Ziehl-Neelsen-Färbung

Mycobacterium tuberculosis visualisiert mit Färbung von Ziehl-Neelsen

Was ist Ziehl-Neelsens Färbung??

Der Ziehl-Neelsen-Färbung In einer Farbechnik zur Identifizierung resistenter alkoholischer Säure-Mikroorganismen (AAR). Der Name dieses mikrobiologischen Verfahrens bezieht sich auf seine Autoren: den Bakteriologen Franz Ziehl und der Pathologe Friedrich Neelsen.

Diese Technik ist ein unterschiedlicher Farbtyp, der die Verwendung verschiedener Farbstoffe impliziert, um Kontrast zwischen den Strukturen zu schaffen, die zu beobachten, zu unterscheiden und anschließend zu identifizieren wollen. Die Färbung von Ziehl-Neelsen dient dazu, bestimmte Arten von Mikroorganismen zu identifizieren.

Einige dieser Mikroorganismen sind Mykobakterien (zum Beispiel, Mycobacterium tuberculosis), Nocardias (zum Beispiel, Nokardie sp.) und einige einzellige Parasiten (zum Beispiel, Cryptosporidium parvum). Viele der Bakterien können durch eine gemeinsame Technik als Gram -Färbung eingestuft werden.

Einige Bakteriengruppen benötigen jedoch andere Methoden, um sie zu identifizieren. Techniken wie Ziehl-Neelsen-Färbung erfordern Wärmekombinationen mit Wärme, um die erste an der Zellwand zu reparieren.

Dann kommt ein Verfärbungsverfahren, mit dem zwei Ergebnisse erzielt werden können: Resistenz oder Empfindlichkeit gegenüber Säure- und Alkoholverfärbungen.

Basis

Die Grundlage dieser Färbungstechnik basiert auf den Eigenschaften der Zellwand dieser Mikroorganismen. Die Wand wird durch eine Art Fettsäuren gebildet, die Mykolsäuren genannt werden; Diese sind durch die Darstellung sehr langer Ketten gekennzeichnet.

Wenn Fettsäuren sehr lange Strukturen haben, können diese die Farbstoffe leichter behalten. Einige Bakteriengenres sind aufgrund des hohen Gehalts an Mykolsäuren aus der Zellwand sehr schwer zu färben.

Bei der Ziehl-Neelsen-Färbung wird die Phenolverbindung Fuchsin Carbol verwendet, ein Grundfarbstoff. Dies hat die Fähigkeit, mit den Fettsäuren der Zellwand zu interagieren, die bei Raumtemperatur von Cerosa -Textur stammt.

Kann Ihnen dienen: Monosaccharide

Die Färbung mit Fuchsin -Carbol wird in Gegenwart von Hitze verbessert, da das Wachs schmilzt und die Farbmoleküle schneller in die Zellwand bewegt werden.

Die später verwendete Säure dient dazu, die nicht gefärbten Zellen zu verfärben, weil ihre Wand nicht mit dem Farbstoff zusammenhängt; Daher kann die Kraft der Säuresäure den Säurefarbstoff eliminieren. Die Zellen, die dieser Verfärbung widerstehen.

Sekundärfarbstoff

Nach der Verfärbung der Probe steht dies im Gegensatz zu einem anderen Farbstoff namens Sekundärfarbstoff. Mustileo Blue oder Malachite Green wird im Allgemeinen verwendet.

Der sekundäre Farbstoff färbt das Hintergrundmaterial und schafft folglich Kontrast zu den Strukturen, die im ersten Schritt gefärbt wurden. Nur verfärbte Zellen absorbieren den zweiten Farbstoff (Gegenunterkünfte) und nehmen ihre Farbe, während säureresistente Zellen die rote Farbe behalten.

Dieses Verfahren wird häufig zur Identifizierung von verwendet Mycobacterium tuberculosis Und Mycobacterium leprae, die als resistente Säure-Alkohol-Bazillen bezeichnet werden.

Reagenzien

Primärer Farbstoff

0,3 % Fuchsin Carbol wird verwendet (gefiltert). Dieser Farbstoff wird aus einer Mischung von Alkoholen hergestellt: Ethanolphenol (90 %) oder Methanol (95 %) und in dieser Mischung 3 Gramm Basisfuchsin löst sich auf.

Lösung abstellen

In diesem Schritt können Sie 3 % Alkoholsäurelösungen oder 25 % Schwefelsäure verwenden.

