Färbung verwendet werden.

Die Komponenten, die für die Bereitstellung der typischen Farben der Färbung von Wright verantwortlich sind, sind blau B und Eosina und. Der beobachtete Effekt hängt von der Verbindung der Farbstoffe mit den chemischen Strukturen und den Wechselwirkungen von Blau B und Eosin und ab und hängt.

Säurestrukturen wie Nukleinsäuren, Kernproteine ​​und unreife reaktive Zytoplasma einiger Arten von Zellen setzten Blau B (Basisfärbung).

Während grundlegende Strukturen wie Hämoglobin unter anderem das Granulat der segmentierten Eosinophile unter anderem das Eosin und die (Säurefarbe) setzen.

Das Fleckenergebnis kann durch verschiedene Faktoren beeinflusst werden, wie den pH -Wert des Wright -Farbstoffs, die Dämpfung und Waschlösung sowie die Färbungs- und Fixzeitzeit.

Daher ist jeder Schritt bei der Herstellung der Reagenzien entscheidend und muss durchgeführt werden, um jedes Detail zu sorgen.

Materialien

Wright Dye. Für 100 ml ist es erforderlich:

Gewicht 0.3 g Wrightfarbstoff, 97 ml Methanol und 3 ml Glycerin messen.

Vorbereitung

In einem Mörtel die starke Menge an Wrights Farbstoff und allmählich Glycerin einbeziehen, bis sich der Staub vollständig aufgelöst hat.

Anschließend wird Methanol zugegeben, gemischt und in eine Bernsteinflasche gegossen.

Vor der Verwendung muss die Lösung mit weichen Bewegungen und Filter gerührt werden.

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Gepufferte Pufferlösung

In einem Liter destilliertem Wasser wird 3,76 g Dinatriumhydrophosphat zugegeben (Na₂HPO₄   2H₂0) plus 2,1 g dihydrogener Kaliumphosphat (kh₂Po₄).

Mischen Sie sehr gut, bis Sie alle eingebauten Reagenzien auflösen. Stellen Sie den pH auf 7.2 ein.  Gießen Sie in ein Glas und halten Sie sich bei Raumtemperatur.

Zusätzliche Materialien, die zur Färbung erforderlich sind

Darüber hinaus sind andere Materialien erforderlich, um die Färbungstechnik durchzuführen. ).

Wright -Färbungskomponenten

Methanol

Alkohol (Methanol) dient als Fixierer des Blutverschmutzers zum Rutschen.

Grundsätzlich handelt es sich. Ihre Funktion besteht daher darin, Proteine ​​zu koagulieren und sie unlöslich zu machen, ohne denaturiert zu werden.

Methanol ist das am häufigsten verwendete Reagenz, um Abstrich in allen Labors zu reparieren, da es bessere Ergebnisse liefert als diejenigen, die mit Ethanol erhalten wurden. Die ideale Konzentration beträgt 99%.

Der Stoßdämpfer

Der Stoßdämpfer (gepufferte Lösung) hat die Funktion, sich anzupassen oder aufrechtzuerhalten.

Der Durchgang der Fixierung mit Methanol dehydriert Zellen und Stoßdämpfer hilft, sie zu rehydrieren.

Eosina (y)

Eosina hat eine Affinität zu Grundkomponenten, da es sich um einen sauren Farbstoff handelt. Zwei Arten von Eosin sind einander sehr ähnlich, so sehr, dass beide verwendet werden können, was das gleiche Ergebnis erzielt.

Einer wird Eosin und gelbe Eosin oder Tetrabromofluorescein und der andere Eosin B, Bläule E Eritrosin oder Dibromodyitrofluorescein genannt. Eosin und ist jedoch derjenige, der am häufigsten verwendet wird.

Die wichtigste Eigenschaft dieses Farbstoffs ist die negative Polarität, die sie von zellulären Strukturen mit positiver Belastung angezogen hat.

Methylenblau

Ist der Basisfarbstoff. Die Haupteigenschaft ist Metakromie, dh nicht alle Strukturen werden von derselben Farbe gefärbt, sie hängt von der chemischen Zusammensetzung der Färben der Strukturen ab.