Sekundäre Färbung (Gegenkollegen)

Der am häufigsten verwendete Farbstoff, der in den Proben kontrastiert wird. Andere können jedoch auch verwendet werden, z. B. 0,5 % Malachitgrün.

Kann Ihnen dienen: Timina

Technik

Nematode mit Ziehl-Neelsen angezeigt

Säure-Opt-Färbungsverfahren

Bereiten Sie einen Bakterienstrich vor

Diese Vorbereitung erfolgt auf einem sauberen und trockenen Folie nach den Vorsichtsmaßnahmen der Sterilität.

Frovis trocknen

Lassen Sie den Abstrich bei Raumtemperatur trocknen.

Die Probe erhitzen

Die Probe muss erhitzt werden, indem Feuer auf die Folie unten aufgetragen wird. Eine Fixierung mit Alkohol kann vorgenommen werden, wenn der Geruch nicht mit Sputum vorbereitet ist (behandelt mit Natriumhypochlorit, um ihn zu bleichsen) und wenn es nicht sofort gefärbt wird.

M. Tuberkulose wird mit Bleichmittel und während des Färbeprozesses beseitigt. Die Thermofixierung des nicht behandelten Sputums wird nicht töten M. Tuberkulose, Während Alkoholfixierung Bakterizid ist.

Decken Sie den Fleck ab

Der Fleck ist mit der Fuchsin -Carbol -Lösung (primäre Grundfärbung) bedeckt.

Den Fleck erhitzen

Dies geschieht 5 Minuten. Sie sollten eine Dampfablösung (ca. 60 ° C) bemerken,. Es ist wichtig, nicht zu überhitzen und zu vermeiden, die Probe zu verbrennen.

In Bezug auf die Erwärmung des Flecks sollten Sie beim Erhitzen des Fuchsin -Carbol sehr vorsichtig sein, insbesondere wenn die Färbung auf einem Tablett oder einem anderen Behälter durchgeführt wird, in dem hochflammbare Chemikalien aus der vorherigen vorherigen Färbung gesammelt wurden.

Unter den Objektträgern sollte nur eine kleine Flamme unter Verwendung einer Tupferbeleuchtung aufgetragen werden, die zuvor mit wenigen Tropfen saurer Alkohol, Methanol oder 70 % Ethanol angefeuchtet wurde. Vermeiden Sie es, einen in Ethanol eingeweichten großen Tupfer zu verwenden, da dies ein Feuerrisiko darstellt.

Waschen Sie den Fleck

Diese Wäsche muss mit sauberem Wasser erfolgen. Wenn Leitungswasser nicht sauber ist, waschen Sie das Reiben mit gefiltertem oder destilliertem Wasser vorzugsweise.

Decken Sie den Abstrich mit saurem Alkohol ab

Dieser saure Alkohol muss bei 3 % liegen. Die Abdeckung wird 5 Minuten lang durchgeführt oder bis der Geruch ausreichend verfärbt ist, dh hellrosa.

Kann Ihnen dienen: Epiblast

Es muss berücksichtigt werden, dass saurer Alkohol entflammbar ist; Daher sollte es sehr sorgfältig verwendet werden. Vermeiden Sie es, Zündquellen nahe zu sein.

Waschen Sie den Fleck

Waschen sollte mit sauberem, destilliertem Wasser sein.

Decken Sie den Abstrich mit Farbstoff ab

Es kann sich 1 oder 2 Minuten lang Malachitgrün färben (0,5 %) oder Methylenblau (0,3 %) unter Verwendung der lauteren Zeit, wenn der Geruch dünn ist.

Waschen Sie den Fleck

Sauberes Wasser (destilliert) sollte erneut verwendet werden.

Abfließen

Die Rückseite des Objektträgers muss gereinigt werden und der Fleck wird in ein Entwässerungsregal gelegt, so dass er in die Luft trocknet (nicht zum Trocknen von Absorptpapier).

Untersuchen Sie den Abstrich im Mikroskop

Das Ziel von 100x und Immersionsöl sollte verwendet werden. Scannen Sie den Abstrich systematisch und schreiben Sie die relevanten Beobachtungen auf.

Interpretieren Sie die Ergebnisse

Theoretisch werden Mikroorganismen, die aus einer rötlichen Farbe gefärbt sind.

Im Gegenteil, wenn Mikroorganismen blau oder grün gefärbt sind, gelten sie je nach als Gegenkollegen verwendetes Farbstoff als negativ resistente Säure (AAR-) als negativ resistente Säure (AAR-) als negativ resistente.

Verweise

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