Einige werden hell oder dunkelblau und andere von dunkelviolettem oder blassen Lila.

Technik

1. Machen Sie die erweiterte Probe so, dass es einen dünnen Film gibt, sei es auf einer Folie oder einer Abdeckung.
2. Lassen Sie die Luft ungefähr 2 Stunden trocknen.
3. Legen Sie den trockenen Geruch auf die Färbungbrücke oder den Fleckeneimer mit der ausgedehnten Probe.
4. Decken Sie das Blatt mit dem Wright -Tropfen von Gota ab, um die gesamte Oberfläche abzudecken. Act für 5-8 Minuten lassen.
5. Der Farbstoff muss den Rutschen vollständig bedecken, ohne durch die Kanten zu verschütten. Wenn es während der Färbung zu verdunsten beginnt, müssen zusätzliche Tropfen platziert werden.
6. Anschließend fügen Sie eine gleiche Menge des Stoßdämpfers hinzu, blasen Sie ein wenig, bis die charakteristische metallische Helligkeit auftritt. Zahm 10 bis 15 Minuten.
7. Mit Leitungswasser waschen und den weichen Strahl platzieren, bis das Blatt rosa aussieht.
8. Mit einem mit Alkohol imprägnierten Gaze eliminierte die Farbfärbung im hinteren Teil des Rutschens.
9. Lassen Sie den Abstrich trocknen, bevor Sie das Immersionöl platzieren, um es im Mikroskop zu sichern.

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Verwendet/Anwendungen der Wright -Färbung

Hämatologie

Es ist ideal für die Färbung von peripherem Blutabfall.

Aufgrund der chemischen Eigenschaften dieser Kombination von Farbsträgen können Zellstrukturen leicht erkannt werden und können die verschiedenen an vorliegenden Zellen unterscheidenden Arten unterscheiden.

Laufende Nase

Diese Technik ist sehr nützlich, um Nasensekretionszellen (Epithelzellen, segmentierte Eosinophile, polymorphkern) bei der Diagnose von allergischer Rhinitis zu identifizieren.

Parasitologie

In diesem Sinne war es für das Studium nützlich Leishmania sp Innerhalb der Histiozyten des subkutanen Zellgewebes in Hautgeschwüren. Es wird auch verwendet, um Leukozyten in der Stuhlprobe (Fäkalleukogramm) zu identifizieren.

In diesem Fall ist es für den Arzt von Interesse zu wissen, ob die im Kot vorhandene Leukozytose durch polymorphonukleare oder mononukleare erfolgt. Dieser Befund im Fäkalienleukogramm leitet, ob es sich um eine bakterielle bzw. Virusinfektion handelt.

Andererseits können die Parasiten, die im Blut zirkulieren. Die gesuchten Parasiten sind Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii und Filarien und im Tierarzt ist bei der Suche nach nützlich Theilery Equ Und Babesia Caballi, Kausalmittel des Babys, insbesondere bei Pferden.

Die Färbung von Wright und auch der von Giemsa ermöglicht es, Hämoparasiten von normalen zellulären Komponenten zu unterscheiden. Dafür können zwei Arten von erweiterten verwendet werden:

Fein erweitert

Das Blut wird als dünner Film auf einer Folie ausgedehnt. Wright -Färbung, die die Eigenschaften des Kerns und des Zytoplasmas enthüllt.

Dicker Tropfen

Diese Methodik wird verwendet, um das Vorhandensein von Parasiten in einer größeren Menge Blut zu untersuchen.

Dazu wird ein großer Blutabfall auf einen Rutschen gestellt. Dort nach oben müssen Sie Defibrinine und größere und größere Kreise aus der Mitte aus der Kante eines anderen Folie machen.

Um die Parasiten im dicken Geruch zu beobachten, müssen Erythrozyten mit Wasser aufgeführt werden.

Infektionen der Atemwege

Auf Atemebene ist diese Technik auch nützlich, da die in Sputum -Proben vorhandenen Zellen Bronchial- oder Bronchalveolarwäsche wichtig sind.

Hier können Sie polymorphkernige Zellen und mononukleäre Zellen unterscheiden.

Bakteriologie

Die Verwendung dieser Technik in der Bakteriologie ist begrenzt, da sie nicht gut ist, Bakterien zu färben. Daher werden für ihre Färbung andere spezielle Färbungstechniken verwendet.

Es wurde jedoch verwendet, um Epithelzellen mit Einschlusskörpern zu durchsuchen Chlamydien trachomatis Im Abstrich von Harnröhren oder endozervikaler Schleimhaut, obwohl es erkannt werden muss, dass es nicht die beste Methode ist.

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Es ist auch möglich, unter roten Blutkörperchen zu beobachten Borrelia burgdorferi Bei infizierten Patienten sowie bei Morulas oder Körpern der Einbeziehung von Ehrlichia sp Im Zytoplasma von Lymphozyten, Monozyten oder Neutrophilen in einem Blutstrich.

Pilzkunde

Er Histoplasma capsulatum Es ist ein häufig diagnostizierter pathogener Pilz durch mikroskopische Beobachtung verschiedener Gewebeproben, die mit Wright -Färbung färben.

Wie werden die Blutprobenstrukturen mit Wrights Färbung beobachtet??

Empfehlungen für das Tincion von Sanguineous Srols für das Hämogramm -Lesen. Quelle: Retamales E, Mazo V. Public Health Institute, Regierung von Chile

Empfehlungen für gute Flecken

- Die Verlängerungen von Blutproben müssen spontan trocknen. Die Abstriche sollten so dünn wie möglich sein, um eine bessere Fixierung des Farbstoffs zu erhalten und überlappend zu vermeiden.

- Für hochwertige Färben ist es ratsam. Andererseits ist die ideale Probe Kapillarblut ohne Antikoagulans.

- Wenn jedoch venöses Blut verwendet wird, sollte es als EDTA und nicht -heparin -Antikoagulans verwendet werden, da letztere zelluläre Strukturen verformen können.

- Um die Verschlechterung des vorbereiteten Farbstoffs zu vermeiden, muss es an trockenen Stellen gespeichert werden.

- Während des Waschprozesses wird die Verwendung von Wasser, die an den neutralen pH eingestellt sind, empfohlen.

- Es ist ratsam, die im Labor verwendeten Färbemethoden von Zeit zu Zeit zu testen.

Dies geschieht Fleckenproben oder erweiterte Muster als Qualitätskontrolle. Dieser Schritt ist wichtig, da sichergestellt wird, dass die Färbung ordnungsgemäß vorbereitet ist und die Farbzeiten gut standardisiert sind.

Wenn das Musterblatt stark gefärbt ist, müssen Probleme gelöst werden.

Häufige Fehler in Wrights Färbung

Sehr blasse Färbung

Die sehr blassen Abstriche sind normalerweise auf eine sehr kurze Fleckenzeit oder eine sehr übertriebene Wäsche zurückzuführen. Es wird korrigiert, indem die Kontaktzeit mit dem Farbstoff verlangsamt oder die Waschzeit verringert wird.

Farbstoffglocken

Das Vorhandensein von Färben fällt im Geruch aus, kann mehrere Ursachen haben. Am häufigsten sind: Verwendung des nicht filterierten Farbstoffs, Farbstoff auf ungleichmäßige Färbungbrücken, Tragen Sie schmutzige Blätter mit Staub oder Fett, machen Sie bei Fertigstellung der Färbung nicht eine gute Wäsche.

Reiben mit extrem rötlicher oder blauer Färbung

Der Stoßdämpfer ist für den pH -Wert des Farbstoffs verantwortlich. Farben mit pH unterhalb der angegebenen (Säure) führen dazu, sehr rötliche Gerüche zu erhalten.

Wenn der pH -Wert des Farbstoffs über (alkalisch) ist.

Speichermodus

Das Reagenz muss bei Raumtemperatur gelagert werden.

Verweise

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3. Retamales, e., Mazo, v. Public Health Institute of Chile. Empfehlungen für das Tincion von Sanguineous Srols für das Hämogramm -Lesen.